丁氟螨酯在枸杞上的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性和殘留消解研究

楊 靜，吳 燕，劉 霞，陳 翔，趙子丹，茍春林

（寧夏農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，寧夏回族自治區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，寧夏 銀川 750002）

枸杞含有大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有美容養(yǎng)顏、保肝明目等多種保健功效[1-3]。它作為寧夏的特色農(nóng)產(chǎn)品，深受大眾喜愛(ài)，但在生長(zhǎng)過(guò)程中易受到病蟲害侵染[4-7]。丁氟螨酯作為一種新型?；鶜Ⅱ齽?，主要用于蔬菜、茶樹、果樹等農(nóng)作物和花卉的螨類防治[8-11]，與現(xiàn)有的殺蟲劑無(wú)交互抗性[12-17]，對(duì)幼蟲時(shí)期的螨類活性更高[18]。目前，我國(guó)丁氟螨酯僅在番茄、草莓和柑橘上有登記信息[19]。近年來(lái)，丁氟螨酯在農(nóng)作物上的檢測(cè)方法已有報(bào)道。張鴻超等[20]采用QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定了黃瓜中丁氟螨酯等6 種典型農(nóng)藥；趙來(lái)成[21]采用超高效液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定了草莓中丁氟螨酯等4 種殺螨劑殘留量。但目前，關(guān)于枸杞中丁氟螨酯及其代謝物2-三氟甲基苯甲酸殘留分析方法的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文建立了枸杞中丁氟螨酯及其代謝物2-三氟甲基苯甲酸的QuEChERS-超高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，為該農(nóng)藥在枸杞上的登記提供理論依據(jù)，以期為丁氟螨酯在枸杞上科學(xué)、合理、安全的使用提供保障。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料與試劑

丁氟螨酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度94.9%），上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；2-三氟甲基苯甲酸（純度99.2%），上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司；甲醇（色譜純），德國(guó)默克公司；氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈（色譜純），美國(guó)Fisher 公司；甲酸（色譜純），光復(fù)精細(xì)化工研究所；乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、石墨化炭黑（GCB）和十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18），均購(gòu)于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備

Thermo Quantum Access 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó)Thermo 公司；T25 型高速分散機(jī)，MS3 digital 型渦旋混合器，德國(guó)IKA 公司；TDL-40C 型離心機(jī)，上海安亭儀器廠；XS205 型、PL202-L 型電子天平，梅特勒托利多科技（中國(guó)）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品的制備與保存

將田間枸杞鮮果除去青果、病果、爛果、果梗、葉子等雜質(zhì)，充分混勻后分成兩份，一份用四分法縮分，取300 g 樣品，直接裝入樣品容器中，貼好標(biāo)簽于-18 ℃冰柜冷凍保存，室內(nèi)檢測(cè)時(shí)解凍后打成勻漿狀，待測(cè)。另一份制成枸杞干果，方法為：每公斤新鮮枸杞中直接加入10～20 g 食用級(jí)碳酸鈉或碳酸氫鈉，混勻，在封閉容器內(nèi)放置20～30 min 進(jìn)行脫蠟，再晾曬制干，貼好標(biāo)簽后于-18 ℃冰柜冷凍保存，室內(nèi)檢測(cè)時(shí)加液氮粉碎成粉末狀，待測(cè)。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用甲醇將丁氟螨酯、2-三氟甲基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品分別配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L 的標(biāo)樣儲(chǔ)備液，分別移取單標(biāo)儲(chǔ)備液各0.1 mL 配制成10 mg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃避光保存。上機(jī)測(cè)定0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L 系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 樣品前處理

