新生兒聽力與聾病易感基因聯合篩查在新生兒聽力隨訪工作中的價值

張 春

廣西壯族自治區人民醫院產科，廣西南寧 530021

小兒比較常見的缺陷為聽力障礙，新生兒聽力篩查的工作屬于重中之重，在我國也陸續展開，目前對于新生兒的聽力篩查、確診、隨訪已成為系統性工作[1]。篩查的策略和手段正在不斷創新和改進，同時新生兒聾病也實現了早發現、早診斷、早干預，隨訪工作在篩查過程中屬于較大的難題。未經初次篩查的兒童，有超過50%的人員無法隨訪[2]。新生兒聽力與聾病易感基因聯合篩查是目前我國的試點工作，可以在早期發現遲發性耳聾患兒并進行隨訪，以期達到早干預、早診斷、早治療的目的[3]。本研究選取2018年12月至2021年12月廣西壯族自治區人民醫院（我院）出生的新生兒10 241例，對所有新生兒均進行聽力與聾病易感基因聯合篩查，同時對后期工作進行隨訪，了解其價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年12月至2021年12月于我院出生的新生兒10 241例，均進行新生兒聽力與聾病易感基因聯合篩查。納入標準：①新生兒apgar評分＞7分；②出生1～50 d；③妊娠周期為38～40周；④新生兒體重＞1450 g；⑤家屬知曉本研究，簽署知情同意書。排除標準：①新生兒臟腑功能較弱，10 min之內不能自主呼吸、肌張力較低；②妊娠期宮內感染者；③有先天性耳聾家族史；④有細胞性腦膜炎、面部畸形、高膽紅素血癥；⑤胎兒時期患有梅毒、皰疹、風疹等；⑥有耳毒性藥物使用史；⑦感覺神經性聽力損傷者；⑧機械給氧＞9 d者；⑨重癥監護室＞5 d者。同時，結合基因篩查的結果確定入選隨訪對象的標準：①我院出生未進行聽力初篩者；②我院聽力初篩未通過且未參加復篩者；③聽力復篩未通過者；④出生時存在聾病高危因素者；⑤基因篩查結果異常者。符合上述任一條件者即為本研究重點隨訪對象。本研究經醫院醫學倫理委員會批準（倫理-KY-LW-2018-05號）。

1.2 方法

聽力篩查使用聽力篩查儀，初次篩查未通過的新生兒42 d后復查。

新生兒在測試之前均由專業醫師對耳道實施檢查，如果新生兒的胎脂較多，需要通過檢耳鏡進行相關清理，保證其通暢。使用晶芯十五項遺傳性耳聾基因檢測試劑盒（微陣列芯片）（北京博奧晶典生物技術有限公司）、晶芯十五項遺傳性耳聾基因檢測儀器（北京博奧晶典生物技術有限公司）、Echo Screen T pl聽力篩查儀（上海聚慕醫療）。在此過程中，新生兒需要保持睡眠或者平靜狀態，將探頭和耳道進行連接，按照相關說明書進行操作，設置對應參數。

聾病易感基因聯合篩查共篩查4個耳聾易感基因，分別為GJB2、線粒體12SrRNA、GJB3、SLC26A4。對8個點位實施篩查：1555A＞G均質突變型、538C＞T雜合突變型、35del G雜合突變型、176-191del 16雜合突變型、299del AT雜合突變型、235del C雜合突變型、IVS7-2 A＞G雜合突變型、2168 A＞G；并增加3個突變點位：SLC26A4、GJB3、GJB2。所有新生兒均使用足跟血，提取DNA后擴增，使用設計好的基因芯片雜交的方法，確定檢測位點的基因型。具體的操作步驟如下：①首先需要將干血斑放置到打孔器中，將打孔器對準1.5 ml的離心管，最終產生干血斑，直徑應該為6 mm；②逐漸向樣本中蛋白酶K（Proteinase K）、緩沖液A，進行震蕩加熱離心后逐漸加入緩沖液GB，離心后震蕩會得到裂解的樣本液，之后加入無水乙醇，混合均勻；③離心后將所有的溶液全部倒入，吸附柱離心，將廢液剔除，吸附柱需要放入收集的管內；④在吸附柱中加入緩沖液基底并進行離心，將所有的廢液倒出，加入漂洗液，再次離心，此操作需要連續重復兩次；⑤將吸附柱取出后放入新的離心管內，并再次加入洗脫液TB，最終得到DNA溶液，在零下20℃的環境中保存；⑥擴增DNA使用的是聚合酶鏈式反應，產物和博奧生物公司生產的探針芯片雜交，將干燥、洗滌的芯片放進掃描儀內，對最終的結果進行判讀。

