煙草秸稈綠原酸提取工藝優(yōu)化及其抑菌效果研究

張?jiān)サ? 王衛(wèi)民 倪博 馬曉寒 李俊領(lǐng) 許自成 賈瑋 史久長(zhǎng)

摘要：為擴(kuò)展煙草秸稈的利用途徑，探究煙草秸稈綠原酸對(duì)煙草疫霉的抑菌效果，采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法優(yōu)化煙草秸稈綠原酸微波輔助提取工藝，并通過(guò)離體培養(yǎng)探討煙草秸稈綠原酸對(duì)煙草疫霉菌的抑制作用。單因素及響應(yīng)面結(jié)果表明，煙草秸稈綠原酸最佳提取工藝為料液比1∶15（g·mL-1），提取溫度50.03 ℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，此時(shí)粗提物中綠原酸含量為3.48 mg·g-1；離體條件下，煙草秸稈綠原酸的添加均抑制了疫霉菌的生長(zhǎng)，其中175 mg·L-1煙草秸稈綠原酸對(duì)菌落直徑的抑制效果最為顯著，抑菌率高達(dá)32%。此外，碘化丙啶（PI）染色結(jié)果表明，175 mg·L-1的煙草秸稈綠原酸可通過(guò)破壞煙草疫霉菌細(xì)胞膜的完整性抑制菌絲生長(zhǎng)。研究結(jié)果為煙草秸稈有效利用和新型天然植物源殺菌劑開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：煙草秸稈；綠原酸；響應(yīng)面優(yōu)化；抑菌效果doi：10.13304/j.nykjdb.2021.0888

中圖分類號(hào)：S38 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：10080864（2023）01011909

煙草，茄科（Solanaceae）煙草屬（Nicotiana）植物[1]，是一種重要的葉用經(jīng)濟(jì)作物[23]。我國(guó)是世界上最大的煙草生產(chǎn)國(guó)，每年煙草生產(chǎn)量占世界總量的40%[4]。煙草秸稈（以下簡(jiǎn)稱煙稈）是煙草生產(chǎn)中占比最高的農(nóng)業(yè)廢棄物，我國(guó)年產(chǎn)煙稈高達(dá)270萬(wàn)t[5]。由于煙稈成分復(fù)雜，所含木質(zhì)纖維素和尼古丁不易被微生物分解，還田處理困難，煙稈焚燒不僅造成大量生物資源浪費(fèi)，還造成嚴(yán)重的環(huán)境污染[67]。因此，亟需尋找新的利用方式。

綠原酸（chlorogenic acid， CGA）是植物經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種次生代謝物質(zhì)[8]，素有“植物黃金”的美稱[9]，具有抑菌、抗氧化等多種生物活性[1011]。研究表明，綠原酸可誘導(dǎo)活性氧的積累，導(dǎo)致藤倉(cāng)鐮孢菌（Fusarium fujikuroi）死亡，進(jìn)而降低圣女果采后腐爛病的發(fā)生[12]。此外，綠原酸通過(guò)破壞真菌細(xì)胞膜的通透性對(duì)核盤(pán)菌（Sclerotiniasclerotiorum）、番茄鐮刀菌（Fusarium solanieumartii）、黃萎病菌（Verticillium dahliae）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）等病原真菌產(chǎn)生抑制作用[13]。

綠原酸是煙草中含量較高的多酚類化合物，占煙草總多酚含量的75%～95%[14]，目前有關(guān)煙草綠原酸的研究大多集中在煙葉上，而煙稈的綠原酸鮮有報(bào)道。本研究以煙草秸稈為原料，采用微波輔助提取工藝，結(jié)合響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化，并以煙草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）為對(duì)象檢測(cè)煙稈綠原酸的抑菌效果，以期實(shí)現(xiàn)資源的良性循環(huán)利用。此外，研究結(jié)果也有助于煙草的多用途利用。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑

煙草品種為‘秦?zé)?6，秸稈取自洛陽(yáng)植煙區(qū)；綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；無(wú)水乙醇等試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。受試菌株為本實(shí)驗(yàn)室保存的煙草疫霉菌。

