IL-1β通過調節Stathmin/FAK通路促進人真皮成纖維細胞遷移的作用及機制

何詠磬，李凌霏，岑蕊言，鄧雨萌，楊桂紅，雷霞

成纖維細胞(fibroblast)是一類具有收縮功能的肌纖維母細胞表型的細胞，當皮膚創面形成后，炎癥啟動并加速成纖維細胞遷移，從而促進創面愈合[1-2]，但具體機制仍不十分清楚。Stathmin是一種微管解聚蛋白，參與微管動力學的調節。本課題組前期研究[3]發現，其表達水平與皮膚成纖維細胞增殖和遷移密切相關，提示Stathmin在調控皮膚創面愈合中具有重要作用，但其機制遠未闡明。黏著斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)是一種非受體酪氨酸激酶，在參與調節細胞遷移和增殖等過程中起關鍵作用[4]，既往研究[5-6]表明，炎癥可以促進FAK活化并促進細胞增殖和遷移。但FAK是否參與調節炎癥狀態下皮膚成纖維細胞遷移以及該過程是否與Stathmin有關均不清楚。因此，本研究擬闡明IL-1β通過調節Stathmin/FAK通路介導人真皮成纖維細胞遷移的作用和初步機制。

1 材料和方法

1.1材料 人真皮成纖維細胞(human dermal fibroblast,HDF)購自美國ATCC公司；DMEM高糖培養基、胎牛血清(FBS)購自上海VivaCell公司；PBS緩沖液干粉購自索萊寶(Solarbio)公司；鏈霉素-青霉素雙抗、0.25%胰酶(含EDTA)、BCA蛋白測定試劑盒、電轉液購自碧云天公司；細胞裂解液購自北京鼎國公司；人IL-1β重組蛋白購自Sino Biological公司；FAK、Stathmin抗體購自Proteintech公司；GAPDH、Anti-rabbit IgG HRP-linked抗體購自Cell Signaling Technology(CST)公司；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒、TBST購自上海生工公司；電泳緩沖液粉劑購自塞維爾公司；PVDF膜購自美國Millipore公司；ECL超敏發光液購自碩華公司；小干擾RNA購自吉瑪基因公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養和模擬體外炎癥 配制加入雙抗和10%胎牛血清的DMEM高糖培養基用于培養人真皮成纖維細胞。……