對選取的新生兒進行定期檢查，不能檢查者需要進行電話隨訪工作。

1.3 統計學方法

使用SPSS 20.0統計學軟件進行分析，計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差（）表示，采用t檢驗，P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 新生兒聽力與聾病易感基因聯合篩查結果分析

通過聽力初篩者中，復合雜合突變8例，純合突變18例，雜合突變440例；而未通過初篩者中，復合雜合突變2例，純合突變2例，雜合突變81例；聽力初篩正常的新生兒的易感基因均高于不同基因突變的新生兒（χ2=6.452，P=0.029），見表1。

表1 新生兒聽力與聾病易感基因聯合篩查結果[n（%）]

2.2 3個月實施聽力學診斷的基因檢測結果分析

204例聽力學診斷中正常79例，確診聽力損失125例，其中輕度53例、中度34例、重度14例、極重度24例，見表2。

表2 3個月實施聽力學診斷的基因檢測結果[n（%）]

2.3 隨訪對象的隨訪和失訪情況分析

出生未進行聽力初篩者13例，完成隨訪人員共8例，完成隨訪率為61.54%；聽力初篩未通過且未參加復篩者26例，完成隨訪人員共15例，完成隨訪率為57.69%；聽力復篩未通過者35例，完成隨訪人員共31例，完成隨訪率為88.57%；出生時存在聾病高危因素者98例，完成隨訪人員共72例，完成隨訪率為73.47%；基因篩查結果異常者32例，完成隨訪人員共30例，完成隨訪率為93.75%，共隨訪204例對象，完成隨訪人員共159例，完成隨訪率為77.94%，見表3。

表3 隨訪對象的隨訪和失訪情況[n（%）]

3 討論

新生兒出生后如果發現聽力障礙，會對其認知有一定阻礙，同時也不利于身心健康發展和人際交往等[4]。及早地診斷和治療可以有效恢復或者以代替的方法幫助新生兒聽到世界的聲音，同時也可以將其對新生兒的影響降低，也是保證人口素質、優生優育的主要目標[5]。耳聲發射儀是目前診斷聽力障礙新生兒的主要方法。通過聽力測試，每年都可以診斷出約4萬聽力損害的新生兒[6]。近年來，多數聽力損害的新生兒在出生時聽力就會造成影響，隨著時間不斷地發展，聽力損害情況愈加嚴重，多數患兒早期干預的機會已經錯失，或者患兒的認知功能以及語言功能已經受到損害[7]。相關研究顯示聽力損害以遲發型聾、藥物性聾基因攜帶的患者為主，這兩種情況都可以通過聾病易感基因聯合篩查來發現。

