子宮內膜癌患者血清和癌組織中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達及臨床診斷價值

王麗娟 吳文 林秀芬

子宮內膜癌(endometrial carcinoma,EC)是主要的婦科惡性腫瘤,在全球女性惡性腫瘤中排名第四位,僅次于乳腺癌、肺癌和結直腸癌。EC主要影響更年期女性并引起系列癥狀,包括盆腔疼痛、排尿疼痛和陰道出血[1,2]。目前EC的治療主要以化療、免疫治療和內分泌治療方式為主,但EC患者的總體生存率依然很低[3,4]。據報道,循環miRNA對EC患者具有診斷意義[5]。研究表明miR-153-5p是一種抑癌因子,與腫瘤的生長、浸潤以及轉移等發展密切相關[6]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)不參與蛋白質合成,但可以在多個水平上調節基因表達以參與包括癌癥在內的多種人類疾病,其中LncRNA CRNDE是一種新型的基因,在多種腫瘤疾病中過表達,參與腫瘤的發生和發展[7]。因此,本研究通過檢測EC患者癌組織和血清中miR-153-5p和LncRNA CRNDE的表達情況,探討二者與患者臨床病理參數的關系以及對EC患者的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年12月至2021年12月海南醫學院第二附屬醫院進行手術治療的115例EC患者作為觀察組,收集術中患者的EC組織(n=115)和癌旁組織(n=115),115例EC組織均經病理學證實。術后,將所收集樣本立即置于液氮中冷凍,然后轉移并儲存在-80°C中直至進一步使用。EC患者年齡38～76歲,平均年齡(57.61±10.24)歲;組織病理類型:腺癌90例,透明細胞癌7例,鱗癌7例,混合性癌8例,漿液性癌3例;國際婦產科聯盟(FIGO)分期:Ⅰ期+Ⅱ期52例,Ⅲ期+Ⅳ期63例;肌層浸潤程度:≥1/2肌層78例,<1/2肌層37例;分化程度:中+低分化74例,高分化41例;淋巴結轉移68例,無淋巴結轉移47例;腫瘤直徑≥5 cm 69例,<5 cm 46例。同期選取100例體檢健康者為對照組,2組一般資料具有均衡性。本研究經醫院道德倫理委員會批準通過,樣品采集均取得受試者知情同意,符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準:①經手術病理確診為EC;②患者均未進行過放療或化療;③無自身免疫疾病。

1.2.2 排除標準:①合并其他惡性腫瘤、或重大疾病患者;②精神無法自控或異常者;③臨床資料不完整者。

1.3 方法

1.3.1 血清標本采集:對照組于體檢當天、觀察組于術前均采集空腹靜脈血5 ml,采用10 000 r/min低溫離心處理15 min后,取血清置于-80℃保存備用。

1.3.2 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測血清和癌組織中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平:使用TRIzol?試劑從EC組織、癌旁組織及2組血清中提取總RNA。NanoDrop 2000(Thermo Scientific)用于測量RNA濃度。然后,根據說明,應用M-MLV Reverse Transcriptase Kit進行RNA逆轉錄得到cDNA。BlazeTaqTMOne-Step SYBR Green RT-qPCR Kit (Genecopoeia)用于檢測LncRNA CRNDE表達水平。All-in-One miRNA qRT-PCR RECgent Kit (Genecopoeia)用于檢測miR-153-5p表達水平。GAPDH用作LncRNA CRNDE的內參對照。U6用作miR-153-5p的內參對照。使用2-ΔΔCt計算方法對LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平進行定量分析。見表1。

表1 實時熒光定量PCR引物序列

2 結果

2.1 2組血清中LncRNA CRNDE、miR-153-5p的表達水平 EC患者血清中miR-153-5p表達水平低于對照組,LncRNA CRNDE表達水平高于對照組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組血清中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平比較

2.2 EC患者癌組織中LncRNA CRNDE、miR-153-5p的表達水平 EC患者癌組織中miR-153-5p表達水平低于癌旁組織,LncRNA CRNDE表達水平高于癌旁組織,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 癌組織及癌旁組織中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平比較 n=115,

2.3 miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達的相關性 EC患者血清中miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達呈明顯負相關(r=-0.315,P<0.05)。EC患者癌組織中miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達呈明顯負相關,(r=-0.268,P<0.05)。見圖1、2。

圖1 EC患者血清中miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達相關性分析

圖2 EC患者癌組織中miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達相關性分析

2.4 血清miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達水平與EC患者臨床病理參數的關系 EC患者血清中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平均與患者年齡、腫瘤直徑、組織類型無關(P>0.05);均與肌層浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移、FIGO分期有關,差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 患者血清中miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達水平與臨床病理參數的關系

