老年肺癌患者化療后肺部感染耐藥基因檢測和對IgA、IgG及IgM水平的影響

福泉 張蕓 喬曉娟 顧巖

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 1檢驗科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050；2全科醫(yī)學(xué)科；3腫瘤科；4呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科)

肺癌是威脅人們身體健康的惡性腫瘤之一，患者多為中老年人，與生活習(xí)慣、環(huán)境、免疫功能、吸煙及遺傳等因素有關(guān)〔1〕。隨著醫(yī)療技術(shù)提升，惡性腫瘤診斷、治療及生存率有所提高，但由于早期肺癌癥狀較不明顯，臨床診斷率相對較低，多數(shù)患者在首次就診時已處于中晚期，此時已錯過最佳手術(shù)切除治療時機〔2〕。化療是治療中晚期癌癥的重要手段，能夠改善患者預(yù)后情況，延長生存期〔3〕。然而化療藥物在殺死癌細胞的同時可以破壞機體內(nèi)的正常細胞，損害正常的免疫功能，影響治療效果〔4〕。肺部感染是肺癌患者化療后最常見的并發(fā)癥之一，尤其在老年患者中〔5〕。隨著年齡增加，老年患者身體功能下降，常伴有基礎(chǔ)疾病，免疫功能逐漸減弱，免疫力下降，更容易發(fā)生感染〔6〕。而且化療會降低患者的免疫功能，合并感染更容易引起免疫降低，影響化療療效及患者生活質(zhì)量〔7〕。因此，有效防治肺部感染具有十分重要的意義。由于抗生素的濫用，使得病原菌耐藥性不斷增加，分析肺部感染患者病原菌譜，檢測耐藥菌基因?qū)侠硎褂每咕幬锞哂惺种匾呐R床意義〔8，9〕。目前有關(guān)肺癌化療后肺部感染耐藥基因的分析研究較少。本研究對156例老年肺癌患者進行耐藥基因檢測，分析患者免疫功能變化情況。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年5月至2019年6月內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院收診的156例老年肺癌化療后肺部感染患者作為研究對象，其中男93例，女63例，年齡65～85歲，平均(71.33±3.12)歲。小細胞未分化癌14例、鱗狀癌90例、肺泡細胞癌5例、腺癌47例；其中肺部感染患者68例為感染組，未發(fā)生肺部感染患者88例為未感染組。兩組一般資料比較無顯著性差異(P>0.05)。具有可比性。見表1。納入標準：(1)病理確診為肺癌；(2)肺部感染診斷〔10〕；(3)年齡65～85歲；(4)均進行化療治療；(5)患者及患者家屬自愿簽署知情同意書；(6)生存期≥6個月。排除標準：(1)合并其他感染者；(2)血液系統(tǒng)疾病；(3)近8 w內(nèi)服用其他影響免疫功能藥物者；(4)精神障礙者；(5)自身免疫系統(tǒng)疾病。

1.2方法 病原菌采集及鑒定：采集患者呼吸道分泌物，進行細菌培養(yǎng)，藥敏試驗以紙片擴散法(購自O(shè)xoid公司)，使用ARIS ZX微生物鑒定系統(tǒng)或高通量測序法進行鑒定；并篩選超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的細菌；質(zhì)控菌種：肺炎克雷伯菌ATCC700603，大腸埃希菌ATCC25922。

耐藥基因檢測：①DNA模板：培養(yǎng)產(chǎn)ESBLs的細菌，提取菌落并懸浮，制備模板；②引物：SHV基因，上游：5′-ATGCGTTATATTCGCCTGTG-3′，下游：5′-TTAGCGTTGCCAGTGCTCG-3′；TEM基因：上游：5′-ATGAGTATTCAACATTTCCGTGTC-3′，下游：5′-TTACCAATGCTTAATCAGTGAGC-3′。③聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)：50 μl反應(yīng)體積，上游和下游引物各0.4 pmol/L，氯化鎂0.4 mmol/L，10×緩沖液5 μl，2.5 UTaq酶。擴增條件：94℃ 30 s、54℃ 30 s、56℃ 72 s，58℃ 20 s、72℃ 20 s，退火溫度分別為62℃、39℃，共循環(huán)35次，延伸，75℃ 300 s。③凝膠電泳：取反應(yīng)產(chǎn)物5 μl，在含有2%溴化乙錠(EB)瓊脂凝膠上進行電泳，觀察電泳結(jié)果。