1.2 方法

1.2.1 煙草秸稈樣品的預(yù)處理 將煙草秸稈在105 ℃殺青15 min，80 ℃烘干至恒重后冷卻，用粉碎干燥機(jī)將秸稈粉碎后過(guò)60目篩，裝入自封袋保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，用純水完全溶解后定容至100 mL容量瓶中，分別吸取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品5.00、7.50、10.00、12.50、15.00、17.50、20.00 mL 置于7 個(gè)100 mL容量瓶中，用純水定容后搖勻，以純水為對(duì)照，在最大吸收波長(zhǎng)327 nm處測(cè)其吸光度。以吸光光度值為Y 軸；綠原酸質(zhì)量濃度為X 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 煙草秸稈中綠原酸提取單因素試驗(yàn) 將乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取溫度和提取時(shí)間作為考察因素，固定提取溫度50 ℃、提取時(shí)間30 min、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、料液比1∶10 （g·mL-1）、微波時(shí)間180 s，設(shè)計(jì)乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%、40%、50%、60%；料液比（g·mL-1）為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25；提取溫度為40、50、60、70 ℃；提取時(shí)間為60、80、100、120 min。依據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取料液比（A）、乙醇體積分?jǐn)?shù)（B）、提取溫度（C）為自變量，利用Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行3因素3水平的Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)煙草秸稈中綠原酸提取條件進(jìn)行優(yōu)化。因素水平見(jiàn)表1。

綠原酸含量=（C × V/W）×10-3 （1）

式中，C 為根據(jù)回歸方程計(jì)算得出的綠原酸質(zhì)量濃度，mg·L-1；V 為提取液體積，mL；W 為煙草秸稈干質(zhì)量，g。

1.2.4 優(yōu)化煙草秸稈中綠原酸提取工藝 使用Design Expert 8.0.6軟件對(duì)響應(yīng)面試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，最終獲得煙稈中綠原酸的最佳提取條件。

1.2.5 OA培養(yǎng)基制備 對(duì)照組：將30 g燕麥加水煮爛（25 min 左右，燕麥膨脹微微裂開(kāi)即可），用4層紗布過(guò)濾于燒杯中，加水補(bǔ)足至1 000 mL，加入15 g瓊脂，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅盅b于三角瓶中，121 ℃、0.1 MPa條件下滅菌25 min。

試驗(yàn)組：將最佳條件下提取的綠原酸溶液（得率約為3.5 mg·g-1）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至恒重后，用純水完全溶解，定容至10 mL（溶液A：綠原酸質(zhì)量濃度為0.003 5 mg·L-1）。將15 g燕麥加水煮爛，用4層紗布過(guò)濾于燒杯中補(bǔ)水至475 mL，加入稱量準(zhǔn)確的7.5 g瓊脂，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅盅b于三角瓶中（溶液B），121 ℃、0.1 MPa 條件下滅菌25 min。分別取1.0、2.5、5.0 mL A液與B液混勻至100 mL，制成帶藥平板，此時(shí)換算得到培養(yǎng)基中綠原酸質(zhì)量濃度分別為35.0、87.5和175.0 mg·L-1。

1.2.6 綠原酸對(duì)煙草疫霉菌絲生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)前，超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外燈殺菌消毒，同時(shí)將工作服以及雙手用75% 酒精消毒；試驗(yàn)中所用器具滅菌后置于超凈工作臺(tái)，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程在酒精火焰旁進(jìn)行[15]。用打孔器在培養(yǎng)5～7 d 的等直徑疫霉菌落邊緣（生長(zhǎng)狀況基本一致）打取直徑為5 mm 的圓形菌餅，再用接菌針挑至平板中間，用封口膜封好后將培養(yǎng)基倒置于26 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。待對(duì)照組長(zhǎng)滿后觀察試驗(yàn)組菌絲的生長(zhǎng)情況，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算抑菌率，每個(gè)處理重復(fù)3次。

