血清LPO、APN和TGF-β1水平檢測對酒精性肝硬化患者病情嚴重程度和預后評估的價值

石紅 薛小春 王德琴 呂忠美

酒精性肝病(ALD)是因長期大量攝入的乙醇在肝內(nèi)代謝及并生成其毒性產(chǎn)物，結合肝細胞膜上的蛋白質導致的慢性肝損害傷，主要發(fā)病機制至今尚未明確，主要與氧化應激反應、脂質代謝紊亂、細胞損傷和腸道菌群失調等有關[1]。ALD的表現(xiàn)為酒精性脂肪肝(AFL)、酒精性肝炎(AH)和酒精性肝硬化(ALC)，甚至發(fā)展到肝病的終末階段，早期診斷和正確評估顯得至關重要[2]。過氧化脂質(LPO)是氧自由基與多聚不飽和脂肪酸反應的產(chǎn)物，能破壞肝細胞膜和抑制免疫功能[3]；脂聯(lián)素(APN)是一種胰島素增敏激素，能調節(jié)糖脂代謝和肝細胞內(nèi)皮免疫功能[4]；轉化生長因子-β1(TGF-β1)能調節(jié)多種細胞的生長、分化、遷移和侵襲，與肝細胞的損害密切相關[5]。本研究探討血清LPO、APN和TGF-β1水平的聯(lián)合檢測對ALD疾病嚴重程度和預后評估的臨床價值，為ALD的早期診斷、干預治療和預后評估提供參考依據(jù)。

資料與方法

一、一般資料

選擇南通大學附屬海安醫(yī)院消化內(nèi)科2019年1月—2021年6月收治的152例ALD患者，作為研究對象。(1)納入標準：符合《酒精性肝病基層診療指南(2019年)》中的診斷標準[6]；年齡35～70歲，患者知情同意和醫(yī)學倫理審批。(2)排除標準：非酒精性肝病，病毒性肝炎，自身免疫性肝病，藥物性肝損傷，肝膽系統(tǒng)惡性腫瘤、炎癥和畸形；全身急慢性炎癥，嚴重糖尿病和心腦血管疾病。根據(jù)指南將患者分為AFL組56例，AH組32例，ALC組64例。AFL組中男性53例，女性3例；年齡37～70歲，平均(49.63±5.28)歲。AH組中，男性32例，女性2例；年齡36～69歲，平均(49.47±5.23)歲。ALC組中，男性58例，女性4例；年齡35～68歲，平均(49.56±5.31)歲。三組一般資料比較具可比性(P>0.05)。

二、研究方法

(一)臨床分組 (1)不同病情程度分組：將ALC組按照改良Child-Pugh分級標準，分為A級亞組(5～6分)16例，B級亞組(7～9分)27例，C級亞組(≥10分)21例。(2)不同疾病預后分組：按照終末期肝病模型(MELD)評分標準[7]，分為輕度亞組(≤9分)23例，中度亞組(10～19分)25例，重度亞組(≥20分)16例。

(二)檢測方法 采集空腹靜脈血樣進行預處理，使用全自動生化分析儀測定血清總膽紅素(TBil)和白蛋白(Alb)水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清LPO、APN和TGF-β1水平；試劑盒購自上海研生公司，嚴格按照儀器和試劑盒的說明書進行檢測。采用彩超的瞬時彈性成像技術，檢測肝臟硬度值(LSM)水平。

(三)分析方法 (1)比較AFL、AH和ALC三組的血清LPO、APN和TGF-β1水平。(2)比較ALC患者中改良Child-Pugh分級3個亞組的血清LPO、APN和TGF-β1水平。(3)比較ALC患者中MELD分級3個亞組的血清LPO、APN和TGF-β1水平。(4)分析ALC患者的血清LPO、APN和TGF-β1水平與血清TBil、Alb和LSM水平之間的相關性。(5)分析單獨檢測血清LPO、APN、TGF-β1水平和聯(lián)合檢測的診斷效能。

三、統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0軟件處理。計量指標以表示，兩組比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析(F檢驗)。指標間的相關性采用Pearson相關分析，繪制ROC曲線評價各指標的診斷效能。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

一、三組LPO、APN和TGF-β1水平比較

ALC組的LPO和TGF-β1水平顯著高于AH組和AFL組，呈遞增趨勢；APN水平顯著低于AH組和AFL組，呈遞減趨勢(P<0.05)。見表1。

表1 三組LPO、APN和TGF-β1水平比較(±s)

