柴芎頭痛顆粒對偏頭痛模型大鼠行為學及相關神經遞質含量的影響

丁云錄，李曉兵，歐喜燕，李馳坤，趙德喜

（長春中醫藥大學附屬醫院，長春 130021）

偏頭痛是一種臨床常見的慢性神經血管性疾患，病因復雜，頻繁發作，嚴重影響患者的生活與工作[1-2]。柴芎頭痛顆粒由柴胡、川芎、黃芩、全蝎、蜈蚣、姜半夏、人參等中藥組成，有和解少陽、疏肝解郁、清熱瀉火、通絡止痛之效，既可預防頭痛再發，又可止痛，臨床治療偏頭痛肝郁化火證療效明顯[3-4]。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 動物，SPF 級SD 大鼠，雌雄各半，體質量170～190 g。動物合格證號：SCXK-（遼）2020-0001，購于遼寧長生生物技術股份有限公司。藥品，柴芎頭痛顆粒，規格：每袋10 g，批號：20200701，由吉林省中醫藥科學院植物化學研究中心提供。正天丸，規格：每盒6 g×10 袋，批號：2003008H，華潤三九醫藥股份有限公司。硝酸甘油注射液，規格：1 mL，每盒5 mg×10 支，批號：2005161，河南潤弘制藥股份有限公司。試劑，5-羥色胺（5-HT）試劑盒，規格：每盒48 T，批號：20201028-30019A。5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA）試劑盒，規格：每盒48 T，批號：20201028-30018A、β-內啡肽（β-EP）試劑盒，規格：每盒48 T，批號：20201028-30165A、多巴胺（DA）試劑盒，規格：每盒48 T，批號：20201028-30326A。一氧化氮（NO）試劑盒，規格：每盒48 T，批號：20201028-30968A，黃石研科生物科技有限公司。儀器，BIO680 酶標儀，Japan BIO RAD 公司；HH·SY21-Ni 電熱恒溫水浴鍋，北京長源試驗設備廠；Biofuge Stratos 臺式高速冷凍離心機，德國賀利氏公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 試驗動物購入后，適應環境3 d，隨機分為正常對照組、模型對照組、陽性對照藥正天丸3.2 g/kg 組、柴芎頭痛顆粒5.36、2.68、1.34 g/kg 劑量組，共6 組，每組12 只大鼠。

1.2.2 硝酸甘油型偏頭痛大鼠模型制備 按文獻[5-9]操作方法，將硝酸甘油注射液在大鼠頸部皮下注射制模（10 mg/kg），對照組大鼠同期頸部皮下注射0.9%氯化鈉溶液2 mL/kg。

1.2.3 給藥方法 預防性給藥1 周，每日灌胃1 次，每周稱量體質量1 次。

1.2.4 檢測指標 行為學指標：1）記錄大鼠制模后耳紅開始及消失時間；2）記錄大鼠制模后撓頭開始及消失時間。血清學指標：實驗結束，麻醉、腹主動脈取血，離心取血清，按試劑盒說明書檢測定各組大鼠血清中5-羥色胺（5-HT）、5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA ）、β-內啡肽（β-EP）、多巴胺（DA）、一氧化氮（NO）水平。

1.3 統計學方法 數據統計采用SPSS 22.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（）表示，組間采用t檢驗，以P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 柴芎頭痛顆粒對偏頭痛模型大鼠耳紅時間、抓耳時間影響 柴芎頭痛顆粒5.36 g/kg 劑量組與模型組耳紅開始時間比較明顯延長（P＜0.05）；柴芎頭痛顆粒2.68、1.34 g/kg 劑量組與模型組抓耳開始時間比較明顯延長（P＜0.05）。柴芎頭痛顆粒5.36、2.68 g/kg 劑量組及正天丸組耳紅及撓頭消失的時間較模型組大鼠明顯縮短（P＜0.01 或P＜0.05）。見表1。

