鹽酸達(dá)泊西汀片的體外溶出曲線相似性評(píng)價(jià)

郭巧蘭 陳良梅 安 明

1.包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014040；2.天士力研究院江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，天津 300410

鹽酸達(dá)泊西汀是用于治療早泄的短效的5-色胺再攝取抑制劑[1]，通過減少神經(jīng)元對(duì)血清素的吸收[2]以及神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)細(xì)胞突觸前和突觸后受體之間電位差的影響來延緩早泄癥狀[3]。鹽酸達(dá)泊西汀具有pH依賴性（pKa=8.6）[4]，在中性溶液中的溶解度較低[5]，在生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)中屬于Ⅳ類藥物，溶出度成為藥物吸收的限制環(huán)節(jié)[6]，這類藥物的體外溶出至關(guān)重要[7]。同時(shí)普通口服固體制劑給藥后，藥物在體內(nèi)的溶解和釋放對(duì)于藥物的吸收起重要作用[8]。本研究考察鹽酸達(dá)泊西汀片在不同溶出介質(zhì)中的體外溶出曲線[9]，并通過相似因子（?2）法與參比制劑的溶出曲線進(jìn)行相似性評(píng)價(jià)[10]，為后續(xù)相關(guān)研究提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1 儀器

7080DS自動(dòng)溶出度儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司）；Cary60紫外分光光度計(jì)(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；XS105DU十萬分之一電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；S220 pH計(jì)[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；TS-100C恒溫?fù)u床（上海天呈實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸達(dá)泊西汀原研片60 mg（德國(guó)美納里尼集團(tuán)楊森公司，批號(hào)：1800101）；鹽酸達(dá)泊西汀自制片60mg（天士力研究院，批號(hào)：D03、D04、D05、D06）；鹽酸達(dá)泊西汀原料藥[廣州市同暉化工有限公司，批號(hào)：2DPH(M)0060820]；鹽酸達(dá)泊西汀對(duì)照品（杭州國(guó)瑞生物科技有限公司，批號(hào)：WR20211202）；甲醇（美國(guó)Supelco公司，色譜純，批號(hào)：1148507118）

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)制備

按照《普通口服固體制劑溶出度實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[11]配制9種介質(zhì)，分別為pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.0醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.8磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.0磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.4磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液及水。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取27 mg鹽酸達(dá)泊西汀對(duì)照品置于10 ml容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度并搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密量取1 ml儲(chǔ)備液置于100 ml容量瓶中，加相應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻得到對(duì)照品溶液。

2.3 溶解度的測(cè)定

根據(jù)搖瓶法分別測(cè)定達(dá)泊西汀原料在pH 1.0、pH 4.5、pH 5.5、pH 5.8、pH 6.8和水6種介質(zhì)中的飽和溶解度并繪制曲線，結(jié)果見圖1。溶出介質(zhì)pH在1.0～4.5時(shí)，達(dá)泊西汀呈現(xiàn)較高溶解度，該pH區(qū)間不同處方工藝自制片的體外溶出度較快，難以反映不同制劑工藝導(dǎo)致的自制片溶出度差異。溶出介質(zhì)在pH 4.5～6.8時(shí)，原料藥溶解度顯著降低，因此可選擇具有區(qū)分力的溶出條件以區(qū)分不同制劑工藝片劑對(duì)體外溶出度的影響。

圖1 達(dá)泊西汀原料藥的pH-溶解度曲線

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 精密稱量處方中可能使用的輔料，分別加6種介質(zhì)充分溶解并過濾，得到空白輔料溶液。在200～400 nm內(nèi)對(duì)空白輔料溶液、空白溶劑和對(duì)照溶液進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果表明，鹽酸達(dá)泊西汀在292 nm處有最大吸收峰，而空白溶劑和空白輔料溶液在292 nm處無明顯吸收，所以選擇292 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4.2 線性關(guān)系考察 精密量取適量的鹽酸達(dá)泊西汀儲(chǔ)備液置于100 ml量瓶中，用6種溶出介質(zhì)稀釋至刻度，分別配制成15、20、30、40、45 μg/ml的不同濃度對(duì)照品溶液。根據(jù)紫外分光光度法，測(cè)定不同濃度溶液在292 nm處的吸光度。以鹽酸達(dá)泊西汀的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，結(jié)果見表1，在15～45 μg/ml內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