2.5 血清中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平對EC的診斷價值 ROC曲線結果顯示,血清miR-153-5p、LncRNA CRNDE表達水平診斷EC發生的曲線下面積分別為0.901(95%CI:0.855～0.936)、0.944(95%CI:0.906～0.970),二者單獨應用時對應的敏感度分別為90.43%、87.83%,特異度分別為76.52%、92.17%;血清LncRNA CRNDE、miR-153-5p水平聯合診斷的曲線下面積為0.971(95%CI:0.940～0.988),敏感度為89.57%,特異度為98.26%。見表5,圖3。

表5 血清LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平對EC的診斷價值

圖3 血清LncRNA CRNDE、miR-153-5p表達水平診斷EC發生的ROC曲線

3 討論

EC是一種起源于子宮內膜上皮的惡性腫瘤,威脅著女性的健康。盡管統計數據不完整,但2020年全球約新增病例65 620例,死亡12 590例。在發達國家,子宮內膜癌的發病率為5.9%,高于發展中國家(4.0%),并繼續呈上升趨勢[8]。EC的病因明確,研究顯示可能與不孕不育、肥胖、糖尿病等相關[9]。目前缺乏對EC的早期診斷方法以及診斷標志物,因此探究新的診斷標志物,對于幫助疾病的早期治療和改善患者預后具有重要意義。

miRNAs是一類小的非編碼RNA分子,它們通過結合其靶mRNA的3’-非翻譯區(3’-UTR)來調控基因表達。幾十年來,miRNA已被廣泛研究,并已被提議作為癌癥治療的潛在分子靶標[10]。miR-153-5p被報道在癌癥的轉移、復發和發展中發揮重要作用[11]。孫云菊等[12]研究表明miR-153-5p在乳腺癌組織中表達水平降低,與疾病發展密切相關。Liu等[13]研究表明miR-153在宮頸癌組織中表達降低,且與腫瘤的大小、淋巴結轉移等病理特征有關。本研究中,EC患者癌組織及血清中miR-153-5p表達水平均降低,提示miR-153-5p可能通過發揮抑癌基因的作用,參與調控EC的發生、發展過程;本研究進一步發現,患者血清中miR-153-5p表達水平與患者年齡、腫瘤直徑、組織類型無關,但與肌層浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移、FIGO分期有關,提示miR-153-5p與EC的發生及其臨床病理特征存在密切關系。ROC曲線結果顯示,血清中miR-153-5p表達水平診斷EC發生的曲線下面積為0.901(95%CI:0.855～0.936),對應的敏感度為90.43%,特異度為76.52%,提示血清miR-153-5p水平可在一定程度作為診斷EC發生的標志物。

LncRNA是一組長度>200個核苷酸的非編碼RNA,已成為細胞周期、增殖、分化、凋亡、侵襲和遷移等多種細胞過程中必不可少的調節因子。LncRNAs的失調已在大量人類癌癥中得到報道[14]。此外,一些LncRNA參與EC發生發展的進程也已得到證實[15]。LncRNA CRNDE位于人類第16號染色體中,在細胞發育和分化中發揮重要作用。多項研究表明,在包括肝癌和結直腸癌在內的許多實體瘤中,LncRNA CRNDE水平上調[16]。楊向綢等[17]研究表明LncRNA CRNDE在彌漫性大B細胞淋巴瘤中呈高表達,與疾病的發生有關。Yang等[18]研究發現LncRNA CRNDE在宮頸癌患者組織中呈高表達,且與疾病分期、淋巴結轉移等存在一定關系。

在本研究中,患者癌組織中LncRNA CRNDE表達水平與癌旁組織相比明顯升高,且患者血清中LncRNA CRNDE表達水平高于健康體檢者,提示LncRNA CRNDE可能在疾病中發揮促癌基因的作用,參與了EC的發生發展。本研究進一步發現血清LncRNA CRNDE表達水平與患者年齡、腫瘤直徑、組織類型無關,但與肌層浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移、FIGO分期有關,提示LncRNA CRNDE參與了EC的發生發展,且與疾病臨床病理特征密切相關;進一步研究發現EC患者血清中miR-153-5p和LncRNA CRNDE的表達水平呈負相關(r=-0.315,P<0.05),且EC患者癌組織中miR-153-5p和LncRNA CRNDE的表達水平也呈負相關(r=-0.268,P<0.05)提示二者之間可能存在某種負反饋機制,共同作用于EC的發生發展過程;ROC曲線結果顯示,血清中LncRNA CRNDE表達水平診斷EC發生的曲線下面積為0.944(95%CI:0.906～0.970),敏感度為87.83%,特異度為92.17%,LncRNA CRNDE與miR-153-5p二者聯合診斷的曲線下面積為0.971(95%CI:0.940～0.988),敏感度為89.57%,特異度為98.26%,提示LncRNA CRNDE、miR-153-5p二者聯合應用于診斷EC發生的臨床價值優于單一指標。

綜上所述,miR-153-5p在EC患者癌組織及血清中均表達降低,LncRNA CRNDE表達水平均升高,二者可能通過某種負反饋調節機制共同參與EC的發生發展,且聯合檢測二者表達水平對EC具有較高的臨床診斷價值。對臨床EC患者的早期診斷和治療提供重要參考價值。