獻血者不規則抗體血液的調查分析及應用研究

余培瓊 黃小毅 黃鉅明 張 琦 陳雪英 李結敏

廣東省肇慶市中心血站，廣東肇慶 526000

不規則抗體多為免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）和免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）；通常人體血液中不存在不規則抗體，但作為機體的防疫機制，紅細胞免疫可以通過輸血、藥物制劑等的免疫刺激產生不規則抗體[1-2]。當血液中含有不規則抗體時極易引發免疫性溶血輸血反應，雖然我國正常人群血液中檢出不規則抗體的概率較低，但患者輸注不規則抗體可能會引發致命危險[3]。為了降低輸血反應，國內外越來越重視無償獻血工作中血液不規則抗體的篩查[4-5]。為了提升臨床輸血安全，本研究一方面對肇慶市無償獻血過程中的獻血者不規則抗體進行了篩查，建立不規則抗體獻血者電子檔案，另一方面通過對不規則抗體血液的洗滌制備以及臨床應用，驗證了不規則抗體血液采取科學處理后可應用于臨床，提升血液資源利用率。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇2021年4月至2022年4月肇慶市中心血站采集的61 700份無償獻血血液樣本（2 ml/份，EDTA-K2抗凝劑）為研究對象，獻血者資料齊全。標本采集72 h內進行不規則抗體檢測。研究對象資料的收集符合相關醫學倫理委員會規定。

1.2 方法

1.2.1 確定不規則抗體血液樣本洗滌方案 取23份

不規則抗體血液樣本，每1 U紅細胞懸液中加入0.9%氯化鈉溶液100～150 ml，混合均勻后4℃、3600 g，離心5 min，并去除白膜層和上清液；反復洗滌3次后，再加入0.9%氯化鈉溶液，使溶液容量達到1 U或2 U；留取其血清及洗滌紅細胞的上清液，并測定洗滌后殘留抗體及血清抗體效價，確定該類血液樣本的洗滌方案。

1.2.2 不規則抗體篩查 ①留取獻血者血液樣本，通過微板法進行ABO血型正反定型并檢測Rh血型；②對于O型紅細胞出現凝集、正反定型不符以及RhD（-）的血液樣本進行抗體篩查；③對抗體篩查結果陽性的樣本應用O型抗篩細胞，并通過抗球蛋白試驗、鹽水法檢測其抗體的分類及特異性。

1.2.3 微板法檢測方法及判定標準 ①按照微

孔板紅細胞凝集法原理，全血標本5 ml/份，質控品QC1和QC2均為10 ml/份，按照3000 r/min的速度離心12 min，微孔板采用12×10孔階梯型，樣本通過血型儀自動條碼閱讀、加樣、樣本分配以及試劑分配；將血型儀的孵育器溫度設置為（30.00±1.00）℃進行樣本孵育，孵育60 min后用儀器自帶的CCD圖像分析技術和電腦數據進行處理、分析判定，并傳輸打印結果。②血型檢測時每塊板檢測10個樣本，其布局依次是陰性鹽水對照REF，抗-D、抗-A、抗-B、Ac、Bc、Oc。③通過SPC、P/C、LIA三個參數判斷是否發生凝集，其判定標準如下：SPC＜10為凝集，SPC=10為可疑，SPC＞10為不凝集；P/C＜30為凝集，P/C為15～30為可疑，P/C＞15為不凝集；LIA＞300為凝集，LIA為100～300為可疑，LIA＜100為不凝集；判定是否發生凝集時以SPC結果為主，當P/C、LIA值為可疑時，按照SPC值判定結果，當SPC值為可疑時，由質管科再次鑒定。

