基于脂質(zhì)組學(xué)的絞股藍(lán)總苷調(diào)血脂作用研究

曾 迪，周昌園，龍 健，胡雪黎，涂 星，文德鑒，胡澤華，楊 寶*

基于脂質(zhì)組學(xué)的絞股藍(lán)總苷調(diào)血脂作用研究

曾 迪1, 2，周昌園1, 3，龍 健2，胡雪黎2，涂 星2，文德鑒2，胡澤華2，楊 寶1, 2*

1. 風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（湖北民族大學(xué)），湖北 恩施 445000 2. 湖北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)部，湖北 恩施 445000 3. 湖北民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，湖北 恩施 445000

基于超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜的脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究絞股藍(lán)總苷對(duì)高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的影響。采用高脂飼料制備高脂血癥大鼠模型，通過(guò)血清血脂指標(biāo)和肝臟組織病理學(xué)評(píng)價(jià)絞股藍(lán)總苷的調(diào)血脂活性，應(yīng)用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)血清和肝臟的脂質(zhì)代謝物，結(jié)合主成分分析、正交偏最小二乘-判別分析、火山圖篩選差異脂質(zhì)，明確絞股藍(lán)總苷干預(yù)前后血清和肝臟中脂質(zhì)變化。絞股藍(lán)總苷顯著調(diào)節(jié)高脂血癥大鼠的血脂（＜0.05、0.01）。從血清和肝臟中分別篩選了17、17個(gè)差異脂質(zhì)，主要為三酰甘油、磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰膽堿類。給予絞股藍(lán)總苷干預(yù)后，篩選的差異脂質(zhì)均有回調(diào)至正常的趨勢(shì)。絞股藍(lán)總苷的調(diào)血脂作用確切，可能與調(diào)節(jié)三酰甘油、甘油磷脂、不飽和脂肪酸代謝有關(guān)。

絞股藍(lán)總苷；高脂血癥；脂質(zhì)組學(xué)；超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜；差異代謝物；三酰甘油；磷脂酰膽堿；溶血磷脂酰膽堿

高脂血癥由體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂所致，是多種心血管疾病的危險(xiǎn)因素。研究脂質(zhì)代謝對(duì)于明確調(diào)血脂藥物的作用機(jī)制具有重要意義。脂質(zhì)組學(xué)是系統(tǒng)分析細(xì)胞和組織中各種脂質(zhì)及相互作用，并闡明其在不同生理?xiàng)l件下的功能和變化的一門學(xué)科[1-2]。脂質(zhì)組學(xué)與中藥多靶點(diǎn)、多途徑作用特點(diǎn)相契合，是研究中藥調(diào)血脂作用的有力工具[1]。超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜技術(shù)為高通量分析脂質(zhì)提供了可能，推動(dòng)了脂質(zhì)研究的進(jìn)程[2]。研究發(fā)現(xiàn)，絞股藍(lán)總苷具有較好的調(diào)血脂、降血糖、保肝作用[3-5]。目前絞股藍(lán)總苷調(diào)血脂作用的研究主要集中在藥效學(xué)，尚無(wú)脂質(zhì)組學(xué)研究報(bào)道[6-7]。肝臟是脂質(zhì)代謝的重要場(chǎng)所，系統(tǒng)研究肝臟和血清中脂質(zhì)代謝特征對(duì)于明確絞股藍(lán)總苷的調(diào)血脂作用具有重要意義?；诖耍狙芯繑M采用脂質(zhì)組學(xué)探究絞股藍(lán)總苷的調(diào)血脂作用。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠32只，體質(zhì)量70～90 g，購(gòu)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心（合格證號(hào)42000600046178）。動(dòng)物飼養(yǎng)于相對(duì)濕度50%～65%、溫度23～26 ℃、12 h晝夜循環(huán)的環(huán)境，自由進(jìn)食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)2022006）。

1.2 藥品與試劑

總膽固醇（total cholesterol，TC）試劑盒（批號(hào)22021819）、三酰甘油（triglycerides，TAG）試劑盒（批號(hào)22021706）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒（批號(hào)22011711）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）試劑盒（批號(hào)22021107）購(gòu)自武漢生之源公司；阿托伐他汀鈣片（10 mg/片，批號(hào)1L8454DL3）購(gòu)自齊魯制藥有限公司；絞股藍(lán)總苷片（每片含絞股藍(lán)總苷20 mg，批號(hào)K21A005）購(gòu)自和記黃埔中藥有限公司；水合氯醛（批號(hào)BMB3457）購(gòu)自博美生物公司；高脂飼料（含蔗糖20%、豬油15%、膽固醇1.2%、膽酸鈉0.2%、酪蛋白10%、磷酸氫鈣0.6%、石粉0.4%、預(yù)混料0.4%、基礎(chǔ)飼料52.2%）購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；質(zhì)譜級(jí)乙腈、異丙醇購(gòu)自默克公司。

