油莎豆豆粕中黃酮類物質的提取及工藝優化

田佳澤，江悅艇，陳奕霖，廖海昌，侯羽婷，于亞莉

（吉林大學食品科學與工程學院，吉林長春 130062）

油莎豆屬于被子植物門中的單子葉植物綱莎草目莎草科莎草屬[1]，又稱為油莎草、鐵荸薺、地杏仁、地下核桃、人參果、油豆等，在國外又被稱作虎堅果、老虎豆等。油莎豆中各種營養成分豐富，除油脂、膳食纖維、糖、蛋白質、淀粉和維C、維E外，還富含人體所需的磷、鐵、鉀等礦物質[2]。此外，油莎豆中還含有豐富的生物活性物質，如甾醇、生物堿、丹寧、類黃酮等[3]。

21 世紀以來，國內外的許多學者對油莎豆中主要營養成分——油的提取進行了積極的探索[4]，但是對于榨油后的油莎豆豆粕研究卻不多，大多數油莎豆豆粕都被廢棄掉，造成極大浪費。用油莎豆豆粕作為原料，采用了酶解法、乙醇溶劑法及酶解輔助醇提法3 種不同的方法，對油莎豆豆粕中的黃酮類物質進行了提取，并對工藝進行了優化，為該物質在醫藥、食品等領域的應用提供一定的理論依據。

1 材料與分析方法

1.1 材料與試劑

油莎豆豆粕粉，市售；蘆丁標樣（純度等級AR），酷爾化學（北京） 科技有限公司提供；纖維素酶（純度等級BR），上海源葉生物科技有限公司提供；乙醇（純度等級AR）、鹽酸（純度等級AR）、氫氧化鈉（純度等級AR），北京化工廠提供；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

UV-4802 型紫外可見分光光度計，尤尼科（上海） 儀器有限公司產品；PHSJ-4F 型pH 計，上海禹昂自動化科技有限公司產品；ESJ 180-4 型電子分析天平，沈陽龍騰電子有限公司產品；LD4-2A 型離心機，北京市雷博爾離心機有限公司產品；DK-98-II 型恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司產品；RE-52-99 型旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠產品；SJIA-10N-50A 型真空冷凍干燥機，寧波雙嘉儀器有限公司產品。

1.3 提取量檢測

1.3.1 標準曲線繪制

精確稱取5.5 mg 蘆丁對照品于10 mL 的容量瓶，加入75%乙醇溶液，溶解后，加入75%乙醇定容成550 μg/mL 的對照溶液。準確吸取以下梯度的蘆丁對照品溶液，0.25，0.50，0.75，1.00，1.25，1.50 mL于6 個10 mL 容量瓶中。然后依次加入5 g/100 mL的亞硝酸鈉溶液體積0.3 mL，10 g/100 mL 的硝酸鋁溶液體積0.3 mL，10 g/100 mL 的氫氧化鈉溶液4 mL，每次加入上述的溶液之后，都需振蕩搖勻，靜置6 min后再加入到下一個溶液中，最后用體積分數70%的乙醇溶液定容至10 mL。

于波長510 nm處，以蘆丁空白作為對照組，進行比色法測定樣品的吸光度。以蘆丁質量濃度（mg/mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標，通過橫縱坐標繪制標準曲線[5]，得到回歸方程：Y=0.015 28X-0.180 46，R2=0.997 02。

1.3.2 提取量測定

精確量取1.0 mL 的樣品溶液于10 mL 的容量瓶，按序加入5 g/100 mL 的亞硝酸鈉溶液0.3 mL，10 g/100 mL 的硝酸鋁溶液0.3 mL，10 g/100 mL 的氫氧化鈉水溶液4 mL，每次加入一種溶液之后，都需要振蕩搖勻，靜置6 min 后，再加入下一種溶液中，最后加入體積分數為70%的乙醇溶液定容至10 mL[6]。利用紫外分光光度計儀器，采用比色法，于波長510 nm處測定待測物質的吸光度，并利用回歸方程這一數學工具，獲取樣品的黃酮提取量，并且通過其計算出油莎豆豆粕中的黃酮類物質的提取量，公式如下：