1.2.4 抗球蛋白試驗（微柱凝膠法）、鹽水法 ①抗球蛋白試驗（微柱凝膠法）：按試劑說明書進行操作，在試管中加入50 μl譜細胞含100 μl血漿，在37 ℃下孵育30 min，鹽水洗滌3次，以3400 r/min的轉速離心1 min，之后加入50 μl多特異性抗球蛋白試劑，3400 r/min離心15 s后觀察是否出現凝集，出現凝集為陽性。②鹽水法：在試管中加入50 μl譜細胞含100 μl血漿，在室溫下放置30 min后以3400 r/min離心15 s，離心結束后觀察是否出現凝集現象，如出現凝集則為陽性。

1.2.5 不規則抗體血液的處置 ①將含有不規則抗體的獻血者信息錄入血液管理信息系統，建立專門的電子檔案，并定期進行電話回訪，分析評估，建立統一標準，設置相應的電腦信息提示，當該類獻血者再次獻血時可以幫助體檢醫生判斷是否能夠獻血或延期獻血或淘汰。②直接抗人球蛋白試驗（微柱凝膠法）陽性血液進行報廢處理，間接抗人球蛋白試驗（微柱凝膠法）陽性血液按照1.2.1的方法制備成洗滌紅細胞，無菌接駁留取樣品后通過抗球蛋白法、鹽水法檢測殘留抗體。

1.2.6 合格率計算 洗滌3次后無不規則抗體殘留且質量標準符合《全血及成分血質量要求》[6]（GB18469-2012）（以下簡稱《要求》）的發往臨床醫院，并追蹤應用情況；仍有殘留的加洗1～2次后留樣檢測，如果無抗體殘留且質量標準符合《要求》的發往臨床醫院；如果仍有殘留則報廢處理。RhD（-）血液可制備冰凍紅細胞臨床備用。合格率=洗滌3次后抗體殘留血液數/進行洗滌處理的血液總數×100%。

2 結果

2.1 不規則抗體血液樣本洗滌后抗體殘留情況

只含有IgM抗體的23份血液樣本按1.2.1流程洗滌后的合格率為91.30%（21/23），未合格的2袋中1袋“O”型洗滌3次殘留抗-A1效價為1，洗滌4次后無抗體殘留。由此可將1.2.1中血液洗滌流程定為含不規則抗體血液的標準化洗滌方法。具體洗滌后抗體殘留狀況見表1。

表1 23份未含不規則抗體血液洗滌后抗體殘留情況

2.2 獻血者不規則抗體篩查情況

61 700份無償獻血血液樣本中共檢出間接抗人球蛋白試驗陽性血液44份（0.07%）；其中IgM占54.55%（24/44），IgG占40.91%（18/44），IgM/IgG占4.55%（2/44）。見表2。

表2 獻血者不規則抗體篩查情況

2.3 不規則抗體血液抗體效價、特異性、類型及洗滌效果

44份不規則抗體血液按1.2.1流程洗滌后的合格率為90.91%（40/44），IgM類的合格率為100.00%（25/25），IgG類合格率為73.68%（14/19），IgG/IgM類合格率100.00%（1/1）；4份IgG-D類樣本不合格，1份洗滌4次后合格，3份洗滌5次后合格，未發往臨床應用。見表3。