二、ALC組不同病情程度亞組LPO、APN和TGF-β1水平比較

ALC組患者三個不同病情程度亞組中，Child-Pugh C級亞組的LPO和TGF-β1水平顯著高于B級和A級亞組，呈遞增趨勢；APN水平顯著低于B級和A級亞組，呈遞減趨勢(P<0.05)。見表2。

表2 ALC組不同病情程度亞組LPO、APN和TGF-β1水平比較(±s)

三、ALC組不同疾病預后亞組LPO、APN和TGF-β1水平比較

ALC組患者三個不同疾病預后亞組中，重度亞組的LPO和TGF-β1水平顯著高于中度和輕度亞組，呈遞增趨勢；APN水平顯著低于中度和輕度亞組，呈遞減趨勢(P<0.05)。見表3。

表3 ALC組不同疾病預后亞組LPO、APN和TGF-β1水平比較(±s)

四、ALC患者LPO、APN和TGF-β1水平與TBil、Alb和LSM水平的相關性

Pearson 相關性分析結果顯示，ALC患者的LPO和TGF-β1水平與TBil和LSM水平呈正相關，與Alb水平呈負相關；APN水平與Alb水平呈正相關，與TBil和LSM水平呈負相關(P<0.05)。見表4。

表4 ALC患者LPO、APN和TGF-β1水平與TBil、Alb和LSM水平的相關性分析

五、LPO、APN和TGF-β1水平對ALC患者的評估價值分析

ROC曲線顯示，LPO、APN和TGF-β1水平以及三者聯(lián)合診斷ALC的AUC分別為 0.806、0.784、0.835和 0.928，聯(lián)合診斷的敏感度和特異度均顯著高于任意單項的檢測結果(P<0.05)。見表5。

表5 LPO、APN和TGF-β1水平對ALC患者的評估價值分析

討 論

目前臨床上對ALD尚缺乏特效的治療手段，早期診斷、病情評估和及時給予有效干預，可延緩肝功能的損害和改善疾病預后。改良Child-Pugh分級標準是臨床評估肝臟儲備功能的常用指標，但不能明確肝纖維化的程度和分期；MELD評分能預測慢性肝病和終末期肝病患者的短期和中期死亡率，可客觀評估病情嚴重程度和疾病預后[7]。因此，本研究將Child-Pugh分級和MELD評分作為反映ALD患者病情嚴重程度和疾病預后的指標。

有研究報道[8]，乙醇在肝內(nèi)代謝過程中產(chǎn)生大量的氧自由基，誘導肝臟脂質過氧化反應是ALD患者肝損害傷的重要因素之一。長期大量攝入的乙醇促進機體產(chǎn)生過量活性氧和氧自由基，消耗了大量的抗氧化物質，激活蛋白質和脂質過氧化反應，顯著提高機體的氧化應激水平，內(nèi)毒素和多種生物活性物質誘導和加重肝臟炎癥反應，破壞線粒體功能和導致肝細胞變性[9]。本研究顯示，ALC組的LPO水平顯著高于AH組和AFL組，呈遞增趨勢(P<0.05)，提示LPO水平隨著ALD病情的發(fā)展而逐漸升高。栗紅江等[10]研究報道，ALC組患者的血清LPO水平顯著高于健康人、AFL和AH患者，說明隨著ALD病情的加重，血清LPO水平逐漸升高，驗證了本研究結果。LPO是ALD患者產(chǎn)生過量的氧自由基導致線粒體內(nèi)過氧化后，與不飽和脂肪酸產(chǎn)生的過氧化物，降低線粒體膜和提高通透性，從而損傷肝細胞膜生理結構和功能[11]。本研究顯示，ALC患者的LPO水平隨著Child-Pugh分級標準和MELD評分的增加而逐漸升高(P<0.05)，提示血清提示LPO水平與ALD的病情嚴重程度和疾病預后呈正相關。