式中：R——油莎豆豆粕中的類黃酮提取量，mg/g；

m——油莎豆豆粕粉的質量，g；

C——所測得的黃酮質量濃度，mg/mL；

V——樣品溶液體積，mL；

n——溶液稀釋的倍數。

2 試驗方法

2.1 酶解水提法

纖維素酶作用于植物細胞的細胞壁，使構成植物細胞的細胞壁成分被分解成小分子物質，降低在提取黃酮類物質中遇到的阻力，從而促進其更好地從細胞中溶出[7]。

準確稱取干燥后的2.0 g 油莎豆粕粉末放于三頸圓底燒瓶中，加入適當的纖維素酶和適當體積的水，調節pH 值至相應條件，放在恒溫水浴鍋中，進行一定時間的酶解提取，之后高溫滅酶10 min，冷卻至室溫后離心，收集上清液，按照上述方法對提取量進行測定。

以樣品中黃酮提取量為指標，分別選取5 個單因素25 個值進行試驗。即酶用量0.25，0.50，0.75，1.00，1.25 mg/mL；pH 值3，4，5，6，7；酶解溫度30，40，50，60，70 ℃；酶解時間1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 h；料 液 比1 ∶10，1 ∶20，1 ∶30，1 ∶40，1∶50（g∶mL）。以每個單因素條件最佳值的范圍為依據，通過正交試驗對黃酮類物質提取工藝進行優化，以獲得酶解法的最佳工藝條件。

2.2 醇提法

依據相似相溶原理可知，黃酮類物質易溶于有機溶劑中，因此可以利用乙醇溶液提取油莎豆豆粕中黃酮類物質[8]。

準確稱取干燥后的2.0 g 油莎豆粕粉末放于三頸圓底燒瓶中，加入適量的纖維素酶和一定體積分數的乙醇，在恒溫條件中提取一定時間，冷卻至室溫后離心，收集上清液按照上述方法對提取量進行測定。

以黃酮提取量為指標，分別選取了4 個單因素20 個值進行試驗。即乙醇體積分數30%，40%，50%，60%，70%，80%；提取溫度30，40，50，60，70 ℃；恒溫水浴時間1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 h；料液比1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50（g∶mL）。以每個單因素條件最佳值的范圍為依據，通過正交試驗對黃酮類物質提取工藝進行優化，以獲得乙醇提取法的最佳工藝條件。

2.3 酶解醇提法

纖維素酶和乙醇溶液的協同作用使得油莎豆豆粕中的細胞壁被充分破壞，有利于細胞內的黃酮類物質浸出[9]。

準確稱取干燥后的2.0 g 油莎豆粕粉末放于三頸圓底燒瓶中，加入適量的纖維素酶和適當體積分數的乙醇，調pH 值至相應條件，放在恒溫水浴鍋中，進行一定時間的酶解提取，之后高溫滅酶10 min，冷卻至室溫后離心，收集上清液，按照上述方法對提取量進行測定。

以黃酮提取量為指標，分別選取了6 個單因素30 個值進行試驗。即酶用量0.25，0.50，0.75，1.00，1.25 mg/mL；pH 值3，4，5，6，7；酶解溫度30，40，50，60，70 ℃；酶解時間1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 h；料液比1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50（g∶mL）；乙醇體積分數為10%，20%，30%，40%，50%。以每個單因素條件最佳值的范圍為依據，通過正交試驗對黃酮類物質提取工藝進行優化，以確定酶解輔助乙醇法的最佳工藝條件。

3 結果與分析

3.1 酶解水提法

3.1.1 單因素試驗

（1） 酶用量對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在pH 值5，酶解溫度50 ℃，酶解時間1.5 h，料液比1∶30（g∶mL） 的條件下，考查酶用量對黃酮類物質提取量的影響。

酶用量對黃酮提取量的影響見圖1。

圖1 酶用量對黃酮提取量的影響

由圖1 可知，當逐漸提高纖維素酶用量時，黃酮的提取量也在不斷地上升，把油莎豆豆粕作為底物時，物料濃度是一定的，當增大纖維素酶用量時，酶的濃度增加，這大大加快了酶與底物的反應速度和細胞破裂，導致黃酮類類物質的溶解，提取量自然增加。當酶用量增大到0.75 mg/mL 時，溶液中酶的濃度趨于飽和狀態，黃酮的提取量增加的速度會變慢。當黃酮的提取量達最大值時，黃酮的提取量不隨酶用量的增加而變化。當酶用量繼續增加時，可能會導致酶水解過度，對黃酮類物質的糖苷鍵產生一定影響，導致黃酮類物質的提取量減小。因此，結合實際情況，選擇酶的最佳用量應為0.75 mg/mL。

