杏貝止咳顆粒對豚鼠感染后咳嗽的治療作用

袁勝男，張新莊，劉 婧，范小雪，曹 亮，王振中，肖 偉,

杏貝止咳顆粒對豚鼠感染后咳嗽的治療作用

袁勝男1，張新莊2，劉 婧2，范小雪2，曹 亮2，王振中2，肖 偉1, 2*

1. 南京中醫藥大學，江蘇 南京 210023 2. 江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222001

探討杏貝止咳顆粒對豚鼠感染后咳嗽（post-infectious cough，PIC）的治療作用。除對照組外，將3～4周齡SPF級雄性Hartley豚鼠采用鼻滴脂多糖、煙熏、辣椒素霧化激發來構建PIC豚鼠模型。造模成功后分為模型組及杏貝止咳顆粒低、中、高劑量（0.93、1.86、3.72 g/kg）組、阿斯美（21.62 mg/kg）組和蘇黃止咳膠囊（313.88 mg/kg）組，末次給藥后24 h，通過辣椒素霧化誘咳測定咳嗽次數及潛伏期，采用ELISA法檢測血清、肺泡灌洗液和肺組織中P物質（substance P，SP）、降鈣素相關基因肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）、神經肽A（neurokinin A，NKA）、神經肽B（neurokinin B，NKB）、神經生長因子（nerve growth factor，NGF）、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）和緩激肽（bradykinin，BK）含量，血液分析儀測定肺泡灌洗液中白細胞分類，并用蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察肺組織病理變化。與對照組比較，模型組豚鼠體質量上升緩慢，咳嗽次數明顯增多（＜0.001），咳嗽潛伏期明顯縮短（＜0.001），中性粒細胞和嗜酸性粒細胞占比顯著升高（＜0.01、0.001），血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK含量均顯著增高（＜0.05、0.01、0.001），肺組織中炎性細胞浸潤明顯。與模型組比較，杏貝止咳顆粒能夠改善PIC豚鼠體質量增加緩慢趨勢，顯著減少咳嗽次數（＜0.001），延長咳嗽潛伏期（＜0.001），顯著降低白細胞中嗜酸性細胞和中性粒細胞比例（＜0.01、0.001），顯著降低豚鼠血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK含量（＜0.05、0.01、0.001），改善肺組織病理變化。杏貝止咳顆粒對PIC豚鼠具有治療作用。

感染后咳嗽；豚鼠；杏貝止咳顆粒；咳嗽敏感性；神經源性炎癥

感染后咳嗽（post-infectious cough，PIC）又稱感冒后咳嗽，患者遭受急性上呼吸道感染后，感染本身癥狀消失，胸部X線檢查正常，而咳嗽仍然遷延不愈，持續時間3周以上[1]。臨床上，11%～40%慢性咳嗽屬PIC[2-3]，造成PIC的誘因有空氣污染、受寒、過度疲勞后病毒或細菌感染、物理化學刺激或年老防御功能退化等多種因素。目前，PIC病機尚不十分明確，但大多數學者認為，患者感染病原體后，呼吸道上皮損傷，氣道的屏障作用減弱，使得支氣管及肺部咳嗽敏感器暴露，被氣道炎癥激活產生咳嗽反射，同時產生神經源性炎癥，使得氣道處于高反應狀態，咳嗽反射的敏感性（cough reflex sensitivity，CRS）增加，致使PIC發生[4-5]。

多年臨床應用資料分析顯示杏貝止咳顆粒對PIC患者有較好的療效，前期研究也證實，源自臨床驗方的杏貝止咳顆粒，可延長咳嗽模型動物的咳嗽潛伏期，降低咳嗽次數，增加小鼠氣道酚紅排出量和豚鼠氣道排痰量，降低炎癥模型動物的耳腫脹和足趾腫脹，改善細菌感染小鼠死亡率。但杏貝止咳顆粒對PIC的療效和作用機制尚無相關報道。故本研究采用脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）致PIC的造模方法[6]，模擬PIC的病理表現，觀察杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠的生物效應，并初步探討其作用機制，為臨床應用提供理論支撐。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性Hartley豚鼠105只，3～4周齡，體質量220～250 g，購自青島康大愛博生物科技有限公司，合格證號No.370823221100097572，許可證號SCXK（魯）2021-0003，動物實驗倫理批準號2022080501。動物飼養于江蘇康緣藥業股份有限公司屏障環境下，室溫（22±2）℃，相對濕度50%～60%。

