SLCO1B1、ApoE 基因多態性對瑞舒伐他汀治療血脂異常超高危動脈粥樣硬化性心血管疾病患者的影響

謝東德 周思婕 黃杰 陳冠群 黃澤棋 吳劍弟

(1佛山市第二人民醫院檢驗科，廣東 佛山 528000；2海南醫學院熱帶醫學與檢驗醫學院；3佛山市第二人民醫院心內科)

目前，心血管相關疾病逐漸成為世界上死亡率最高，且致殘率最高的疾病。在心血管相關疾病的危險因素探究中發現，其危險因素已遠遠超過200種，其中血脂異常與心血管疾病密切相關，也導致了血脂水平異常的發病率增加〔1，2〕。研究報道，在中國人血清中總膽固醇(TC)水平和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平顯著低于西方國家人群，且在中老年人群中發生脂異常的概率依舊上升，可能是由于人們生活水平的逐漸提高，導致三高人群急速增加〔3，4〕。脂異常的預防顯著差于高血壓和糖尿病，脂異常防治的知曉率、治療率、控制率均較低〔5〕。目前，脂異常是國民暴露率最高的心血管病危險因素，會引發超高危動脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)，在超高危ASCVD治療中，血脂管理尤為重要〔6〕。研究顯示，降低LDL-C是治療脂異常所致的超高危ASCVD的有效手段，而他汀類藥物能夠顯著降低LDL-C〔7〕。他汀類藥物中常用的且適宜ASCVD的藥物包括瑞舒伐他汀。載脂蛋白(Apo)E是降低LDL-C等血脂水平的重要因素〔8〕，SLCO1B1與他汀類藥物的毒副作用密切相關〔9〕。突變型基因會影響藥物的療效〔10〕。SLCO1B1和ApoE基因多態性與血脂水平及治療療效的影響暫不明確。本文旨在探討SLCO1B1和ApoE 基因多態性對脂異常所致超高危ASCVD患者瑞舒伐他汀治療的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集佛山市第二人民醫院2020年6月至2021年6月收治的268例血脂異常的超高危ASCVD患者，年齡(64.37±3.44)歲；男148例，女120例；冠心病201例，高血壓125例，糖尿病64例，體重指數(25.22±2.79)kg/m2。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。所有入選患者行ApoE及SLCO1B1基因型檢查，ApoE 基因型結果分為E2/B2、E2/B3、E3/E3、 E2/E4、 E3/E4和E4/EB4組，SLCO1B1 521T>C基因型結果分為TT、TC和CC組，SLCO1B1 388A>G基因型結果分為AA、AG和GG組。納入標準：①符合超高危ASCVD患者的標準〔11〕；②發生過2次或以上嚴重ASCVD事件；③患者及其家屬均簽署知情同意書；④病歷資料齊全。排除標準：①對本研究使用的藥品過敏者；②肌病；③入院前14 d內已服用降脂藥物者；④肝腎功能損害者；⑤患者并發惡性腫瘤，且預期壽命不足半年者。

1.2治療方法 所有患者進行瑞舒伐他汀鈣片治療，藥品的國藥準字為HJ20160545，生產于阿斯利康藥業(中國)有限公司，10 mg×7片，口服，1片/次，1次/d，治療半年。

1.3基因檢測 用PCR熒光探針法對患者SLCOIBl基因的388A>G、521T>C位點和ApoE基因的526C>T、388T>C位點的多態性進行檢測。所有患者進行瑞舒伐他汀治療，10 mg，1片/d，治療半年。基因型檢測：使用上海宏石醫療科技有限公司生產的全自動熒光定量PCR儀(型號：SLAN-96P)，上海萊楓生物科技有限公司生產的DNA提取試劑盒、武漢友芝醫療科技有限公司生產的SLCO1B1和ApoE基因檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)進行基因分型：①在Nunc 96孔深孔板中各加入20 μl蛋白酶K及 Mag Bind Particles；②轉移200 μl血漿至深孔板中；③加入200 μl緩沖液AL至樣品中，且貼上封口膜，1 000～1 400 r/min振蕩混勻3 min。70℃水浴10 min；④短暫離心收集管壁的液滴，撕去封口膜；⑤加入400 μl緩沖液BD至樣品中。1 000～1 200 r/min振蕩混勻3 min；⑥轉移至96孔磁力架吸附10 min;⑦加入600 μl緩沖液BW1至孔中，1 000～1 200 r/min振蕩混勻2 min打散磁珠；轉移至磁力架上吸附3 min，重復⑤和⑥1次；⑧加入600 μl 70%乙醇，1 000～1 200 r/min振蕩混勻2 min打散磁珠，轉移至磁力架上吸附3 min，重復⑧1次，37～100 μl預熱至70℃洗脫緩沖液，1 000 r/min振蕩混勻10 min，轉移至磁力架上吸附3 min，把 DNA轉移至新的96孔板中；⑨將DNA、弱陽性對照組、空白對照分別加入已裝有4種 PCR液的反應管中，進行 PCR擴增；⑩反應結束后，根據擴增曲線，劃定合適基線和熒光閾值，得出不同通道Ct值，進行結果判定。

1.4觀察指標 檢測治療前后患者體內TC、三酰甘油(TG)、LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，血清肌酐(Cr)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)水平。統計研究期間患者肌痛發生情況。