（2） 酶解溫度對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在纖維素酶用量0.75 mg/mL，pH 值5.0，酶解時間1.5 h，料液比1∶30（g∶mL） 條件下，考查酶解溫度對黃酮提取量的影響。

酶解溫度對黃酮提取量的影響見圖2。

圖2 酶解溫度對黃酮提取量的影響

由圖2 可知，當酶解溫度不斷升高時，黃酮類物質提取量逐漸增大，在50 ℃時達到了最大值。當酶解溫度超過50 ℃后，溫度進一步上升，黃酮的提取量卻開始有下降的趨勢。一方面，溫度的增高降低了酶的活性，纖維素酶不能有效地破壞細胞壁，影響黃酮類物質的有效溶出；另一方面過高的溫度會增加試驗的能耗[10]。因此，考慮到實際效益，選擇最佳酶解溫度在50 ℃左右。

（3） pH 值對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。pH 值對酶解來說是很重要的一個因素，最佳的pH值能發揮出酶的最佳效能[11]。在纖維素酶用量0.75 mg/mL，酶解溫度50 ℃，酶解時間1.5 h，料液比1∶30（g∶mL） 的條件下，考查pH 值對黃酮提取量的影響。

pH 值對黃酮提取量的影響見圖3。

圖3 pH 值對黃酮提取量的影響

由圖3 可知，隨著pH 值的變大，黃酮的提取量在不斷增加，當pH 值等于5.0 時，黃酮的提取量最高。此后再增加pH 值，黃酮類物質提取量趨近于平緩甚至下降，原因可能是由于溶液中pH 值的不斷增大，超出纖維素酶作用的最適宜pH 值范圍，導致酶不能有效發揮其作用。因此，選擇最佳pH 值在5.0左右。

（4） 酶解時間對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在纖維素酶用量0.75mg/mL，酶解溫度50 ℃，pH 值5.0，料液比1∶30（g∶mL） 的條件下，考查酶解時間對黃酮類物質的提取量的影響。

酶解時間對黃酮提取量的影響見圖4。

圖4 酶解時間對黃酮提取量的影響

由圖4 可知，隨著酶解時間的延長，提取出的黃酮類物質也在不斷增多，當酶解時間為2 h 時，黃酮的提取量最大。此時，延長酶解時間可以讓底物和酶之間的反應進行得更加充分，提高了黃酮的提取量。若酶解時間過長，黃酮的提取量將會進一步下降。長時間的反應反而使酶逐漸失去活性，導致了提取量的減少。因此，從各方面因素綜合考慮，選擇的最佳酶解時間在2 h 左右。

（5） 料液比對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在纖維素酶用量0.75 mg/mL，酶解時間2 h，pH 值5.0，酶解溫度50 ℃條件下，考查料液比對黃酮提取量的影響。

料液比對黃酮提取量的影響見圖5。

圖5 料液比對黃酮提取量的影響

由圖5 可知，當料液比發生變化時，黃酮的提取量也會發生較為明顯的變化。當料液比為1∶10 ～1∶30（g∶mL） 時，黃酮的提取量將會因為提取液體積的增大而提高；當料液比為1∶30 時，提取量達到最大值，之后提取液進一步增大，黃酮類物質提取量反而下降。料液比對于試驗十分重要，如果料液比太小，在試驗過程中物料可能不會被完全酶解，最終造成黃酮提取量較低，如果料液比太大，將對水資源造成一定的浪費，而且不利于試驗的進行。從經濟條件考慮，選取料液比在1∶30（g∶mL）左右較為適宜。

3.1.2 正交試驗的設計

（1） 試驗設計。根據以上單因素試驗獲得的范圍，以油莎豆豆粕中的黃酮提取量為考查指標，設計正交試驗，以確定最優的方案，即采用L9（35）的正交表來進行試驗。

因素水平設計見表1，正交試驗結果分析見表2。

表1 因素水平設計

（2） 數據處理。由表2 可知，RA＞RC＞RD＞RE＞RB，即影響油莎豆的豆粕中黃酮提取量的各因素順序為料液比（A） ＞酶用量（C） ＞pH 值（D） ＞提取時間（E） ＞提取溫度（B）。影響較大的因素有料液比、酶用量和pH 值，影響較小的因素為溫度和時間。