抑菌率=對(duì)照菌絲直徑- 試驗(yàn)菌絲直徑／對(duì)照菌絲直徑（2）

1.2.7 菌絲染色 用無(wú)菌刮刀分別刮取1.2.5中對(duì)照組和試驗(yàn)組適量菌絲，在10%福爾馬林溶液中浸泡固定1 h，用PBS緩沖液反復(fù)沖洗數(shù)次，滴加20 mg·L-1 的碘化丙啶（propidium iodide，PI）染液200 mL，置于暗處30 min，將帶有菌落的液滴放在熒光顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），用最小二乘法擬合，得到回歸方程：y=0.048 1x-0.002 2，R2=0.999 9。

2.2 各因素對(duì)煙草秸稈粗提物中綠原酸含量的影響

2.2.1 料液比對(duì)綠原酸含量的影響 由圖2可知，隨著料液比的增加，煙草秸稈粗提物中的綠原酸含量呈逐漸上升的趨勢(shì)，在料液比為1∶25時(shí)綠原酸含量高達(dá)2.5 mg·g-1，相較于1∶10的提高了1倍多。這說(shuō)明酚類物質(zhì)的提取與料液比有關(guān)，料液比越大，溶劑對(duì)酚類的浸提越充分。但是增加料液比的同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致生產(chǎn)成本增加，因此需選取最適宜的料液比。

2.2.2 提取溫度對(duì)綠原酸含量的影響 由圖3可知，煙稈粗提物中綠原酸含量隨著提取溫度的升高呈先增加后降低的趨勢(shì)，提取溫度為60 ℃時(shí)提取率達(dá)到最大，約為2.08 mg·g-1，相較于50和70 ℃處理分別提高了15.51%和30.71%。提取溫度增加更有利于提高綠原酸的含量，因?yàn)楦邷厥狗肿舆\(yùn)動(dòng)加快，傳質(zhì)擴(kuò)散系數(shù)也急劇增加[16]，綠原酸大量從煙稈中浸出，使綠原酸含量急劇增加，由于綠原酸中含有酯鍵、不飽和雙鍵和多元酚等不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，故當(dāng)溫度持續(xù)增加時(shí)，綠原酸反而會(huì)發(fā)生分解、氧化和異構(gòu)化，導(dǎo)致綠原酸含量降低[17]。

2.2.3 提取時(shí)間對(duì)綠原酸含量的影響 由圖4可知，在微波輔助提取作用下，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，煙草秸稈粗提物中綠原酸含量逐步增加，在100 min時(shí)達(dá)到最大。綠原酸含量在60～100 min內(nèi)呈直線上升的趨勢(shì)，而在100～120 min內(nèi)隨著時(shí)間增加逐漸下降。這可能是因?yàn)樘崛r(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致綠原酸氧化分解或水解[18]，因此高溫下不宜提取過(guò)長(zhǎng)時(shí)間，最佳提取時(shí)間為100 min，此時(shí)綠原酸含量為1.75 mg·g-1，相較82 和120 min 處理得率提高了17.83%和26.67%。

2.2.4 乙醇濃度對(duì)綠原酸含量的影響 由圖5可知，綠原酸含量隨乙醇體積分?jǐn)?shù)增大而增大，乙醇體積分?jǐn)?shù)為50% 時(shí)綠原酸含量達(dá)到最大值，為1.90 mg·g-1。溶劑增加更有利于綠原酸的析出，但乙醇用量持續(xù)增加時(shí)，綠原酸含量反而略有降低，這是由于過(guò)高的乙醇體積分?jǐn)?shù)不僅會(huì)揮發(fā)，還可能使其他雜質(zhì)的滲出率有所增加[19]，從而導(dǎo)致綠原酸純度不高，降低綠原酸含量。

2.3 煙草秸稈中綠原酸提取工藝優(yōu)化結(jié)果

2.3.1 Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，對(duì)煙草秸稈綠原酸進(jìn)行三因素三水平共17 組響應(yīng)面分析設(shè)計(jì)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。可以看出，不同因素水平條件下，綠原酸含量在1.45～2.65 mg·g-1 之間，其中料液比為1∶25（g·mL-1）時(shí)綠原酸含量均較高（2.49～2.65 mg·g-1），而1∶15 的處理均較低（1.45～1.58 mg·g-1），表明料液比對(duì)提取效果影響較大。