1.5統計學方法 采用SPSS26.0軟件進行Hardy-Weinberg遺傳學平衡檢測、t檢驗、F檢驗及χ2檢驗。

2 結 果

2.1超高危ASCVD患者的SLCO1B1基因頻率 SLCO1B1基因型、等位基因頻率符合Hardy-Weinberg 平衡定律(P>0.05)，表明本研究中超高危ASCVD患者具有群體代表性。見表1。

表1 超高危ASCVD患者的基因分布頻率〔n(%),n=268〕

2.2SLCO1B1 521T>C各基因型攜帶者血脂水平及肝腎功能變化比較 治療前，TC+CC組與TT組各指標差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，TC+CC組LDL-C水平顯著低于TT組(P<0.05)，TC+CC組CK水平顯著高于TT組(P<0.05)。見表2。

2.3SLCO1B1 388A>G各基因型攜帶者血脂及肝腎功能比較 治療前后，AA、AG與GG組血脂及肝腎功能指標差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

2.4ApoE>G各基因型攜帶者血脂及肝腎功能比較 治療前，e2、e3與e4組血脂及肝腎功能指標比較差異均無統計學意義(P>0.05)。治療后，e2、e3與e4組LDL-C水平差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

2.5不同基因型組肌痛發生率比較 SLCO1B1 521T>C：TT、TC+CC組肌痛發生率分別為4.21%(8/190)、11.54%(9/78)，不同基因型患者肌痛發生率差異有統計學意義(χ2=4.998，P=0.025)。SLCO1B1 388A>G：AA、AG及GG肌痛發生率分別為12.5%(1/8)、6.0%(6/100)及6.3%(10/160)，不同基因型患者肌痛發生率差異無統計學意義(χ2=0.533，P=0.766)。ApoE>G：e2、e3及e4組肌痛發生率分別為4.2%(1/24)、7.5%(15/201)及2.4%(1/42)，不同基因型患者肌痛發生率差異無統計學意義(χ2=1.765，P=0.414)。

表2 治療前后sLCO1B1 521T>C各基因型攜帶者血脂及肝腎功能比較

表3 治療前后SLCO1B1 388A>G各基因型攜帶者組間血脂及肝腎功能比較

表4 治療前后ApoE>G各基因型攜帶者組間血脂及肝腎功能比較

3 討 論

超高危ASCVD是由多種原因引起，此類患者需要嚴格控制血脂〔12～14〕。保持血脂水平的正常能夠有效降低脂異常的超高危ASCVD患者死亡率，提高治愈率。超高危ASCVD的治療手段包括他汀類降脂藥控制血脂。超高危ASCVD患者可使用瑞舒伐他汀降脂且療效不錯〔15〕。有報道顯示〔16〕，SLCO1B1、ApoE 基因多態性可能會影響他汀類藥物的降脂效果，且可能引發藥物毒副作用。

ApoE 是一種多態性載脂蛋白，其部分存在于HDL中，ApoE是LDL和肝細胞CM殘粒受體的配體，ApoE多態性能夠決定機體的血脂水平〔17〕，且在動脈粥樣硬化的發生發展中，也有ApoE的參與〔18〕。SLCO1B1能夠轉運他汀類藥物。SLCO1B1通過從血液中將他汀類藥物轉運至肝臟進行代謝〔19〕。當SLCO1B1發生基因突變時，會損害其轉運功能〔20〕。ApoE、SLCO1B1基因多態性會對瑞舒伐他汀的降脂療效及安全性有一定影響〔21〕。本研究將所有患者進行ApoE、SLCO1B1基因多態性檢測發現，ApoE等位基因分布中e3患者最多，E3/E3 最多，E4/E4最少。在SLCO1B1中521T>C位點基因型中TT 最多，CC最少；SLCO1B1中388A>G位點基因型中GG最多，AA最少，且ApoE、SLCO1B1基因型與基因頻率符合Hardy-Weinberg 平衡定律。

本研究結果說明，SLCO1B1 388A>G中TC+CC基因型可能升高了瑞舒伐他汀的血藥濃度，提高瑞舒伐他汀的降脂療效。與王婧等〔22〕研究一致。

有研究顯示，他汀類藥物對ApoE基因e2等位基因攜帶者的降脂作用較強，在e4等位基因攜帶者中效果不佳〔23〕。且ApoE e4攜帶者與辛伐他汀療效降低有關。本研究結果與上述結論一致。

他汀類降脂藥中瑞舒伐他汀在臨床上應用廣泛，也具有良好療效。其能夠降低LDL-C水平并提高HDL-C水平，改善內皮功能，從而穩定斑塊，但其可能引起肌痛等副作用〔24〕。本研究還提示，在瑞舒伐他汀使用中，應當注重SLCO1B1 521T>C基因型特別是CC基因型的檢測。

綜上，ApoE 基因中e2等位基因與E3/E3基因型有效降低脂異常所致的超高危ASCVD患者LDL-C水平，e4等位基因的ASCVD者服用瑞舒伐他汀的療效欠佳，SLCO1B1 521T>C基因多態性會導致瑞舒伐他汀引起肌痛，SLCO1B1 521T>C中CC基因型會更加容易出現肌痛現象。瑞舒伐他汀治療期間應當注重SLCO1B1、ApoE 基因多態性的檢測。