1.2 藥品與試劑

杏貝止咳顆粒（批號200405）由江蘇康緣藥業股份有限公司提供；阿斯美（批號SY141AA）購自第一三共制藥（上海）有限公司；蘇黃止咳膠囊（批號21011811）購自揚子江集團有限公司；LPS（批號0000114327）購自美國Sigma公司；辣椒素（批號1018I021）購自北京索萊寶科技有限公司；南京香煙（焦油量、煙氣煙堿量、煙氣一氧化碳量分別為11、1.1、11 mg）購自江蘇中煙工業有限責任公司；舒泰50（批號BN8G4VA）購自法國維克有限公司；鹽酸賽拉嗪注射液（批號20210102）購自長沙拜特生物科技研究所有限公司；P物質（substance P，SP）、降鈣素相關基因肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）、神經肽A（neurokinin A，NKA）、神經肽B（neurokinin B，NKB）、神經生長因子（nerve growth factor，NGF）、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）和緩激肽（bradykinin，BK）ELISA試劑盒（貨號分別為DG40023G、DG40040G、DG40027G、DG40028G、DG96320Q、DG96307Q、DG96300Q，批號均為202208）購自北京冬歌博業生物科技有限公司。

1.3 儀器

自制煙箱（1 m×1 m×0.5 m）；YLS-8A型多功能誘咳引喘儀（上海欣軟信息科技有限責任公司）；FCI-280型電熱恒溫培養箱（日本ASONE公司）；BY-R20型醫用離心機（北京白洋醫療器械有限公司）；EnSpire-23001437型酶標儀（美國PerkinElmer公司）。

2 方法

2.1 給藥劑量設計

杏貝止咳顆粒臨床用量為1次1袋，1袋4 g，3次/d。本研究采用4周齡雄性豚鼠，體質量以300 g計，參照第3版《藥理實驗方法學》及相關文獻，按體表面積等效劑量法計算豚鼠等效劑量為930 mg/kg，按照1、2、4倍設定藥物低、中、高劑量組，分別為930、1860、3720 mg/kg。阿斯美按等效劑量系數折算法計算豚鼠等效劑量為21.62 mg/kg，蘇黃止咳膠囊按等效劑量系數折算法計算豚鼠等效劑量為313.88 mg/kg。

2.2 動物分組、模型制備與給藥

105只SPF級雄性Hartley豚鼠適應性飼養7 d后，除空白組15只外，剩余90只豚鼠置于自制煙箱中，用8支香煙和50 g鋸末制造煙霧，熏煙30 min，1次/d，連續10 d，自由進食飲水。之后分別在第11、14、17天以舒泰50麻醉，滴鼻0.4 mg/mL LPS溶液（1 μL/g），在第12、13、15、16、18天，將豚鼠置于誘咳引喘儀中，以1×10?4mol/L辣椒素溶液霧化吸入激發3 min，每日觀察各組豚鼠狀態。模型制備成功后根據咳嗽次數隨機分組，將豚鼠分為對照組、模型組及杏貝止咳顆粒低、中、高劑量（930、1860、3720 mg/kg）組和阿斯美（21.62 mg/kg）組、蘇黃止咳膠囊（313.88 mg/kg）組，每組15只。于第19天開始給藥，各給藥組ig相應藥物（10 mL/kg），對照組和模型組ig等體積生理鹽水，1次/d，連續7 d。

2.3 檢測指標

2.3.1 體質量 每日稱定豚鼠體質量，計算體質量變化率。

體質量變化率＝(給藥期體質量－第1天體質量)/第1天體質量

2.3.2 咳嗽敏感性 于末次給藥24 h后，把豚鼠放入多功能誘咳引喘儀的密閉鐘罩內，使用辣椒素溶液霧化吸入3 min，從儀器判斷的第一聲響亮咳聲開始，記錄首次咳嗽時間和8 min內咳嗽次數（包含霧化吸入3 min內人工記錄的咳嗽次數）。

2.3.3 血清中細胞因子檢測 咳嗽次數測定后，im舒泰50（20 mg/kg）和ip鹽酸賽拉嗪注射液（2 mg/kg）麻醉后，仰臥位固定豚鼠，剪開腹部皮膚，分離腹主動脈采血，冰上靜置30 min，3000 r/min離心15 min，收集血清，?80 ℃保存備用。按照ELISA試劑盒說明書檢測SP、CGRP、NKA、NKB、BK、PGE2和NGF含量。

