金釵石斛活性成分提取分離及胃黏膜保護活性研究

戴文娜，蘭海崇

（1. 蕪湖職業技術學院食品與生物工程學院，江蘇蕪湖 241003；2. 遵義陸圣康源科技開發有限責任公司，貴州 遵義 564100）

金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl） 為多年生草本，外形如古代頭上的發釵而得名[1]，大部分分布于我國西南、華南、臺灣等地。金釵石斛是我國傳統的名貴中藥[2-4]，在“神農本草經”中列為上品，傳統中醫研究已證實，石斛具有護胃和增強免疫等功效[5-7]，俗稱藥黃金。

目前，喝酒成為職場人士常見的交流活動，喝酒過多容易對人造成的胃部傷害，導致胃黏膜損傷人群逐漸增多。由于缺乏針對性的胃黏膜損傷治療措施，尋求能夠保護胃黏膜的產品或組分，成為研究者的研究熱點，也是普通人群非常需要的產品。因此，研究金釵石斛對胃黏膜的保護作用，以期為消費者需要胃黏膜的保護產品提供更多選擇。

1 材料和方法

1.1 試驗動物

Wister 大鼠，體重200～220 g，雄性，南京市江寧區青龍山動物繁殖場提供。

1.2 提取條件研究

分別取5 g 原料于提取瓶中，向其中加入一定比例的去離子水，放入水浴鍋內，經加熱、攪拌后提取，再經過濾得濾液，并測定其中的多糖成分含量。多糖含量的測定按照《中華人民共和國藥典》（2015 版） 規定的石斛多糖測定方法進行。

1.3 金釵石斛提取物對乙醇誘導大鼠胃損傷保護作用的研究

按照文獻[8]報道的純乙醇誘導胃黏膜損傷方法進行該試驗。Wister 大鼠隨機分成4 組，每組8 只。空白組，模型組和試驗治療組（200，80 mg/kg）。空白組和模型組在整個灌胃過程中均灌胃生理鹽水。治療組的大鼠持續灌胃28 d，每日1 次。第29 天時，禁食24 h（除空白組外） 后，其余各組大鼠灌胃乙醇（1 mL/只） 來制造胃黏膜損傷模型。1 h 后，將大鼠用乙醚麻醉。將大鼠安樂死后，將胃迅速取出，沿胃大彎剪開，用冷生理鹽水沖洗內容物，展開拍照，觀察胃損傷情況。剪下一部分胃組織浸泡在生理鹽水中以做生化分析。-80 ℃下儲存備用。

1.4 肉眼觀察胃黏膜損傷

試驗中采用肉眼觀察各組大鼠胃黏膜損傷的程度，并用游標卡尺進行大鼠胃組織損傷條帶的長和寬測量[1]，計算損傷指數（UI）。參考規則如下：出血點（1 個1 分），出血長度（1=1～5 mm，2=6～10 mm，3=10～15 mm，4=＞15 mm），出血寬度（1=1～2 mm，2=＞2 mm）。總分=出血點得分+出血長度得分+（出血寬度得分×2）。

1.5 胃組織中NO 含量的測定

大鼠胃組織用0.9%生理鹽水進行勻漿，收集上清液。NO 含量的測定按照試劑盒說明書操作步驟進行測定。

2 結果與分析

2.1 不同液料比對金釵石斛多糖得率的影響

為節約溶劑，并能最大限度地提取金釵石斛多糖成分，選擇合適的料液比至關重要。試驗探究不同料液比1∶20～1∶60（g∶mL） 對金釵石斛多糖得率的影響，并保持剩余參數保持不變（提取溫度90 ℃，提取時間120 min，提取1 次）。

不同液料比對多糖得率的影響見表1。

表1 不同液料比對多糖成分得率的影響

由表1 可知，當料液比從1∶20（g∶mL） 增加到1∶50（g∶mL） 時，金釵石斛多糖得率顯著性增加，且在1∶50（g∶mL） 時達到最大值，隨后隨著液料比的增加，金釵石斛多糖得率幾乎不變。造成這種現象的原因可能是當料液比達到合適的條件時，多糖幾乎已經完全溶解在溶劑中。綜合考慮，應選擇料液比1∶50（g∶mL） 進行后續試驗。