1.3 儀器

Acquity UPLC儀、Xevo G2-XS Q/TOF質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司）；ME204型分析天平（梅特勒-托利多公司）；Concentrator plus濃縮儀（德國(guó)Eppendorf公司）；008AS型生化分析儀（日立公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組與給藥

32只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、阿托伐他汀（10 mg/kg）組和絞股藍(lán)總苷（150 mg/kg）組，每組8只。對(duì)照組給予普通飼料，其余各組給予高脂飼料。阿托伐他汀和絞股藍(lán)總苷以羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）溶液混懸，各給藥組ig相應(yīng)藥物（10 mL/kg），1次/d，連續(xù)8周。

2.2 樣本收集與處理

第8周結(jié)束時(shí)各組大鼠空腹12 h，ip 10%水合氯醛麻醉（3.5 mL/kg），腹主動(dòng)脈取血，靜置2 h后4000 r/min離心10 min，血清于?80 ℃保存。取肝臟組織，部分肝臟用于制作蘇木素-伊紅（HE）染色切片，剩余保存于?80 ℃。

2.3 脂質(zhì)組學(xué)樣品處理

2.3.1 血清樣品的處理 吸取50 μL血清，加入500 μL二氯甲烷-甲醇（2∶1）溶液，渦旋1 min后15 000 r/min離心10 min，吸取200 μL下層溶液濃縮干燥。殘?jiān)尤?00 μL異丙醇-乙腈（2∶1）復(fù)溶，15 000 r/min離心10 min，取上清液分析。

2.3.2 肝臟組織樣品的處理 稱取0.1 g肝臟組織，加入2000 μL二氯甲烷-甲醇（2∶1）溶液制備勻漿液，超聲提取5 min后15 000 r/min離心10 min，吸取200 μL上清液濃縮干燥。殘?jiān)尤?00 μL異丙醇-乙腈（2∶1）復(fù)溶，15 000 r/min離心10 min，取上清液分析。

2.3.3 質(zhì)控樣品的處理 由各樣品取30 μL混合。

2.4 色譜和質(zhì)譜條件

Waters UPLC CSH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動(dòng)相A為乙腈-水（3∶2），B為異丙醇-乙腈（9∶1），均含5 mmol/L醋酸銨，梯度洗脫：0～4.0 min，65%～58% A；4.0～4.5 min，58%～43% A；4.5～11.0 min，43%～31% A；11.0～17.0 min，31%～1% A；17.0～17.1 min，1%～65% A；17.1～21.0 min，65% A。體積流量0.35 mL/min；柱溫50 ℃；進(jìn)樣量2 μL。

Xevo G2-XS Q/TOF質(zhì)譜儀，電噴霧離子源，源溫度110 ℃；毛細(xì)管電壓2.5 kV（?2.5 kV）；錐孔電壓40 V（?40 V）；脫溶劑氣體積流量900 L/h；溫度550 ℃；掃描范圍/50～1000。

2.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

3 結(jié)果

3.1 絞股藍(lán)總苷對(duì)高脂血癥大鼠體質(zhì)量、血脂、肝臟病理變化的影響

如圖1-A～E所示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量顯著升高（＜0.05），血清中TC、TAG、LDL-C水平均顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，阿托伐他汀組大鼠體質(zhì)量顯著降低（＜0.05），各給藥組大鼠血清中TC、TAG和LDL-C水平均顯著降低（＜0.05、0.01）。如圖1-F所示，對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞形態(tài)正常，無(wú)油脂滴聚集；模型組大鼠的肝細(xì)胞體積顯著增大呈蜂窩狀，出現(xiàn)較多脂肪滴；與模型組比較，各給藥組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性及空泡樣病變顯著改善，油脂滴數(shù)量減少。