2.3.4 肺泡灌洗液中細胞因子檢測及細胞分類計數 采血后，打開胸腔，于豚鼠劍突上5 mm處采用倒“T”字形切口剪開皮膚，上至下顎，左右至腋下，分離皮下結締組織和肌肉，暴露氣管；分離氣管兩側及氣管與食管間結締組織，游離氣管。止血鉗夾住右側肺支氣管，將灌流針緩緩刺入氣管，針尖不超過胸鎖關節，緩緩抽出針芯并保持灌流軟膠管不動，用生理鹽水沖洗支氣管肺泡3次（體積分別為2、1、1 mL），合并肺泡灌洗液，4 ℃、1500 r/min離心10 min，收集上清分裝，?80 ℃保存備用，按照ELISA試劑盒說明書檢測SP、CGRP、NKA、NKB、BK、PGE2和NGF含量；收集細胞沉淀，生理鹽水重懸后進行白細胞分類計數。

2.3.5 肺組織中細胞因子檢測 取右肺上葉，生理鹽水沖洗，取100 mg新鮮右肺上葉組織，加900 μL PBS和蛋白酶抑制劑，冰上充分研磨，5000×離心10 min，取上清，按照ELISA試劑盒說明書檢測SP、CGRP、NKA、NKB、BK、PGE2和NGF含量。

2.3.6 蘇木素-伊紅（HE）染色觀察肺和支氣管組織病理變化 肺和和支氣管組織經4%多聚甲醛固定后，常規石蠟包埋，切片厚4 μm，進行HE染色，由病理專業人員閱片。選取同一份樣本HE切片的2個視野，采用光學顯微鏡分別觀察肺和支氣管組織病理學改變，評分標準見表1、2。

表1 肺組織評分標準[7-8]

Table 1 Criteria for lung tissue scoring[7-8]

評分肺泡間隔增厚炎性細胞浸潤支氣管痙攣 0單層細胞，無增厚，肺泡完整正常，無或偶見炎性細胞浸潤正常，未見管腔狹窄 1輕度增厚，正常厚度的1～3倍，偶可見肺泡壁斷裂損傷輕度，散在浸潤輕度，散見，多數管腔大小正常 2中度增厚，正常厚度的3～5倍，肺泡壁斷裂有中性粒細胞浸潤中度，鏡下均可見痙攣，管腔狹窄 3重度，正常厚度的5倍以上，肺泡壁斷裂損傷，肺泡結構仍可見重度，大量中性粒細胞浸潤重度，嚴重痙攣，管腔嚴重狹窄

表2 支氣管評分標準[7-8]

Table 2 Criteria for bronchial scoring[7-8]

評分黏膜上皮腫脹和細胞脫落杯狀細胞增多炎性浸潤 0正常，絨毛排列整齊正常，未見杯狀細胞增多正常，無或偶見炎性細胞浸潤 1黏膜上皮輕度水腫，偶見上皮細胞脫落輕度，散見，多數管腔大小正常輕度，散在浸潤，偶見聚集成團 2黏膜上皮中度水腫，部分脫落，露出固有膜中度，黏液腺增生，支氣管微微擴張中度，聚集成團，但尚未見侵及支氣管黏膜下層 3黏膜上皮重度水腫，成片脫落，固有膜破壞重度，黏液腺增生，支氣管擴張重度，大量成團，侵及支氣管黏膜下層甚至黏膜層

2.4 統計學分析

3 結果

3.1 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠體質量的影響

整個實驗過程中，杏貝止咳顆粒低、中劑量組豚鼠分別死亡1只和2只，阿斯美組豚鼠死亡1只。造模和給藥期間對豚鼠體質量進行監測，如圖1所示，模型組豚鼠體質量增加緩慢，給予杏貝止咳顆粒后，杏貝止咳顆粒各劑量組PIC豚鼠體質量增加，其中以高劑量組最為明顯，與陽性對照藥蘇黃止咳膠囊基本一致。