表2 正交試驗結果分析

從試驗實際的角度看來，酶解法提取的黃酮量會隨著料液比的增大而增大，但是與此同時提取液中酶和底物的濃度減少，溶出的雜質含量會增加。在試驗過程中，處于理想值的料液比才能使提取充分。因此，選擇酶用量0.875 mg/mL，酶解溫度55 ℃，pH 值5.0，酶解時間2 h，料液比1∶35（g∶mL）作為酶解法的最佳試驗條件。

綜上，在上述確定的酶解法最佳試驗條件下再次進行試驗，得到黃酮提取量為5.624 mg/g。試驗證明，酶解法可使油莎豆豆粕中的黃酮類物質充分釋放出來，而且操作簡單、溶劑無污染、成本低，但較長的提取時間可能會將易溶于熱水的無機鹽、蛋白質、糖類等雜質一并提取，降低了黃酮類物質的純度，對試驗造成一定的干擾。而且純度低會導致后續分離純化等步驟增多，增加了試驗的復雜性[12]。

3.2 醇提法

3.2.1 單因素試驗

（1） 乙醇體積分數對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在料液比1∶30（g∶mL），提取時間2 h，提取溫度60 ℃條件下，考查乙醇體積分數對油莎豆豆粕中黃酮的提取量的影響。

乙醇體積分數對黃酮提取量的影響見圖6。

由圖6 可知，提取過程中，當乙醇體積分數太小時，提取液的極性影響黃酮提取效果[13]，導致了提取液中的黃酮量較低；當乙醇體積分數達到60%時，溶劑的極性和細胞中黃酮的極性相接近，從而導致了溶出率最大；當乙醇體積分數繼續增大時，黃酮提取量減少，可能是由于高濃度的乙醇易揮發，且揮發性乙醇中含有黃酮，導致最終黃酮提取量減小了。因此，提取油莎豆豆粕中黃酮類物質的乙醇體積分數應選擇60%。

圖6 乙醇體積分數對黃酮提取量的影響

（2） 提取溫度對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在料液比1∶30（g∶mL），提取時間2 h，乙醇體積分數60%條件下，考查提取溫度對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。

提取溫度對黃酮提取量的影響見圖7。

圖7 提取溫度對黃酮提取量的影響

由圖7 可知，當提取溫度一直上升到50 ℃時，油莎豆豆粕中黃酮的提取量出現了峰值，由于熱效應及溶劑效應的共同影響，使得分子的運動速度越來越快，有利于黃酮類物質溶出，黃酮提取物的提取量也隨之增加。所以，油莎豆豆粕中黃酮類物質提取的最佳提取溫度應是50 ℃。

（3） 提取時間對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在料液比1∶30（g∶mL），提取溫度60 ℃，乙醇體積分數60%條件下，考查提取時間對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。

提取時間對黃酮提取量的影響見圖8。

圖8 提取時間對黃酮提取量的影響

由圖8 可知，油莎豆豆粕中黃酮提取量隨著提取時間的延長而增加，當提取時間在2 h 時，黃酮的提取量出現最大值；當提取時間大于2 h 后，黃酮提取量呈下降的趨勢，隨著提取時間的繼續延長，其提取量下降的幅度不明顯，基本維持在一個相對穩定的狀態。結合實際效益考慮，油莎豆豆粕中黃酮類物質的最佳提取時間應選擇2 h。

（4） 料液比對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在提取時間2 h，提取溫度60 ℃，乙醇體積分數60%恒定不變的條件下，考查料液比對油莎豆豆粕中黃酮類物質提取量的影響。

料液比對黃酮提取量的影響見圖9。

圖9 料液比對黃酮提取量的影響

由圖9 可知，在一定范圍內，油莎豆豆粕中黃酮的提取量隨料液比的增加而增加，這可能是由于料液比對溶劑傳質過程速度的影響，料液比越大，溶劑的傳質速度越快，黃酮類類物質的浸出速率也越大；料液比為1∶30 時，油莎豆豆粕中的黃酮提取量最高；而當料液比繼續增大時，黃酮類物質的提取量變化不大。還可看出，當料液比增加到一定程度時，黃酮類類物質在溶劑中的浸出將達到飽和的狀態[14]，因此提取油莎豆豆粕中黃酮類物質的最佳條件是料液比控制在1∶30（g∶mL） 左右。

3.2.2 正交試驗的設計

（1） 試驗設計。根據以上單因素試驗獲得的確定范圍，以油莎豆豆粕中的黃酮提取量為考查指標，按照設計L9（34）正交試驗，研究各因素對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響，以確定最優的方案.