3.2 典型總離子流圖

分析對(duì)照組、模型組、絞股藍(lán)總苷組的血清和肝臟脂質(zhì)樣品，典型總離子流圖見(jiàn)圖2，分離度及響應(yīng)較好。

3.3 方法學(xué)驗(yàn)證

在正、負(fù)離子模式下各選擇6個(gè)質(zhì)控離子[正離子模式：/544.34（R＝1.22 min）、/z 520.34（R＝1.32 min）、/782.57（R＝6.65 min）、/788.62（R＝9.81 min）、/876.80（R＝15.30 min）、/930.85（R＝15.58 min）；負(fù)離子模式：/500.28（R＝1.28 min）、/327.23（R＝2.44 min）、/826.56（R＝6.63 min）、/854.59（R＝7.89 min）、/830.59（R＝8.07 min）、/856.61（R＝8.33 min）］，提取上述離子在質(zhì)控樣品中的峰面積和保留時(shí)間，結(jié)果顯示RSD分別小于1.5%和11.0%，說(shuō)明樣品和儀器系統(tǒng)的穩(wěn)定性良好。

與對(duì)照組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01 CG-對(duì)照組 MG-模型組 AT-阿托伐他汀組 PG-絞股藍(lán)總苷組，下圖同

圖2 血清 (A、B) 和肝臟(C、D) 脂質(zhì)在正、負(fù)離子模式下的總離子流圖

3.4 PCA分析

如圖3-A、D、G、J所示，質(zhì)控樣本分布聚集，說(shuō)明檢測(cè)平臺(tái)穩(wěn)定性好。對(duì)照組和模型組分布在得分圖兩側(cè)，模型組血清和肝臟的脂質(zhì)代謝較對(duì)照組發(fā)生了顯著變化，提示造模成功；絞股藍(lán)總苷組分布在模型和對(duì)照組之間，說(shuō)明絞股藍(lán)總苷能夠改善高脂血癥大鼠的脂質(zhì)代謝。

圖3 對(duì)照組、模型組、絞股藍(lán)總苷組、質(zhì)控組(QC) 血清脂質(zhì)(A-正離子，D-負(fù)離子)、肝臟脂質(zhì)(G-正離子，J-負(fù)離子) 的PCA得分圖，模型組和絞股藍(lán)總苷組血清脂質(zhì)(B-正離子，E-負(fù)離子)、肝臟脂質(zhì)(H-正離子，K-負(fù)離子) 的OPLS-DA得分圖及置換檢驗(yàn)圖(C、F、I、L)

3.5 OPLS-DA分析

如圖3-B、E、H、K所示，累計(jì)變量解釋度2和預(yù)測(cè)度2均大于0.96，提示模型的描述和預(yù)測(cè)能力良好，能區(qū)分對(duì)照和模型組之間的脂質(zhì)代謝差異，以及解釋絞股藍(lán)總苷對(duì)高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用。200次置換檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3-C、F、I、L，2的截距均大于0.50、2的截距均小于?0.50，提示各模型的預(yù)測(cè)能力較好且沒(méi)有過(guò)擬合。然后進(jìn)行變量權(quán)重投影分析，篩選出VIP＞1.50的脂質(zhì)。

3.6 差異脂質(zhì)代謝物篩選與鑒定

根據(jù)檢驗(yàn)值和變化倍數(shù)制作火山圖（圖4），篩選＜0.05且變化倍數(shù)小于0.67或大于1.50的脂質(zhì)，結(jié)合VIP值大于1.50篩選差異脂質(zhì)。結(jié)構(gòu)鑒定在AB Sciex TripleTOF 5600質(zhì)譜儀（含LipidView數(shù)據(jù)庫(kù)）上完成，結(jié)果見(jiàn)表1、2。以/500.279 6（R＝1.28 min）為例說(shuō)明鑒定過(guò)程，首先檢索/500.279 6，最匹配的是LysoPE（20∶4）。質(zhì)譜圖中主要產(chǎn)生/303.23、259.24、205.19、196.04等碎片，與數(shù)據(jù)庫(kù)中信息一致。/303.23為脂肪鏈FA（22∶4）片段，/283.24和205.19分別為FA（22∶4）片段丟失1分子CO2和C5H8O2后的碎片，/196.04為甘油磷酸乙醇胺脫水后的碎片。差異脂質(zhì)相對(duì)峰強(qiáng)度的熱圖如圖5所示，絞股藍(lán)總苷顯著回調(diào)高脂血癥大鼠血清和肝臟中的差異脂質(zhì)。