表1 兩組一般資料比較

1.3觀察指標 主要為免疫指標：清晨空腹，抽取靜脈血4 ml，置于抗凝管，放置30 min，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速，離心半徑為3 cm，進行15 min的離心，放置至分層，取上層血清，放置在低溫冰箱，冷藏待測。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測免疫球蛋白(Ig)A、IgG及IgM水平，試劑盒購自美國R&D公司；操作需完全按照說明書執(zhí)行。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0軟件進行正態(tài)性檢驗、t檢驗、校正t檢驗、χ2檢驗、校正χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1老年肺癌患者化療后肺部感染病原菌分布情況 革蘭陰性菌43株，占比為63.24%，主要為大腸埃希菌18株(26.47%)、銅綠假單胞菌13株(19.12%)、肺炎克雷伯菌10株(14.71%)；革蘭陽性菌19株，占比為27.94%，主要為溶血鏈球菌10株(14.71%)、金黃色葡萄球菌6株(8.82%)；真菌6株，占比為8.82%，主要為白色假絲酵母菌3株(4.41%)。

2.2主要革蘭陽性菌對藥物敏感率分析 溶血葡萄球菌、金黃色葡萄球菌對萬古霉素、替考拉寧、苯唑西林敏感率較高，對其他抗菌藥物敏感率較低。見表2。

2.3主要革蘭陰性菌對藥物敏感率分析 肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌對頭孢呋辛、頭孢噻肟、亞胺培南敏感率較高，對其他抗菌藥物較低。見表3。

2.4耐藥基因SHV、TEM凝膠電泳圖 43株革蘭陰性菌中，產(chǎn)ESBLs的細菌共17株，占39.53%。其中肺炎克雷伯菌7株，占41.78%，大腸埃希菌、銅綠假單胞菌各5株，占29.41%。耐藥基因電泳見圖1、圖2。

2.5兩組IgA、IgG及IgM水平比較 與未感染組比較，感染組IgA、IgG及IgM水平顯著降低(P<0.05)。見表4。

表2 主要革蘭陽性菌對藥物敏感率〔n(%)〕

表3 主要革蘭陰性菌對藥物敏感率分析〔n(%)〕

圖1 耐藥基因SHV凝膠電泳(M為DNA標志物)

圖2 耐藥基因TEM凝膠電泳(M為DNA標志物)

表4 兩組IgA、IgG及IgM水平比較

3 討 論

肺癌位于所有惡性腫瘤之首，男性發(fā)病率顯著高于女性，隨著社會經(jīng)濟發(fā)展，肺癌發(fā)生率仍在上升，確診時多為腫瘤中晚期，發(fā)生轉(zhuǎn)移，嚴重威脅人們生命健康〔11〕。化療能夠在一定程度延長患者生存期，但不良反應(yīng)和毒副作用較大，導(dǎo)致白細胞數(shù)量下降，影響免疫功能〔12〕。肺癌患者化療后易發(fā)生肺部感染，另外老年患者的多有阻塞性肺炎，且消耗狀態(tài)，自身排痰能力降低，無法將分泌物及時排出，感染發(fā)生風(fēng)險更高，感染的發(fā)生不僅影響化療效果，還可加重臨床癥狀，導(dǎo)致死亡〔13〕。本研究中，老年肺癌化療患者肺部感染發(fā)生率為43.59%，說明化療后肺部感染發(fā)生率較高，臨床需采取積極措施控制感染發(fā)生。因此，研究化療后肺部感染患者病原菌分布及對抗菌藥物的敏感性十分重要，有助于控制感染，合理使用抗生素，降低病死率。