2.3.2 回歸模型的建立及顯著性分析 采用Design Expert8.0.6軟件對(duì)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，獲得煙草秸稈粗提物中綠原酸含量對(duì)三因素的二元多次回歸模型。

Y=2.11+0.53A ? 0.024B+0.051C ? 0.003 4AB ?0.017AC?0.006 5BC? 0.15A2+0.034B2+0.10C2 （3）

對(duì)回歸數(shù)學(xué)模型進(jìn)行方差分析（表3），檢驗(yàn)方程的有效性和各因子的偏回歸系數(shù)。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可知，模型F 值為215.52，P 值<0.000 1，表明回歸模型為極顯著；方差的失擬項(xiàng)（0.736 2）>0.05，故失擬項(xiàng)不顯著。模型R2為0.996 4，證明模型的選擇對(duì)綠原酸含量的影響可信度較高，可以用于對(duì)綠原酸含量的分析與預(yù)測(cè)。由表3可知，各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響為A>C>B，即料液比對(duì)綠原酸含量影響最大，其次是提取溫度，乙醇體積分?jǐn)?shù)影響最小。此外，A2對(duì)綠原酸含量影響為極顯著（P<0.001），C2為高度顯著（P<0.01）。

2.3.3 響應(yīng)面分析 使用Design Expert 8.0.6 軟件得到響應(yīng)面和等高線，如圖6所示。響應(yīng)面越陡峭，表明各因素之間的兩兩交互作用越顯著，也表明該因素對(duì)響應(yīng)值的影響越顯著。料液比和提取溫度，乙醇體積分?jǐn)?shù)和料液比兩兩交互作用顯著，表現(xiàn)在這兩組交互的響應(yīng)面坡度陡峭。

2.3.4 驗(yàn)證性試驗(yàn) 由軟件Design Expert 8.0.6分析得出煙稈粗提物中綠原酸含量最高的條件為料液比1∶15，提取溫度50.03 ℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，此時(shí)綠原酸含量為3.48 mg·g-1。考慮實(shí)際操作，以提取溫度為50 ℃，按照優(yōu)化后的條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果（表4）表明，所得綠原酸含量均值為3.49 mg·g-1，與預(yù)測(cè)值3.48 mg·g-1 接近，說(shuō)明該響應(yīng)面得到的預(yù)測(cè)值準(zhǔn)確可靠，回歸方程能夠較為準(zhǔn)確地反映各因素對(duì)綠原酸含量的影響。

2.4 綠原酸對(duì)煙草疫霉菌的影響

CK、35和175 mg·L-1 CGA處理下的煙草疫霉菌長(zhǎng)勢(shì)如圖7所示。可以看出，低水平時(shí)，煙稈綠原酸對(duì)煙草疫霉菌的生長(zhǎng)幾乎沒(méi)有徑向抑制，但菌落狀態(tài)有明顯的改變，菌落整體分布較為均勻，但菌絲密度顯著降低，能明顯看到中間菌餅，而對(duì)照組菌絲密集，幾乎完全掩沒(méi)中間菌餅，均勻完整的覆蓋整個(gè)培養(yǎng)基。煙稈綠原酸質(zhì)量濃度為175mg·L-1時(shí)，對(duì)煙草疫霉菌絲徑向生長(zhǎng)抑制效果顯著，菌落直徑明顯減小，且菌絲稀疏，分布明顯不均。煙稈綠原酸質(zhì)量濃度為175 mg·L-1時(shí)對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)到32%。因此，綠原酸質(zhì)量濃度越高對(duì)煙草疫霉菌絲的抑制作用越顯著。