因素水平設計見表3，正交試驗結果分析見表4。

表3 因素水平設計

（2） 數據處理。由表4 可知，R'D'＞R'B'＞R'A'＞R'C'，即乙醇提取法中各因素對黃酮提取量的影響程度排序為料液比（D'） ＞提取時間（A'） ＞乙醇體積分數（C'） ＞提取溫度（B'）。從油莎豆豆粕中提取黃酮的最佳工藝為A'1B'3C'1D'3，即由此可見，最佳提取條件為料液比1∶35（g∶mL），提取溫度55 ℃，乙醇體積分數55%，提取時間1.75 h。

表4 正交試驗結果分析

綜上，以最佳提取條件為料液比1∶35（g∶mL），提取溫度55 ℃，乙醇體積分數55%，提取時間1.75 h下再次進行試驗，得到該條件下的黃酮提取量為7.101 mg/g，相比于酶解法，乙醇提取法顯著增大了油莎豆豆粕中黃酮提取量，而且提取過程簡單安全，具有良好的實用價值。

3.3 酶解醇提法

3.3.1 單因素試驗

（1） 酶用量對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在pH 值5，酶解溫度50 ℃，酶解時間1.5 h，乙醇體積分數30%，料液比1∶30（g∶mL） 條件下，考查酶用量對黃酮提取量的影響。

酶用量對黃酮提取量的影響見圖10。

圖10 酶用量對黃酮提取量的影響

由圖10 可知，隨著酶用量的增加，酶和乙醇協同作用使得黃酮提取量大幅度增大，當酶用量繼續增大至0.75 mg/mL 時，酶的濃度已達到飽和，此時黃酮提取量趨于穩定，持續增加酶用量只會使酶的浪費。故而，選取酶用量為0.75mg/mL。

（2） 酶解溫度對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在pH 值5，酶用量0.75 mg/mL，酶解時間1.5 h，乙醇體積分數30%，料液比1∶30（g∶mL） 條件下，考查酶解溫度對黃酮提取量的影響。

酶解溫度對黃酮提取量的影響見圖11。

由圖11 可知，酶解溫度越高，酶解效果越好。但是，如果溫度過高，一方面酶的活性會受到一定的抑制，提取效果會下降；另一方面，提取過程中溶解的雜質也在增加，將增加試驗的復雜性和能耗。因此，根據實際情況，最佳酶解溫度為50 ℃。

圖11 酶解溫度對黃酮提取量的影響

（3） pH 值對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。pH 值不僅影響纖維素酶構象，還影響底物的解離狀態，從而影響酶的活性。在酶用量0.75 mg/mL，酶解溫度50 ℃，酶解時間1.5 h，乙醇體積分數30%，料液比1∶30（g∶mL） 條件下，考查pH 值對黃酮提取量的影響。

pH 值對黃酮提取量的影響見圖12。

圖12 pH 值對黃酮提取量的影響

由圖12 可知，黃酮提取量隨pH 值的增大呈現先增后減的變化趨勢。當pH 值5.0 時，黃酮提取量最大；再繼續增大pH 值，纖維素酶活性下降，影響破壞細胞壁的致密構造的效果，使得乙醇無法更好地發揮作用，從而導致黃酮提取量下降。因此，從實際出發，試驗最適pH 值為5.0。

（4） 酶解時間對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在pH 值5，酶用量0.75 mg/mL，酶解溫度50 ℃，乙醇體積分數30%，料液比1∶30（g∶mL） 條件下，考查酶解時間對黃酮提取量的影響。

酶解時間對黃酮提取量的影響見圖13。

圖13 酶解時間對黃酮提取量的影響

由圖13 可知，黃酮提取量隨著酶解時間的延長而增大，酶解時間為2 h 時，黃酮提取量較高。再延長酶解時間，提取量基本不變，但是雜質的溶出率會隨著酶解時間的延長不斷升高，結合節省時間、降低成本，故試驗選取酶解時間為2 h。