4 討論

脂質(zhì)扮演著能量?jī)?chǔ)存、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞膜形成等重要角色，與疾病密切相關(guān)[8]。本研究采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜的脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)考察了絞股藍(lán)總苷對(duì)高脂血癥大鼠血清和肝臟脂質(zhì)代謝的影響，篩選出17個(gè)TAG、10個(gè)磷脂酰膽堿、4個(gè)溶血磷脂酰膽堿、1個(gè)溶血磷脂酰乙醇胺、1個(gè)不飽和脂肪酸。根據(jù)組間差異脂質(zhì)種類和已報(bào)道的脂質(zhì)代謝通路擬合獲得絞股藍(lán)總苷的降血脂作用所涉及的脂質(zhì)代謝通路（圖6），提示絞股藍(lán)總苷可能通過(guò)調(diào)節(jié)TAG、磷脂酰膽堿、脂肪酸的代謝與利用，進(jìn)而發(fā)揮調(diào)血脂作用。

圖4 對(duì)照組和模型組血清(A、B) 和肝臟(E、F) 脂質(zhì)，絞股藍(lán)總苷組和模型組血清(C、D) 和肝臟(G、H)脂質(zhì)的火山圖

表1 血清中篩選的差異脂質(zhì)及變化趨勢(shì)

LysoPC-溶血磷脂酰膽堿 PC-磷脂酰膽堿

LysoPC-lysophosphatidylcholine PC-phosphatidyl cholines

表2 肝臟中篩選的差異脂質(zhì)及變化趨勢(shì)

LysoPE-溶血磷脂酰乙醇胺 FA-脂肪酸

LysoPE-lysophosphatidylethanolamine FA-fatty acid

圖5 差異脂質(zhì)在血清(A) 和肝臟(B) 中相對(duì)峰強(qiáng)度的熱圖

TAG是生物體的主要儲(chǔ)能形式，與能量代謝平衡密切相關(guān)。TAG水平異常升高是高脂血癥的典型特征，顯著增加肥胖、腦血栓、中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)[9]。肝臟中TAG的水平過(guò)高還會(huì)導(dǎo)致脂肪肝、胰島B細(xì)胞損傷和胰島素抵抗[10-11]。TAG還可以通過(guò)甘油二酯途徑合成磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺，影響脂質(zhì)代謝，以及分解為甘油和脂肪酸，通過(guò)三羧酸循環(huán)途徑影響能量代謝。在本研究中，與對(duì)照組比較，模型組血清中TAG（52∶2）、TAG（54∶2）、TAG（52∶1）、TAG（54∶1）的水平顯著升高，TAG（48∶4）、TAG（58∶9）、TAG（56∶8）、TAG（54∶6）的水平顯著降低；肝臟中TAG（50∶4）、TAG（52∶5）、TAG（50∶3）、TAG（52∶4）、TAG（56∶6）、TAG（51∶2）、TAG（53∶3）、TAG（56∶5）的水平顯著升高，在絞股藍(lán)總苷干預(yù)后都有回調(diào)至正常的趨勢(shì)。統(tǒng)計(jì)血清和肝臟中差異TAG的總峰面積，結(jié)果顯示模型組較對(duì)照組顯著升高，在絞股藍(lán)總苷干預(yù)后顯著降低，與生化指標(biāo)趨勢(shì)一致。

圖6 絞股藍(lán)總苷調(diào)血脂作用涉及的脂質(zhì)代謝通路

甘油磷脂是細(xì)胞膜的重要組成成分，參與了細(xì)胞膜對(duì)蛋白質(zhì)的識(shí)別和信號(hào)傳導(dǎo)。甘油磷脂是膽汁的活性成分之一，通過(guò)誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)在高脂血癥中扮演著重要角色[12]。甘油磷脂主要分為磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺等。磷脂酰膽堿在維持細(xì)胞環(huán)境和膽固醇代謝穩(wěn)態(tài)中起著重要作用，扮演著血管“清道夫”角色，能夠減少膽固醇和TAG在血管中沉積，調(diào)節(jié)血脂水平，改善動(dòng)脈粥樣硬化[13]。與對(duì)照組比較，模型組血清中PC（34∶3）、PC（38∶7）、PC（38∶3）、PC（35∶4）、PC（37∶3）的水平顯著升高，PC（38∶5）的水平顯著降低；模型組肝臟中PC（37∶3）的水平顯著升高，PC（38∶6）、PC（40∶6）、PC（32∶0）、PC（40∶7）的水平顯著降低，在絞股藍(lán)總苷干預(yù)后均有回調(diào)至正常水平的趨勢(shì)，對(duì)磷脂酰膽堿代謝紊亂表現(xiàn)出了較好的調(diào)節(jié)作用。其中PC（34∶3）、PC（38∶3）、PC（38∶6）、PC（32∶0）的變化趨勢(shì)與文獻(xiàn)報(bào)道[14]一致，可以作為絞股藍(lán)總苷調(diào)血脂作用的潛在生物標(biāo)志物。