近年來，分析化療后肺部感染患者病原菌的研究較多，各檢測結(jié)果存在部分差異，但主要以革蘭陰性菌為主。本研究中，革蘭陰性菌居多，主要為大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌多，革蘭陽性菌和真菌相對較少。諸君等〔14〕的研究結(jié)果顯示，革蘭陽性菌檢出率較低而真菌較高。真菌感染是引起免疫力低下者死亡的原因，治療該類感染的藥物相對較少，且易出現(xiàn)交叉耐藥性。本研究與諸君等〔14〕的研究結(jié)果具有差異。可能是由于不同地區(qū)、不同醫(yī)院的病原菌種類、抗菌藥物使用習(xí)慣及采集的痰標本合格率不同。隨著抗菌藥物的濫用，使得病原菌的耐藥率呈上升趨勢。由于化療可提高肺部感染發(fā)生風(fēng)險，患者需要接受長期大劑量使用抗菌藥物治療，增加其耐藥性發(fā)生。革蘭陰性菌產(chǎn)生ESBLs是其對β-內(nèi)酰胺酶類藥物耐藥的機制，國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)產(chǎn)ESBLs的基因型約700，SHV、TEM、CTX-M最為常見。不同地區(qū)、不同類型感染患者耐藥基因型有一定差異〔15，16〕。張晶晶等〔17〕研究顯示，CTX-M、SHV在河北省醫(yī)院肺部感染患者中較常見。ESBLs通過水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，是此類藥物失去活性，進而產(chǎn)生耐藥性。本研究針對耐藥基因進行檢測，結(jié)果顯示，部分病原菌攜帶SHV、TEM耐藥基因。有研究顯示，SHV、TEM耐藥基因可在不同或同種菌株間進行傳播，引起細菌耐藥〔18〕。本文結(jié)果顯示，革蘭陰性菌對頭孢呋辛、頭孢噻肟、亞胺培南敏感率相對較高。針對以上研究結(jié)果，臨床可選擇碳青霉烯類、頭孢噻肟、頭孢呋辛等藥物治療。檢測化療后肺部感染患者耐藥基因，并進行藥敏試驗，對指導(dǎo)抗菌藥物使用具有十分重要的臨床意義。

化療藥物在殺滅惡性腫瘤細胞的通道可抑制生殖、骨髓造血及胃腸道等正常增殖活躍期細胞功能，使患者抵抗力下降，增加感染發(fā)生風(fēng)險，降低生活質(zhì)量〔19〕。呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)感染是惡性腫瘤患者化療后常出現(xiàn)的感染部位〔20〕。金劍英等〔21〕分析顯示，老年肺癌患者化療后合并肺部感染患者血清IgA、IgG及IgM水平顯著降低，化療時間大于2 w是影響其發(fā)生肺部感染的獨立危險因素。免疫球蛋白是一種能夠清除致病菌、抗原等的物質(zhì)。本研究結(jié)果說明老年肺癌患者化療后肺部感染可顯著影響患者免疫功能。IgA是由漿細胞產(chǎn)生的，具有抗菌作用的物質(zhì)；IgG是在免疫球蛋白中占80%左右，抗感染作用較強；IgM是免疫球蛋白中產(chǎn)生最早的，在早期感染疾病中即可發(fā)揮抗菌作用〔22〕。體液免疫是通過IgA、IgG及IgM阻止病原體與細胞結(jié)合，其水平降低，表明機體免疫力下降〔23〕。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤也能夠合成IgG，在肺癌組織中表達顯著高于正常組織，與疾病預(yù)后、腫瘤分期及轉(zhuǎn)移具有密切聯(lián)系〔24〕。劉聯(lián)斌等〔25〕研究顯示，老年肺癌患者化療后肺部感染可加劇免疫功能異常。本研究與以上研究結(jié)果相一致。經(jīng)相關(guān)藥物及護理干預(yù)治療可明顯降低化療對機體免疫功能的影響，改善預(yù)后。

綜上所述，老年肺癌患者化療后肺部感染病原菌主要為革蘭陰性菌，攜帶耐藥基因型為SHV、TEM，發(fā)生肺部感染患者的IgA、IgG及IgM水平顯著下降。