此外，熒光染料PI是一種能對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色劑，不能透過(guò)活細(xì)胞膜，但能夠與破損細(xì)胞膜內(nèi)的DNA特異結(jié)合，形成紅色熒光[20]。圖8中普通光場(chǎng)下，對(duì)照組菌絲密集且飽滿圓潤(rùn)，表面較為光滑，而在綠原酸的影響下，菌絲形態(tài)發(fā)生明顯變化，不僅疏松細(xì)小、表面粗糙，甚至有部分凹陷。熒光下未經(jīng)處理的菌絲僅有少許染色，試驗(yàn)組菌絲幾乎全部變紅，表明綠原酸處理后，菌絲細(xì)胞膜破損，綠原酸能夠破壞煙草疫霉菌絲的細(xì)胞膜，使細(xì)胞死亡，從而達(dá)到抑菌效果。

3 討論

煙稈綜合利用新途徑是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一，鮮見(jiàn)提取其活性物質(zhì)用于植物病害防治。綠原酸對(duì)葡萄、黃瓜、圣女果、草莓等多種果蔬具有良好的保鮮功能[2122]，此外，綠原酸在增強(qiáng)植物抗病性等方面也發(fā)揮著重要的作用。Jiao等[23]研究表明，綠原酸可通過(guò)水楊酸介導(dǎo)的信號(hào)通路誘導(dǎo)桃對(duì)擴(kuò)展青霉（Penicillium expansum）的抗性。同樣，Xue等[24]認(rèn)為，綠原酸與內(nèi)源性水楊酸具有很強(qiáng)的協(xié)同調(diào)控作用。為推進(jìn)煙草多用途利用，實(shí)現(xiàn)資源最大化利用，本文以煙草秸稈為原料，使用微波輔助提取技術(shù)，結(jié)合響應(yīng)面法優(yōu)化研究了料液比、提取溫度、提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)煙稈中粗提綠原酸含量的影響，獲取最佳提取工藝條件：料液比1∶15（g·mL-1），提取溫度50.03 ℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，微波時(shí)間180 s，此時(shí)綠原酸含量為3.48 mg·g-1。進(jìn)一步開(kāi)展煙稈綠原酸體外抑菌試驗(yàn)，證實(shí)175 mg·L-1綠原酸對(duì)煙草疫霉菌菌絲有顯著的抑制作用，抑菌率可達(dá)32%，且通過(guò)損害煙草疫霉菌細(xì)胞膜的完整性進(jìn)而達(dá)到抑菌效果，這與凌天孝等[25]研究肉桂醛對(duì)煙草疫霉菌的抑制機(jī)理相一致。煙稈廉價(jià)易得，綠原酸提取工藝簡(jiǎn)單，煙草秸稈綠原酸有望發(fā)展成為一種新的天然植物源殺菌劑。

參考文獻(xiàn)

［1］ 陳棟賢，龔加，楊宇玲，等.煙堿提取及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J].廣

州化工， 2021， 49（13）： 1-4.

CHEN D X， GONG J， YANG Y L， et al .. Research progress of

nicotine extraction and its application [J]. Guangzhou Chem.

Ind.， 2021， 49 （13）： 1-4.

［2］ 梁永進(jìn)，尚海麗，盤(pán)文政，等.微生物菌肥對(duì)‘K326烤煙生長(zhǎng)

發(fā)育及產(chǎn)質(zhì)量的影響[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2021， 37（23）： 45-51.

LIANG Y J， SHANG H L， PAN W Z， et al .. Effects of

microbial fertilizer on growth， yield and quality of‘ K326 fluecured

tobacco [J]. Chin. Agron. Bull.， 2021， 37 （23）： 45-51.

［3］ 李少明，湯利，范茂攀，等.不同微生物腐熟劑對(duì)煙末高溫堆

肥腐熟進(jìn)程的影響[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)， 2008，27（2）：

783-786.

LI S M， TANG L， FAN M P， et al .. Effects of different

microbial decomposing agents on the decomposition process of

tobacco waste high temperature compost [J]. J. Agric. Environ.

Sci.， 2008，27（2）： 783-786.