表1 柴芎頭痛顆粒對偏頭痛模型大鼠耳紅時間、抓耳時間影響（，n =12）

表1 柴芎頭痛顆粒對偏頭痛模型大鼠耳紅時間、抓耳時間影響（，n =12）

注：與模型組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

2.2 柴芎頭痛顆粒對偏頭痛模型大鼠血清中5-HT、5-HIAA、β-EP、NO和DA含量影響 本實驗結果顯示，模型組與對照組比較，大鼠血清中5-HT、DA 含量顯著降低、5-HIAA 含量顯著升高（P＜0.01），預防性給予柴芎頭痛顆粒藥物治療1 周后，柴芎頭痛顆粒高、中、低劑量組大鼠血清中5-HT、DA 含量顯著升高、5-HIAA 含量顯著降低，與模型對照組比較差異明顯（P＜0.01 或P＜0.05）。本實驗結果表明，柴芎頭痛可以提高硝酸甘油致大鼠偏頭痛動物模型血清中5-HT、DA 含量，并降低5-HIAA 含量。預防性給予柴芎頭痛顆粒藥物治療1 周后，柴芎頭痛顆粒高、中、低劑量組大鼠血清β-EP 含量顯著提高，與模型對照組比較差異明顯（P＜0.01 或P＜0.05）。本實驗中，復制偏頭痛大鼠模型成功后，模型組大鼠血清中NO 含量與對照組比較明顯升高（P＜0.01），預防性給予柴芎頭痛顆粒藥物治療1 周后，柴芎頭痛顆粒高、中劑量組可以顯著降低大鼠血清中NO含量，與模型對照組比較差異明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 柴芎頭痛顆粒對偏頭痛模型大鼠血清中5-HT、5-HIAA、β-EP、NO 和DA 含量影響（，n =12）

表2 柴芎頭痛顆粒對偏頭痛模型大鼠血清中5-HT、5-HIAA、β-EP、NO 和DA 含量影響（，n =12）

注：與模型組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

3 討論

偏頭痛是常見的多發性疾病，在其發病機理的研究中，由于整個過程中伴隨著血管的舒縮和血流速度的改變，所以血管的舒縮機制占有十分重要的地位。硝酸甘油型偏頭痛模型既具有與人類偏頭痛發作的時相性，又具有轉化為中醫證候屬性的可操作性與適用性。其造模的主要原理之一是硝酸甘油在機體內通過一系列生理、生化反應，介導神經源性炎癥引發偏頭痛，能較好地模擬人類偏頭痛發病時的表現，其行為癥狀變化是用于客觀且能量化評價偏頭痛治療藥物療效的合理指標[10-11]。

偏頭痛與神經遞質、血管活性物質的釋放和代謝密切相關，當這些相關介質調節失衡將引發偏頭痛發作，5-HT、DA 與偏頭痛發作有關[12-14]。5-HT 是偏頭痛發作中重要的神經遞質，是腦循環中強烈的血管收縮胺，可加重偏頭痛相關癥狀[15-16]。DA 是機體一種重要的兒茶酚胺類神經遞質，可興奮三叉神經系統中DA 受體，使三叉頸復合體神經元難于激活，阻斷痛感神經信號通路的傳導，減輕疼痛[17-19]。偏頭痛發作過程中始終存在顱內血管舒縮障礙和5-HT 等神經遞質含量的改變。研究[20-23]表明，偏頭痛患者頭痛發作期間血漿5-HT 降低，5-HT 降解導致其代謝產物5-HIAA水平升高，許多藥物通過作用于5-HT受體治療偏頭痛。本實驗結果顯示，柴芎頭痛顆粒通過調節神經遞質的釋放，抑制調節失衡，緩解神經源性炎癥的發生。

β-內啡肽（beta-endorphin，β-EP）是體內鎮痛系統的主要遞質，偏頭痛與內源性阿片肽系統的障礙密切相關，偏頭痛病人腦脊液β-EP 與正常人相比含量顯著減少，且程度與病情嚴重密切相關[24]。偏頭痛病人血清β-EP 含量較正常人降低，發作期與發作末期較間歇期更低，β-EP 減少及內源性阿片系統的功能紊亂可能是偏頭痛發作的啟動因素之一[25-27]。NO 是偏頭痛發生的啟動因子，既可直接擴張血管，又可協同其他神經遞質觸發神經源性炎癥、易化傷害痛覺沖動的中樞傳遞，因此認為NO 在偏頭痛和其他血管性頭痛的發病過程中起重要作用[28-29]。本研究結果顯示，柴芎頭痛顆粒通過升高β-EP 含量，顯著降低血清中NO 濃度，調節腦血管舒縮功能紊亂、抑制NO 的合成，改善偏頭痛的癥狀，減少偏頭痛的發生。

本實驗結果表明，柴芎頭痛顆粒對實驗性偏頭痛模型大鼠具有顯著的鎮痛作用，通過調節 5-HT、5-HIAA、β-EP、NO 和DA 等與疼痛相關的血活性物質及神經遞質的水平，改善血管舒縮功能障礙，有效預防與治療偏頭痛。