表3 不規則抗體血液抗體效價、特異性、類型及洗滌效果

2.4 不規則抗體血液處理后臨床應用狀況

44份不規則抗體血液樣本經洗滌后，有11份應用于3家臨床機構，應用過程中均未發生輸血反應。

3 討論

無償獻血者的血液在臨床治療與搶救中發揮重要作用，其血液的安全性會直接影響患者的臨床治療效果及其生命安全[7]。雖然由于血液診斷篩查技術的發展及輸血流程的規范化管理，ABO血型不符所引發的急性溶血性輸血反應明顯減少；但由于血液成分復雜且多樣，加之患者體質差異，輸血過程中仍有發生不規則抗體所致遲發性溶血性輸血反應的風險[8-9]。研究顯示，血液中含有的不規則抗體是導致交叉配血困難、新生兒溶血病、遲發性溶血性輸血反應的重要危險因素[10]。進行血液抗體篩查，可以避免因獻血者血液中含有不規則抗體破壞輸血者紅細胞進而引發溶血性輸血反應，常用的篩查方法包括鹽水法、微板法、抗人球蛋白法等[11]。目前我國已有的血液抗體篩查結果顯示，不規則抗體血液的檢出率為0.02%～1.51%[12]。而本研究對肇慶市中心血站采集的61 700份無償獻血血液樣本進行抗體篩查，結果不規則抗體檢出率為0.07%，與國內血站檢出比例相符。近年，由于臨床血液診斷和篩查技術的發展和輸血流程管理的規范化，ABO血型不符所導致的急性溶血性輸血反應發生率明顯下降，但由于血液成分的多樣性及患者體質的差異，輸血階段仍有可能發生不規則抗體所導致的遲發性溶血性輸血反應。為了降低遲發性溶血性輸血反應發生風險，加強不規則抗體獻血者的管理，本血站建立了不規則抗體獻血者電子檔案，幫助體檢醫生判斷是否獻血、延期獻血或者淘汰，可以有效減少血液浪費。

本研究除了對獻血者不規則抗體進行篩查外，還根據篩查結果制訂不規則抗體血液處理原則。研究顯示，血液中的不規則抗體對輸血者的影響與其抗體效價、特異性以及輸注量等相關[13]。因為稀釋作用，只有在高效價、大劑量輸注含不規則抗體的血液時才會對輸血者造成不良影響[14]。為了提高輸血安全性，一般血站在檢出血液含不規則抗體時，會選擇將血液報廢。但為了提升血液資源利用率，臨床一直致力于不規則抗體的開發應用研究，并取得了一定的進展，如可以將含不規則抗體的血液制備成特殊抗體試劑進行稀有血型篩查；或者將血液中的紅細胞洗滌后應用于臨床，但目前關于該方面的詳細報道較少[15]。用大量等滲溶液對保存期內的懸浮紅細胞、全血進行洗滌制備成洗滌紅細胞，可以去除幾乎全部的血漿成分和部分非紅細胞成分，進而減少不規則抗體對輸血者紅細胞的破壞[16]。隨著不規則抗體血液制備處理應用研究的不斷深入，越來越多的研究證實將其制備處理應用于臨床是可行的[17]。臨床多將制備處理后的不規則抗體血液應用于過敏反應、自身免疫性溶血性貧血等患者中[18]。

本研究篩查出的44份不規則血液經洗滌制備處置后，整體洗滌紅細胞制備合格率為90.91%，IgM類合格率為100.00%，IgG類合格率為73.68%，IgM類抗體洗滌3次即可符合要求；當IgG類抗體效價＜8時，洗滌3次可符合要求，但效價≥8時，需加洗1～2次。這提示1.2.1的洗滌紅細胞制備的合格率較高，且IgM類的合格率比IgG類更好。而這或許與分子量大小有關，具體原因還需深入研究。總的來說將不規則液體洗滌制備后使用的方法是可行的，但受制備方法、人員操作等因素的影響，洗滌后血液可能仍舊有抗體殘留。為了保證洗滌后血液質量，需對其進行檢測直到檢測結果顯示無抗體殘留且符合《要求》才可發往臨床，以避免出現輸血反應。將本研究中經洗滌制備處理的11份不規則抗體血液應用于臨床且并未發生輸血反應。這初步驗證了將經洗滌制備后的不規則抗體血液應用于臨床是安全的。但后期仍有不少問題亟待解決，如0.9% 氯化鈉溶液保存洗滌紅細胞的周期僅為24 h，但初期醫務人員認知不足，導致了部分血液浪費。所以加強不規則抗體血液調查及應用研究的同時，也需要增強醫務人員和患者輸血相關知識培訓，提高血液利用率和安全性。

綜上所述，篩查獻血者血液中的不規則抗體，并建立不規則抗體獻血者電子檔案，可以有效降低輸血反應，對不規則抗體血液采取科學處理后應用于臨床既可以提升血液資源利用率，又可以提升輸血安全性。