圖1 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠體質量的影響

3.2 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠咳嗽敏感性的影響

如表3所示，與對照組比較，模型組豚鼠咳嗽次數顯著增多（＜0.001），咳嗽潛伏期顯著縮短（＜0.001）；與模型組比較，杏貝止咳顆粒各劑量組豚鼠咳嗽次數和延長咳嗽潛伏期顯著減少（＜0.001），且呈劑量相關性，高劑量組藥效與陽性藥阿斯美基本一致。

表3 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數的影響()

與對照組比較：##＜0.01###＜0.001；與模型組比較：*＜0.05**＜0.01***＜0.001，下表同

##< 0.01###< 0.001control group;*< 0.05**< 0.01***< 0.001model group, same as below tables

3.3 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠血清和肺泡灌洗液中細胞因子水平的影響

如圖2所示，與對照組比較，模型組血清中SP、CGRP、NKA、NKB、PGE2、BK、NGF水平均顯著升高（＜0.05、0.001）；與模型組比較，各給藥組血清中CGRP、NKA、NKB、PGE2、NGF水平均顯著降低（＜0.01、0.001），杏貝止咳顆粒各劑量組SP水平均顯著降低（＜0.05、0.001）。

如圖3所示，與對照組比較，模型組肺泡灌洗液中CGRP、NKA、NKB、PGE2和NGF水平顯著升高（＜0.05、0.001）；與模型組比較，各給藥組肺泡灌洗液中CGRP、NKB水平均顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），杏貝止咳顆粒低、高劑量組及阿斯美組和蘇黃止咳膠囊組NKA、PGE2水平均顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），杏貝止咳顆粒低、中劑量組和蘇黃止咳膠囊組NGF水平均顯著降低（＜0.001），杏貝止咳顆粒高劑量組和蘇黃止咳膠囊組BK水平均顯著降低（＜0.05）。

3.4 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠肺泡灌洗液白細胞分類的影響

如表4所示，與對照組比較，模型組白細胞總數、嗜堿性粒細胞及單核細胞占比無顯著差異，中性粒細胞和嗜酸性粒細胞占比顯著升高（＜0.01、0.001），淋巴細胞占比顯著降低（＜0.001）；與模型組比較，各給藥組中性粒細胞和嗜酸性粒細胞占比顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），淋巴細胞占比顯著升高（＜0.01、0.001）。

A-對照組 B-模型組 C-杏貝止咳顆粒低劑量組 D-杏貝止咳顆粒中劑量組 E-杏貝止咳顆粒高劑量組 F-阿斯美組 G-蘇黃止咳膠囊 與對照組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001，圖3、4同

圖3 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠肺泡灌洗液中細胞因子水平的影響(, n = 6)

表4 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠肺泡灌洗液白細胞分類的影響(, n = 6)

3.5 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠肺組織中細胞因子水平的影響

如圖4所示，與對照組比較，模型組肺組織中NGF、BK、NKB、PGE2、SP、CGRP和NKA水平均顯著升高（＜0.01、0.001）；與模型組比較，各給藥組NKB、PGE2水平均顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），杏貝止咳顆粒各劑量組和阿斯美組NGF、SP和NKA水平均顯著降低（＜0.01、0.001），杏貝止咳顆粒低、中劑量組和阿斯美組BK水平均顯著降低（＜0.01、0.001）。

3.6 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠肺組織病理及評分的影響

如圖5所示，與對照組比較，模型組肺泡間隔為正常厚度的5倍以上，肺泡壁斷裂損傷，肺泡結構仍可見；大量中性粒細胞浸潤；支氣管嚴重痙攣，管腔嚴重狹窄；黏膜上皮重度水腫，成片脫落，固有膜破壞；炎性細胞大量成團，侵及支氣管黏膜下層甚至黏膜層。與模型組比較，各給藥組肺泡間隔輕度增厚，為正常厚度的1～3倍，偶可見肺泡壁斷裂損傷；炎性細胞散在浸潤；支氣管可見痙攣，管腔狹窄；黏膜上皮輕度水腫，偶見上皮細胞脫落；炎性細胞散在浸潤。評分結果見表5，對照組豚鼠肺和支氣管組織病理學檢查有輕微病變，與對照組比較，模型組豚鼠肺和支氣管組織病理評分均顯著升高（＜0.01、0.001）；與模型組比較，杏貝止咳顆粒高劑量組和阿斯美組肺組織評分均顯著降低（＜0.05），杏貝止咳顆粒各劑量組和阿斯美組支氣管組織評分顯著降低（＜0.05、0.01、0.001）。