溶血磷脂酰膽堿是由磷脂酶A2水解低密度脂蛋白中的氧化磷脂酰膽堿產(chǎn)生，是氧化型低密度脂蛋白的主要活性成分[15]，部分溶血磷脂酰膽堿還可以通過(guò)激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和凋亡[15]。過(guò)量的溶血磷脂酰膽堿還可能引發(fā)炎癥和自身免疫反應(yīng)，影響高脂血癥相關(guān)疾病的發(fā)展過(guò)程[16]。與對(duì)照組相比，模型組血清中LysoPC（17∶2）、LysoPC（18∶2）、LysoPC（20∶3）的水平顯著升高，肝臟中LysoPC（18∶0）的水平顯著降低，在絞股藍(lán)總苷干預(yù)后均有回調(diào)至正常水平的趨勢(shì)，其中LysoPC（20∶3）、LysoPC（18∶0）和LysoPC（18∶2）的變化趨勢(shì)與文獻(xiàn)[8,17]一致，可以作為絞股藍(lán)總苷調(diào)血脂作用的潛在生物標(biāo)志物。溶血磷脂酰乙醇胺是磷脂酶A1水解磷脂酰乙醇胺的產(chǎn)物，能夠促進(jìn)低密度脂蛋白膽固醇的清除，參與合成多不飽和脂肪酸，與心腦血管疾病負(fù)相關(guān)。與對(duì)照組相比，模型組肝臟中LysoPE（20∶4）的水平顯著降低，在絞股藍(lán)總苷干預(yù)后上升至正常水平，可能在絞股藍(lán)總苷調(diào)血脂作用中扮演了重要角色。

二十二碳六烯酸是重要的ω-3多不飽和脂肪酸，長(zhǎng)期攝入二十二碳六烯酸顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等高脂血癥相關(guān)疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，還能顯著降低TAG的水平[18]。在本研究中，模型組肝臟中二十二碳六烯酸的水平顯著降低，在絞股藍(lán)總苷干預(yù)后顯著升高并超過(guò)對(duì)照組水平。

綜上所述，絞股藍(lán)總苷的調(diào)血脂作用確切。本研究基于脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)初步明確了絞股藍(lán)總苷的調(diào)血脂作用可能與調(diào)節(jié)TAG、甘油磷脂、不飽和脂肪酸代謝有關(guān)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect of gypenosides on regulating blood lipid based on lipidomics

ZENG Di1, 2, ZHOU Chang-yuan1, 3, LONG Jian2, HU Xue-li2, TU Xing2, WEN De-jian2, HU Ze-hua2, YANG Bao1, 2

1. Hubei Provincial Key Laboratory of Occurrence and Intervention of Rheumatic Diseases (Hubei Minzu University), Enshi 445000, China 2. Medical School, Hubei Minzu University, Enshi 445000, China 3. School of Chemistry and Environmental Engineering, Hubei Minzu University, Enshi 445000, China

To study the antihyperlipidemic effects of gypenosides in hyperlipidemic rats using ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC-Q-TOF/MS)-based lipidomics.A hyperlipidemic rat model was induced by high-fat diet. The antihyperlipidemic effects of gypenosides were confirmed by serum lipid index and liver pathological examination. Lipid metabolites in serum and liver were detected by UPLC-Q-TOF/MS method. The MS data were processed by principle component analysis, orthogonal partial least squared discriminant analysis and volcanic map analysis to screen the differential lipids.Gypenosides significantly regulated the levels of serum lipids in hyperlipidemic rats (< 0.05, 0.01). A total of 17, 17 differential lipids, mainly belonging to triglyceride, phosphatidylcholine and lysophosphatidylcholine, were screened and identified from the serum and liver, respectively. Those differential lipids showed a tendency of callback to normal level after gypenosides intervention.Gypenosides possessed significant antihyperlipidemic activity. The mechanism may be related to the regulation of triglyceride, glycerophospholipid and unsaturated fatty acid metabolism.

gypenosides; hyperlipoidemia; lipidomics; UPLC-Q-TOF/MS; differential metabolites; triglyceride; phosphatidylcholine; lysophosphatidylcholine

R285.5

A

0253 - 2670(2023)04 - 1149 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.04.014

2022-10-26

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81560703）；風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（湖北民族大學(xué)）項(xiàng)目（PT022210）

曾 迪，碩士研究生，研究方向?yàn)榇x組學(xué)研究。E-mail: 1015361275@qq.com

楊 寶，博士，講師，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)榇x組學(xué)研究。E-mail: ybsept@qq.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]