在早期對于聽力障礙的新生兒進行干預，可以幫助新生兒的言語表達達到正常水平，如果通過篩查發現是耳聾基因攜帶者，可以在早期進行干預，并指導其日常生活和聽力，減緩聽力不斷下降的速度[8]。聾病易感基因聯合篩查可以有效發現遲發性聽力損傷或者藥物性聾風險，雖然36 549新生兒通過該方法篩查，但是此結果并不代表聽力篩查在新生兒耳聾篩查中的作用和地位[9]。在我國，通過開展聽力篩查發現每年約有3萬新生兒為耳聾患者，但新生兒聽力篩查不足及缺陷情況的存在，導致藥物性耳聾基因攜帶者及遲發型耳聾患者無法被及時發現，以上因素的存在，使得耳聾的發病率進一步增加[10]。在耳聾患者中，因基因突變而導致的耳聾數量相對較多，其中GJB2基因突變所導致的聽力損失，主要表現為重度或極重度感音神經性耳聾。在大前庭水管綜合征嬰兒當中，約有15%的患兒雙耳可通過新生兒期聽力篩查，對上述患兒來說，大多是在生長發育期間出現的聽力受損，因發現時間較晚，導致其錯過最佳的語言學習時期。隱性遺傳的大前庭水管綜合征患者中，有90%以上均是因SLC26A4基因突變而導致的，若該類患兒均接受新生兒期的聽力與聾病易感基因聯合篩查，則可對其聽力受損情況采取及時、盡早干預，使其語言功能達到正常兒童水平[11]。聽力篩查可對耳聾基因攜帶者進行早期預警，在兒童的生活及隨訪中可對其聽力進行有效指導，進而達到減緩其聽力下降速度的目的。

本研究隨訪的204例患兒中，159例完成隨訪。但此結果并不是絕對的，在部分研究中也會發生失訪率高于隨訪率的情況，導致此情況發生的主要原因如下：①對于聾性新生兒，家長已經放棄治療，同時并不愿意配合隨訪工作；②部分家長認為新生兒聽力較好，不需要再次篩查；③家長對于篩查工作了解較少，有相關學者進行調查后發現，大約有98%的家長對于聽力學知識了解較少，甚至是并不了解，所以認為父母雙方如果沒有耳聾病史那么子女就不可能發生耳聾；④家長在篩查的過程中會產生抵觸心理，認為醫院只是為了謀取收入，對于檢查并沒有熱情，導致未通過的新生兒不能按時進行檢查，也不能對聽力進行評估，通過的新生兒也很難再復查[12]；⑤將新生兒正常生理發聲，錯誤地認為是在學習相關的語言；⑥對于篩查工作并不重視，部分人員留的是單位電話，很難找到家長，或者是已經更換電話號碼不能繼續聯系，很少和機構保持長時間的聯系。

從長遠的角度考慮，認為提高隨訪率可以有效降低耳聾事件的發生，甚至可以避免發生。主要原因如下：①通過基因篩查呈現陽性結果的新生兒，可以從導致疾病發生的原因上向家長解釋耳聾發生的知識點，容易被接受和理解，也可以避免耳聾持續發展或者是發生耳聾的情況，家長會積極配合并接受隨訪工作，和篩查機構長時間保持聯系[13]；②費用較低，被大多數的家長所接受；③在實施基因篩查時操作較為簡單，在新生兒出生時就可以提取臍帶血進行檢測；④家長對遺傳和耳聾之間的關系有了較多了解后，可以更加配合隨訪和篩查工作。

新生兒聽力與聾病易感基因聯合篩查具有較大的意義。在進行聽力篩查的過程中，如果發生了失訪率較高、隨訪率較低的情況，會導致對于聽力損失事件準確的發病率并無完整的統計結果，會影響流行病學數據的可靠性和真實性，對于篩查的策略和篩查的方法不能進行合理的評價，所以目前對新生兒聽力篩查工作的難點和重點主要在隨訪方面[14]。目前有較多的耳聾基因并未被克隆和定位，所以并不是所有的新生兒聽力損失都可以通過聽力與聾病易感基因聯合篩查發現。所以臨床需要對聯合基因篩查隨訪對象擴大范圍，并提高耳聾易感者或耳聾患者的檢出率，對于聽力篩查工作達到了實質性的意義。由此認為，如果在早期就對新生兒的聽力與聾病實施易感基因聯合篩查，可以有效地發現或者避免新生兒出現聽力障礙和聾病[15]。

本研究因選取患兒例數較少等限制，在結果判定方面存在一定局限，后期還需通過進一步擴大樣本量、開展多中心研究等方式，提高結果判定的科學性與可靠性，以便更好地應用于臨床。

綜上所述，在新生兒聽力隨訪工作中，新生兒聽力與聾病易感基因聯合篩查效果理想，臨床上應進一步推廣應用。