［4］ LIU Y， DONG J， LIU G， et al .. Co-digestion of tobacco waste

with different agricultural biomass feedstocks and the inhibition of

tobacco viruses by anaerobic digestion [J]. Bioresour. Technol.，

2015， 189： 210-216.

［5］ 鄭堅(jiān)強(qiáng)，劉彬，王小飛，等.煙草秸稈納米纖維素的制備及表

征分析[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2021， 50（3）： 165-173.

ZHENG J Q， LIU B， WANG X F， et al .. Preparation and

characterization of tobacco straw nano cellulose [J]. Henan

Agric. Sci.， 2021， 50 （3）： 165-173.

［6］ 趙德清，戴亞，馮廣林，等.煙稈的化學(xué)成分、纖維形態(tài)與生

物結(jié)構(gòu)[J].煙草科技， 2016， 49（4）： 80-86.

ZHAO D Q， DAI Y， FENG G L， et al .. Chemical composition，

fiber morphology and biological structure of tobacco stalk [J].

Tob. Sci. Technol.， 2016， 49 （4）： 80-86.

［7］ 薄國(guó)棟，申國(guó)明，陳旭，等.秸稈還田對(duì)植煙土壤酶活性及細(xì)

菌群落多樣性的影響[J].中國(guó)煙草科學(xué)， 2017， 38（1）： 53-58.

BO G D， SHEN G M， CHEN X， et al .. Effects of straw returning

on enzyme activity and bacterial community diversity in tobacco

planting soil [J]. China Tob. Sci.， 2017， 38 （1）： 53-58.

［8］ 陳婭，王安琪，劉聰，等.灰氈毛忍冬LmC3H1 基因的克隆及表

達(dá)模式與綠原酸含量相關(guān)性分析[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，

2020， 26（9）： 167-175.

CHEN Y， WANG A Q， LIU C， et al .. Cloning and expression

pattern of lmc3h1 gene of Lonicera macranthoides and its

correlation with chlorogenic acid content [J]. Chin. J. Exp.

Prescriptions， 2020， 26 （9）： 167-175.

［9］ 馬紅梅，朱蕓菲，魏軍，等.藏蒲公英多糖納米乳對(duì)小鼠免疫

機(jī)能的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2013， 41（1）： 214-216.

MA H M， ZHU Y F， WEI J， et al .. Effect of Tibetan dandelion

polysaccharide nano emulsion on immune function of mice [J].

Jiangsu Agric. Sci.， 2013， 41 （1）： 214-216.

［10］ 隋洪玉，李秀霞，趙永勛，等.蒲公英總黃酮提取液對(duì)D-gal衰

老模型小鼠腦組織的抗氧化作用[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，

2004（6）： 3-4.

SUI H Y， LI X X， ZHAO Y X， et al .. Antioxidant effect of total

flavonoids extract of dandelion on brain tissue of D-gal aging

model mice [J]. Heilongjiang Med. Sci.， 2004 （6）： 3-4.

［11］ 李月影，王月囡，成娜娜，等.蒲公英燕麥牛奶復(fù)合保健飲料

制作工藝的研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工， 2018， 45（4）： 38-41.

LI Y Y， WANG Y N， CHENG N N， et al .. Study on the

preparation technology of dandelion oat milk compound health

beverage [J]. Agric. Products Process.， 2018， 45 （4）： 38-41.

［12］ KAI K， WANG R， BI W， et al .. Chlorogenic acid induces ROSdependent

apoptosis in Fusarium fujikuroi and decreases the

postharvest rot of cherry tomato [J]. World J. Microbiol. Biotechnol.，

2021， 37（6）： 1-9.

［13］ MARTINEZ G， REGENTE M， JACOBI S， et al .. Chlorogenic

acid is a fungicide active against Phytopathogenic fungi [J].

Pesticide Biochem. Physiol.， 2017， 140： 30-35.

［14］ 張花，顧麗莉，黃智華，等.煙草多酚的提取分離及分析研究

進(jìn)展[J].化學(xué)通報(bào)， 2021， 84（9）： 900-905.