相關研究認為[12]，ALD的發(fā)病機制與乙醇導致的脂質代謝紊亂和脂肪組織與肝臟逐漸的相互作用密切相關，其中脂肪因子發(fā)揮著重要作用。ALD患者的肝臟代謝紊亂和肝細胞損傷，氧化應激和炎癥水平升高導致炎癥信號通路調節(jié)功能失衡，誘發(fā)肝臟脂質代謝紊亂，肝細胞胞漿中的脂滴積累和形態(tài)顯著增大，肝內(nèi)脂肪堆積加重，血清甘油三酯和低密度脂蛋白含量明顯升高，APN含量降低[13]。本研究顯示，ALC組的APN水平顯著低于AH組和AFL組，呈遞減趨勢(P<0.05)，提示LPO水平隨著ALD病情的發(fā)展而逐漸下降。APN是脂肪細胞分泌的內(nèi)源性多肽類蛋白質，是目前已知的唯一的脂肪含量呈負相關的脂肪因子，作為調節(jié)因子能調控機體脂質代謝，改善胰島素抵抗和調節(jié)糖脂代謝水平[14]。本研究顯示，ALC患者的APN水平隨著Child-Pugh分級標準和MELD評分的增加而逐漸下降(P<0.05)，提示血清提示APN水平與ALD的病情嚴重程度和疾病預后呈負相關。趙春娟等[15]研究報道，APN能協(xié)調過氧化物酶體增殖物減輕機體的炎癥反應，ALC患者的血清APN水平明顯低于較健康人群，說明APN的表達的降低參與了ALC疾病的發(fā)生和發(fā)展發(fā)生、發(fā)展，與本研究結果一致。

乙醇導致的細胞損傷是ALD的關鍵驅動因素，肝細胞線粒體是乙醇攻擊的首選靶點[16]。乙醇介導的過氧化應激反應使多種氧化物合成增加，降低線粒體呼吸鏈功能，改變線粒體磷脂生物膜的滲透性；促使線粒體蛋白質高度乙酰化，損害線粒體的DNA合成功能，使肝細胞缺氧加重和啟動細胞凋亡程序；激活Kupffer細胞和誘導中性粒細胞炎癥浸潤，激活肝臟星狀細胞(HSC)分泌多種生長因子和膠原纖維，誘發(fā)肝纖維化[17]。GF-β1能促進成纖維細胞的轉化和生成多種細胞因子，是介導肝損傷和肝纖維化的最關鍵的細胞因子之一[18]。本研究顯示，ALC組的TGF-β1水平顯著高于AH組和AFL組，呈遞增趨勢(P<0.05)，提示TGF-β1水平隨著ALD病情的發(fā)展而逐漸升高。國外文獻報道[19]，肝纖維化患者血清TGF-β1水平呈高表達，與肝功能下降和肝纖維化程度呈正相關，與本研究結果一致。肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展發(fā)生、發(fā)展，與HSC的激活和細胞外基質(ECM)產(chǎn)生降解失調密切相關，TGF-β1等細胞因子是啟動精息靜息狀態(tài)HSC激活和轉化的初始信號，誘導肝纖維化發(fā)生和進展[20]。本研究顯示，ALC患者的TGF-β1水平隨著Child-Pugh分級標準和MELD評分的增加而逐漸升高(P<0.05)，提示血清提示TGF-β1水平與ALD的病情嚴重程度和疾病預后呈正相關。陳芳等[21]研究報道，肝硬化患者的血清TGF-β1水平高于健康者，且隨著Child-Pugh分級的升高而遞增，與其他肝纖維化標志物呈正相關，可作為評估肝硬化病情嚴重程度和判斷預后的可靠指標。

TBil反映肝臟的膽紅素代謝水平和膽汁淤積程度，血清水平升高提示肝臟代謝功能障礙；Alb反映肝臟的合成功能，血清水平下降提示肝臟儲備功能減退和預后不良。LSM為非創(chuàng)傷性檢測方法，能直觀反映肝損傷和肝纖維化程度，與肝硬化的嚴重程度呈正相關[22]。本研究經(jīng)Pearson 相關性分析結果顯示，ALC患者的LPO和TGF-β1水平與TBil和LSM水平呈正相關，與Alb水平呈負相關；APN水平與Alb水平呈正相關，與TBil和LSM水平呈負相關，提示ALC患者的病情越嚴重和預后越差，LPO和TGF-β1水平越高，APN水平越低，在一定程度上可反映ALC患者的病情嚴重程度和疾病預后，這與栗紅江[10]、趙春娟[15]和陳芳等[21]研究的結果相符。

本研究經(jīng)過進一步采用ROC曲線分析顯示，對ALC患者采用LPO、APN和TGF-β1水平以及三者聯(lián)合檢測的AUC分別為 0.806、0.784、0.835和 0.928，提示LPO、APN和TGF-β1三種指標聯(lián)合檢測的效能顯著高于任一單項檢測，對ALC患者病情嚴重程度和疾病預后的預測價值較高。

綜上所述，ALC患者的LPO、APN和TGF-β1與病情嚴重程度和疾病預后顯著相關，聯(lián)合檢測對早期診斷、臨床治療和預后評估的臨床價值較高。當然，本研究也存在一些不足，比如樣本量相對較小、未能對個體差異和治療方案的分組不細等，以待在進一步研究中證實。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。