表1 不同溶出介質(zhì)線性回歸方程

2.4.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取適量對(duì)照品溶液，用紫外分光光度法重復(fù)測(cè)定6次。RSD分別為0.29%、0.45%、0.36%、0.55%、0.63%和0.61%。結(jié)果表明，該儀器具有良好的精密度。

2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取適量6種介質(zhì)的對(duì)照品溶液，置于室溫下0、2、4、6、8、12和24 h并測(cè)量吸光度。RSD分別為0.54%、0.38%、0.59%、0.41%、0.51%和0.46%，表明鹽酸達(dá)泊西汀室溫下24 h內(nèi)在6種介質(zhì)中具有良好的穩(wěn)定性。

2.4.5 回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密稱取約21.6、27.3、30.0 mg的鹽酸達(dá)泊西汀原料并置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻并作為儲(chǔ)備液。分別精密量取1 ml儲(chǔ)備液放入100 ml容量瓶中，加入處方輔料，分別加入6種介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻并過濾。根據(jù)紫外分光光度法測(cè)定292 nm處的吸光度值，計(jì)算鹽酸達(dá)泊西汀回收率和RSD。3個(gè)濃度樣品（80%、100%、120%）中的鹽酸達(dá)泊西汀平均回收率在99.4%～99.7%，RSD分別為0.70%、0.48%、0.20%、0.28%、0.19%、0.32%，表明在6種介質(zhì)中的鹽酸達(dá)泊西汀回收率均良好。

2.5 溶出度測(cè)定

按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版第4部分通則0931[12]，溶出介質(zhì)900 ml，取樣時(shí)間為5、10、15、20、30、45和60 min，根據(jù)紫外分光光度法測(cè)定3批不同處方（批號(hào)：D03、D04、D05）自制片吸光度，計(jì)算平均累積溶出度并繪制溶出曲線，結(jié)果見圖2～7。

圖2 pH 1.0介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

2.6 溶出介質(zhì)的區(qū)分力考察

為進(jìn)一步考察溶出介質(zhì)的區(qū)分力，在常見的4種介質(zhì)評(píng)價(jià)中，加入了pH 5.5、pH 5.8兩種介質(zhì)，考察了3批工藝參數(shù)不同的自制片的溶出曲線相似性，結(jié)果見表2。由表可知6種介質(zhì)均表現(xiàn)出D03批與D05批自制片溶出曲線的不相似以及D04批與D05批的溶出曲線相似性。自制片D03和D04批在pH 5.5批和pH 5.8兩種介質(zhì)中的溶出曲線明顯不相似，表明兩種介質(zhì)具有一定區(qū)分力。

圖3 pH 4.5介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖4 pH 5.5介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖5 pH 5.8介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖6 pH 6.8介質(zhì)中的3批自制片溶出曲線

圖7 水中的3批自制片溶出曲線

表2 ?2結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

2.7 溶出曲線相似性評(píng)價(jià)

通過該6種介質(zhì)評(píng)價(jià)經(jīng)處方優(yōu)化的自制片D06與原研片的溶出曲線相似性，結(jié)果見圖8。結(jié)果顯示，與 原 研 片 的?2分 別 為69.9、67.5、67.9、68.9、68.3、67.0，結(jié)果均大于50，表明自制片D06與原研片在6種介質(zhì)中的溶出曲線相似。

圖8 自制片D06與原研片在6種不同介質(zhì)中的溶出曲線

3 討論

具有區(qū)分力的溶出方法在固體制劑的處方工藝中發(fā)揮重要作用，可以區(qū)分出不同處方藥物的內(nèi)在質(zhì)量屬性[13]。本文闡述了具有區(qū)分力的溶出方法的篩選和驗(yàn)證思路[14]，為固體制劑的處方工藝研發(fā)提供了參考。對(duì)于仿制藥，與原研片具有相似的體外溶出曲線，雖不能完全證明具有和原研片的生物等效性，但可大大提高生物等效性（BE）的通過率。

各國(guó)普遍使用?2法雖計(jì)算簡(jiǎn)便，但也存在局限性[15]。為進(jìn)一步的體內(nèi)外相關(guān)性評(píng)價(jià)，需要在此基礎(chǔ)上通過其他模型類擬合統(tǒng)計(jì)法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，掌握體外溶出評(píng)估體系，才能在仿制藥的再評(píng)價(jià)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供便利[16]。