ZHANG H， GU L L， HUANG Z H， et al .. Research progress on

extraction， separation and analysis of tobacco polyphenols [J].

Chem. Bull.， 2021， 84 （9）： 900-905.

［15］ 倪美仙.糧食真菌檢驗(yàn)及無(wú)菌操作控制方法的探討[J].糧食

與飼料工業(yè)， 2014（4）： 65-67.

NI M X. Discussion on inspection and aseptic operation control

methods of grain fungi [J]. Grain Feed Ind.， 2014 （4）： 65-67.

［16］ 趙御锜，于方園.金銀花中綠原酸提取的研究前景和應(yīng)用概

述[J].食品安全導(dǎo)刊， 2019（6）： 162.

［17］ TROGU L C， MACRAE R. A study of the effect of roasting on

the chlorogenic acid composition of coffee using HPLC [J].

Food Chem.， 1984， 15（3）： 219-227.

［18］ 郭華，刁全平，張博，等.楊樹(shù)口蘑多糖的超聲波輔助提取工

藝及其抗氧化活性[J].食品工業(yè)科技， 2018， 39（5）： 180-184.

GUO H， DIAO Q P， ZHANG B， et al .. Optimization of

ultrasonic-assisted extraction technology and antioxidant activity

of Polysaccharide from Tricholoma populinum [J]. Food Ind. Sci.

Technol.， 2018， 39 （5）： 180-184.

［19］ 李愛(ài)民，姚元枝，郭瑛，等.超聲波提取接骨草葉中綠原酸的

工藝優(yōu)化[J].食品工業(yè)科技，2013， 34（17）： 232-235，240.

LI A M， YAO Y Z， GUO Y， et al .. Optimization of ultrasonicassisted

extraction process of chlorogenic acid from Sambucus

chinensis Lindl. leaves [J]. Food Ind. Sci. Technol.， 2013，

34 （17）： 232-235，240.

［20］ TIAN J， BAN X， ZENG H， et al .. The mechanism of antifungal

action of essential oil from dill （Anethum graveolens L.） on

Aspergillus flavus [J/OL]. PLoS One， 2012， 7（1）： e30147 [2022-09-

02]. https：//doi.org/10.1371/journal.pone.0030147.

［21］ 沈奇，金春雁，張衛(wèi)明，等.蒲公英綠原酸及其包合物對(duì)葡萄

保鮮作用的研究[J].食品科學(xué)， 2007， 28（6）： 332-335.

SHEN Q， JIN C Y， ZHANG W M， et al .. Effects of dandelion

chlorogenic acid and its inclusion compounds on grape

preservation [J]. Food Sci.， 2007， 28（6）： 332-335.

［22］ 何念武，楊超.杜仲葉綠原酸對(duì)果蔬保鮮作用的試驗(yàn)研究[J].

江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2018， 30（11）： 71-75.

HE N W， YANG C. Experimental study on preservation of

fruits and vegetables by chlorogenic acid from Eucommia

ulmoides leaves [J]. Jiangxi Agric. J.， 2018， 30 （11）： 71-75.

［23］ JIAO W， LI X， WANG X， et al .. Chlorogenic acid induces

resistance against Penicillium expansum in peach fruit by

activating the salicylic acid signaling pathway [J]. Food Chem.，

2018， 260（15）： 274-282.

［24］ XUE L J， GUO W， YUAN Y， et al .. Constitutively elevated

salicylic acid levels alter photosynthesis and oxidative state

but not growth in transgenic Populus [J]. Plant Cell， 2013，

25（7）： 2714-2730.

［25］ 凌天孝，陳健，薛延豐，等.肉桂醛對(duì)煙草疫霉菌的體外抑制

作用[J].中國(guó)煙草學(xué)報(bào)， 2017， 23（4）： 70-76.

LING T X， CHEN J， XUE Y F， et al .. Inhibitory effect of

cinnamaldehyde against Phytophthora nicotiance in vitro [J].

Acta Tabacaria Sin.， 2017， 23 （4）： 70-76.

（責(zé)任編輯：溫小杰）