1.2.3.1 枸杞鮮果

將采集的枸杞鮮果用組織搗碎機(jī)勻漿。稱取勻漿樣品10.00 g 置于50 mL 具塞離心管中，加入20.0 mL乙腈后勻漿2 min，然后加入4.00 g 氯化鈉，振搖約2 min，以4 000 r/min 離心6 min，吸取2 mL 上清液于盛有100 mg C18、100 mg MgSO4和5 mg GCB 的離心管中渦旋1 min，于4 000 r/min 離心5 min，上清液過(guò)0.22 μm 濾膜，待測(cè)。

1.2.3.2 枸杞干果

將另一份枸杞鮮果制干后，加液氮粉碎成粉末狀。稱取枸杞干果5.00 g 于50 mL 離心管中，加入10.00 mL 水，浸泡30 min 后加入20.0 mL 乙腈，勻漿2min，再加入4.00g 氯化鈉，振搖約2min，以4 000r/min離心6min，吸取2mL 上清液于盛有100mg C18、100 mg MgSO4和5 mg GCB 的離心管中渦旋1 min，以4 000 r/min 離心5 min，上清液過(guò)0.22 μm 濾膜，待測(cè)。

1.2.4 添加回收試驗(yàn)

向枸杞鮮果和干果空白樣品中分別添加0.01、0.1、1.0 mg/kg 3 個(gè)水平的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照所建立的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別稱取枸杞鮮果空白樣品10.00 g，枸杞干果空白樣品5.00 g 于50 mL 離心管中，按照0.5 mg/kg的添加水平直接在空白樣品中分別添加丁氟螨酯及其代謝物2-三氟甲基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將離心管密封保存于-18 ℃冰箱中。

1.2.6 儀器條件

1.2.6.1 液相色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse plus C18（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）；柱溫：45 ℃；流動(dòng)相：甲醇-0.1%甲酸水；流速：0.30 mL/min；進(jìn)樣量：2.0 μL。洗脫方式為梯度洗脫，洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 液相色譜條件Table 1 Liquid chromatographi conditions

1.2.6.2 質(zhì)譜（MS）條件

離子源：ESI+；噴霧電壓：3.5 kV；鞘氣：30 arb；輔氣：10 arb；毛細(xì)管傳輸溫度：350 ℃；碰撞壓力：0.199 5 Pa；掃描模式：選擇離子監(jiān)測(cè)（SRM）。質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。

表2 質(zhì)譜條件Table 2 MS parameters

1.2.7 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2010 軟件分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法驗(yàn)證

分別準(zhǔn)確吸取質(zhì)量濃度為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L 的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。在“1.2.6”檢測(cè)條件下進(jìn)行測(cè)定。圖1 為0.1 mg/L 丁氟螨酯及其代謝物的色譜圖。以丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y），制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到丁氟螨酯線性方程：y=8×106x+217 058，r=0.998 7；2-三氟甲基苯甲酸線性方程：y=2×106x+47 861，r=0.997 3?？梢?jiàn)，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸在0.01～1.0 mg/L 范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于0.99，線性關(guān)系較好。

圖1 0.1 mg/L 丁氟螨酯及其代謝物的色譜圖Fig.1 Chromatograms of cyflumetofen and its metabolites(0.1 mg/L)

在不含目標(biāo)化合物的枸杞鮮果和干果中分別添加0.1 mg/kg 的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，結(jié)果見(jiàn)圖2。根據(jù)添加回收率試驗(yàn)，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的方法定量限均為0.01 mg/kg。

圖2 枸杞中丁氟螨酯及其代謝物的色譜圖Fig.2 The chromatograms of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries

2.2 方法回收率和精密度

在枸杞鮮果和干果中分別添加0.01、0.1、1.0 mg/kg 3 個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)水平的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品，按“1.2.3”中前處理方法對(duì)樣品進(jìn)行處理、測(cè)定，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表3。丁氟螨酯在枸杞鮮果中平均回收率在100.4%～102.7%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.6%～11.6%之間，在枸杞干果中平均回收率在80.7%～103.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.5%～7.1%之間。2-三氟甲基苯甲酸在枸杞鮮果中平均回收率在87.2%～110.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.1%～6.2%之間，在枸杞干果中平均回收率在95.0%～111.1%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.3%～6.1%之間?；厥章屎途芏染軌驖M足枸杞中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的檢測(cè)要求，符合農(nóng)藥殘留分析的要求[22-23]。