（5） 乙醇體積分數對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在pH 值5，酶用量0.75 mg/mL，酶解時間2 h，酶解溫度50 ℃，料液比1∶30（g∶mL） 條件下，考查乙醇體積分數對黃酮提取量的影響。

乙醇體積分數對黃酮提取量的影響見圖14。

圖14 乙醇體積分數對黃酮提取量的影響

由圖14 可知，不同乙醇體積分數下纖維素酶乙醇提取的得率均高于單一的醇提，這是由于細胞壁的酶水解和黃酮類類物質的乙醇浸出的協同效應。分析結果可知，選擇30%的乙醇體積分數為最佳提取條件。

（6） 料液比對油莎豆豆粕中黃酮提取量的影響。在pH 值5，酶用量0.75 mg/mL，酶解時間1.5 h，酶解溫度50 ℃，乙醇體積分數30%條件下，考查料液比對黃酮提取量的影響。

料液比對黃酮提取量的影響見圖15。

圖15 料液比對黃酮提取量的影響

由圖15 可知，在一定范圍內，隨著料液比的增大，提取出的黃酮類物質在逐漸增加，當料液比為1∶30（g∶mL） 時，其提取量最高，隨后繼續增加料液比，提取量反而下降至一個穩定水平。這是由于過大的料液比會使得樣品可能沒有被酶解徹底，最終會導致黃酮提取量偏低，而且料液比過大，不僅浪費資源，而且會溶出更多雜質，不利于后續試驗的進行。從經濟條件考慮，試驗選擇料液比為1∶30（g∶mL）。

3.3.2 正交試驗

（1） 試驗設計。根據以上單因素試驗獲得的確定范圍，以油莎豆豆粕中的黃酮提取量為考查指標，按照L18（36）正交試驗，研究6 個因素對提取油莎豆豆粕中黃酮類物質的影響，以確定最優的方案。

因素水平設計見表5，正交試驗結果分析見表6。

表5 因素水平設計

表6 正交試驗結果分析

（2） 數據處理。由直觀分析可知，R''B''＞R''C''＞R''F＞R''E'，各因素對黃酮提取量的影響的程度排序為料液比（B） ＞提取溫度（C） ＞時間（F） ＞pH 值（E），乙醇體積分數和酶解時間影響不大。由此得出的最佳工藝組合為A''1B''3C''1D''1E''2F''1。由此可見，確定最佳提取條件為料液比1∶35（g∶mL），酶解溫度55 ℃，乙醇體積分數35%，酶解時間2 h，pH 值5，酶用量0.65 mg/mL。

綜上所述，以料液比1∶35（g∶mL），酶解溫度55 ℃，乙醇體積分數35%，酶解時間120 min，pH值5，酶用量0.65 mg/mL 為最佳工藝條件下，再次試驗得到的黃酮提取量為8.582 mg/g。相比于酶解法和乙醇提取法，纖維素酶和乙醇發揮協同作用能較大程度地提取有效成分，纖維素酶輔助提取黃酮的提取率更高。

4 結論

不同提取方法對黃酮總提取量的影響見表7。

表7 不同提取方法對黃酮總提取量的影響

目前，具有操作方便、提取條件溫和、提取過程安全、提取效率高、能較大程度地保留有效成分的優點提取黃酮類物質的方法有3 種，分別是酶解法、有機溶劑提取法和超聲波輔助法[15]。如何在試驗中配合使用這3 種簡單的方法，獲得更高的提取量是未來黃酮類物質提取的研究方向。

試驗將前2 種方法進行了結合，探究了黃酮提取的最佳工藝條件。由表7 可知，纖維素酶- 水溶液提取油莎豆豆粕中黃酮的得率最小，酶- 乙醇提取的得率最高。這是由于纖維素酶- 水提法提取黃酮雜質較多，如無機鹽、蛋白質、糖等，因此提取率最低。在油莎豆豆粕中黃酮提取中加入纖維素酶和乙醇溶液后，酶破壞油莎豆豆粕中細胞壁結構，使黃酮類物質更好地溶于乙醇溶液中，二者對黃酮類物質的浸出產生協同效應，使黃酮溶出率明顯增加。結合各種因素的考慮，采用酶- 乙醇溶液更有利于油莎豆豆粕中黃酮的提取[16]。