2.2 不同提取溫度對多糖得率的影響

為進一步提高多糖得率，試驗探究了溫度對多糖得率的影響，其他試驗條件不變（料液比1∶50（g∶mL），時間120 min）。

不同提取溫度對多糖得率的影響見表2。

表2 不同提取溫度對多糖得率的影響

由表2 可知，提取溫度從60 ℃增加到100 ℃時，多糖得率逐漸增加，并在100 ℃時多糖得率達到最大值。可能是當提取溫度增加時，傳質速率同時增加，使得多糖成分能夠從細胞內溢出并擴散至溶劑中[9]。因此，依據試驗結果應選擇提取溫度100 ℃為最佳提取溫度。

2.3 不同提取時間對多糖得率的影響

提取時間對多糖能否充分地被提取出來具有重要影響。由此可見，對多糖提取時間的優化也是必要的。試驗在其他試驗條件（提取溫度100 ℃，料液比1∶50（g∶mL）） 保持不變的條件下，對多糖的提取時間（60～150 min） 進行探究。

不同提取時間對多糖得率的影響見表3。

表3 不同提取時間對多糖得率的影響

由表3 可知，提取時間為60～150 min 時，多糖得率逐漸增加，并在120 min 時達到最大值，且在120～150 min 時，多糖得率幾乎不變，這是由于在原料與提取溶劑接觸120 min 時，多糖幾乎完全被提出，隨著時間的延長，多糖得率也不會發生變化。因此，應選擇120 min 為最佳提取時間。

研究結果表明，金色石斛多糖的較佳提取條件為，料液比1∶50（g∶mL），提取時間120 min，提取溫度100 ℃，在此條件下提取多糖，多糖提取率達7.1%。同時，對多糖提取物的多糖含量進行了分析，結果表明，在此條件下，金釵石斛提取物中多糖含量為22.3%

2.4 金釵石斛提取物對大鼠胃黏膜的作用

試驗中，研究了金釵石斛提取物對胃黏膜的保護作用。并采用酒精誘導損傷胃黏膜模型。試驗治療組連續28 d 灌胃金釵石斛水提物。之后除空白組外，每只均灌胃純乙醇1 mL 誘導胃黏膜損傷。

結果表明，空白組觀察不到肉眼可見的損傷。大鼠胃黏膜均色澤淡紅，表面光滑有彈性，黏膜皺襞完整。灌胃無水乙醇的大鼠，有不同程度的表面糜爛、線狀出血帶，水腫及深褐色條索狀潰瘍等。在模型對照組中可以觀察到組內大鼠胃黏膜損傷嚴重。與模型組相比，金釵石斛處理組的胃黏膜損傷有所減輕，大鼠胃組織的出血點和出血條帶明顯較少。

各組大鼠胃黏膜損傷指數見表4。

表4 各組大鼠胃黏膜損傷指數

由表4 可知，與模型組胃黏膜損傷指數UI 33.6相比，金釵石斛處理發揮顯著的胃黏膜保護作用（p＜0.05）。通過對大鼠胃黏膜UI 分析，可以得出金釵石斛提取物治療組低劑量組和高劑量組大鼠胃黏膜UI 比模型組UI 都出現了顯著降低，結果都具有顯著性，金釵石斛提取物的低劑量組和高劑量組都可以有效地降低由酒精造成的大鼠胃黏膜損傷。

2.5 金釵石斛水提物對大鼠胃組織中NO 含量的影響

在胃黏膜損傷模型組中，可以觀察到嚴重的胃黏膜損傷，并伴隨這NO 的大量產生。已有研究表明，大量的NO 釋放可以導致血管瘀血，造成胃黏膜出血性損傷。

試驗研究根據硝酸鹽/亞硝酸總量來測定大鼠胃組織中NO 的含量。由表5 可知，模型對照組大鼠胃組織中NO 的含量明顯高于空白對照組中大鼠胃組織中NO 的含量。相比于模型組，提取物組分可以顯著地抑制NO 的大量產生（p＜0.05）。試驗表明，金釵石斛提取物組分可以有效地降低NO 的大量異常生成。

金釵石斛水提物對NO 產生的影響見表5。

表5 金釵石斛水提物對NO 產生的影響

3 結論

結果表明，采用微波輔助萃取法提取多糖，提取效率高，最佳提取時間為120 min，最佳料液比為1∶50（g∶mL），在該條件下提取多糖的得率為7.1%，所得金釵石斛提取物的多糖含量為24.3%。動物試驗結果表明，與對照組比較，金釵石斛水提取物能夠明顯降低胃黏膜損傷指數，金釵石斛提取物具有顯著的胃黏膜保護作用。