表3 枸杞中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)Table 3 Recovery rate and relative standard deviations of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries(n=5)

2.3 丁氟螨酯及其代謝物在枸杞中的穩(wěn)定性

樣品制備后，對(duì)丁氟螨酯及其代謝物進(jìn)行測(cè)定，取樣間隔為0 d、1 個(gè)月、3 個(gè)月、6 個(gè)月、8 個(gè)月、12 個(gè)月、15 個(gè)月，檢測(cè)結(jié)果如表4 所示。枸杞鮮果中丁氟螨酯的降解率為10%～23%，2-三氟甲基苯甲酸的降解率為2%～27%；枸杞干果中丁氟螨酯的降解率為2%～26%，2-三氟甲基苯甲酸的降解率為3%～24%。每個(gè)取樣間隔的儲(chǔ)藏試驗(yàn)樣品中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的降解率均小于30%，表明在儲(chǔ)藏溫度低于-18 ℃、儲(chǔ)藏時(shí)間為15 個(gè)月的試驗(yàn)期間，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸在枸杞鮮果、枸杞干果基質(zhì)中均比較穩(wěn)定。

表4 丁氟螨酯及其代謝物在枸杞中的降解率Table 4 The degradation rate of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries單位：%

2.4 丁氟螨酯在枸杞上的消解動(dòng)態(tài)

在寧夏和青海兩地開展殘留消解試驗(yàn)，將20%丁氟螨酯懸浮劑以1 000 倍液（有效成分：200 mg/kg）噴施于枸杞上，分別采集藥后2 h 及3、5、10、14、21 d的枸杞樣品，測(cè)定所采集樣品中丁氟螨酯的殘留量，結(jié)果如圖3 所示。青海地區(qū)的丁氟螨酯殘留量為0.089～1.400 mg/kg，消解動(dòng)態(tài)方程為Ct=0.729 4 e-0.122t，半衰期為5.7 d；寧夏地區(qū)的丁氟螨酯殘留量為0.57～1.80 mg/kg，消解動(dòng)態(tài)方程為Ct=1.472 8 e-0.042t，半衰期為16.5 d。消解動(dòng)態(tài)的試驗(yàn)結(jié)果表明：丁氟螨酯在枸杞中的殘留量隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，且該農(nóng)藥殘留量與時(shí)間呈指數(shù)關(guān)系，其消解動(dòng)態(tài)曲線符合一級(jí)動(dòng)態(tài)學(xué)方程Ct=C0e-kt。寧夏地區(qū)丁氟螨酯殘留量比青海地區(qū)高，且降解速率也較慢，說(shuō)明枸杞生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)丁氟螨酯的降解有一定影響。

圖3 丁氟螨酯在枸杞上的消解動(dòng)態(tài)曲線Fig.3 Digestion dynamic curve of cyflumetofen in Goji berries

3 結(jié)論

本文建立了一種QuEChERS-超高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)枸杞中丁氟螨酯及其代謝物的方法。在儲(chǔ)藏溫度-18 ℃、儲(chǔ)藏時(shí)間為15 個(gè)月的試驗(yàn)期間，丁氟螨酯及其代謝物在枸杞基質(zhì)中比較穩(wěn)定。消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)表明，環(huán)境對(duì)枸杞中丁氟螨酯的降解有一定影響。該方法操作簡(jiǎn)單快速，準(zhǔn)確度和精密度均較高，可用于枸杞中丁氟螨酯及其代謝物的檢測(cè)，也為其他農(nóng)作物中丁氟螨酯及其代謝物的殘留檢測(cè)提供了參考依據(jù)。