圖4 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠肺組織中細胞因子水平的影響(, n = 6)

紅色箭頭表示肺泡間隔增厚，藍色箭頭表示炎性細胞浸潤，黃色箭頭表示上皮細胞脫落，黑色箭頭表示管腔狹窄

表5 杏貝止咳顆粒對PIC模型豚鼠肺和支氣管組織病理學評分的影響

4 討論

氣道神經源性炎癥所致的高CRS是PIC發病關鍵環節。研究發現，受到病毒、細菌和辣椒素等刺激后，氣道C類神經纖維上的瞬時受體電位類香草酸受體亞型1（transient receptor potential vanillic 1，TRPV1）被激活，一方面使陽離子向胞內流動，興奮神經細胞，產生動作電位，引起咳嗽反射[9]；另一方面，使大量Ca2+內流，引起神經末梢突觸內SP、CGRP、NKA、NKB等神經肽大量釋放[10]，與氣道平滑肌、血管平滑肌、炎癥細胞、黏液腺體等效應細胞作用釋放組胺、緩激肽、前列腺素、白三烯以及白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis-α，TNF-α）等炎癥介質，產生神經源性炎癥反應（主要表現為血漿蛋白外滲、支氣管平滑肌收縮痙攣和黏液分泌增多），降低咳嗽閾值，導致氣道高反應，進而增高CRS[11]。

在氣道炎癥釋放的細胞因子中，前列腺素F2α（prostaglandin F2α，PGF2α）與EP3結合后，激活蛋白激酶A（protein kinase A，PKA）與鈣離子/鈣調蛋白依賴的蛋白激酶II（calcium/CaM-dependent protein kinase II，CaMKII）作用對抗鈣調素引起的TRPV1脫敏[12]；BK與BK2受體結合，激活磷脂酶C（phospholipase C，PLC），產生三磷酸肌醇（inositol-1,4,5-trisphosphate，IP3）和二酰基甘油（diacylglycerol，DAG），其中IP3作用胞內鈣庫，激活CaMKII抑制TRPV1脫敏，DAG激活蛋白激酶A（protein kinase C，PKC）磷酸化TRPV1，增強TRPV1受體敏感性[13-14]；NGF可增加神經元細胞膜上離子通道數量降低TRPV1激活閾值，同時也可激活PLC/PKC通路增加TRPV1受體敏感性，提示氣道炎癥的細胞因子通過影響TRPV1受體敏感性[15]，使得CRS快速動態變化。

臨床上目前多采用H1受體拮抗劑、白三烯受體拮抗劑、糖皮質激素等抗炎藥和止咳藥來治療PIC，但這些治療大多都是急性期咳嗽用藥，效果并不理想，且停藥后多有反復[16]。中醫藥更強調多組分、多環節整體治療[17]，中醫認為PIC系風邪犯肺、肺氣失宣所致，治療宜疏風宣肺、止咳利咽。源自臨床國醫大師周仲瑛經驗方——杏貝止咳顆粒由麻黃（蜜炙）、苦杏仁、桔梗、前胡、浙貝母、百部、北沙參、木蝴蝶、甘草9味中藥配伍而成，具有清宣肺氣、止咳化痰之功效，用于外感咳嗽屬表寒里熱證，癥見微惡寒、發熱、咳嗽、咯痰、痰稠質黏、口干苦、煩躁等外感咳嗽的表寒里熱證[18]。

基于杏貝止咳顆粒顯著的止咳化痰作用，推測其可能成為治療PIC的一種替代方案。為了驗證杏貝對PIC的治療作用，建立LPS致PIC豚鼠模型，觀察杏貝對PIC豚鼠咳嗽的影響。發現杏貝止咳顆粒能夠顯著降低PIC豚鼠的咳嗽次數，延長咳嗽潛伏期，療效與阿斯美、蘇黃止咳膠囊相似，且具有顆粒劑口服利用度高于膠囊劑、配伍組成無動物藥而患者更易接受和療程較短的特點。結果表明，杏貝止咳顆粒可以有效減輕和延緩PIC的咳嗽癥狀，是一種有效治療PIC的中藥。與對照組比較，模型組豚鼠咳嗽敏感性增高，肺組織增生和炎性細胞浸潤明顯，肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞和中性粒細胞數量顯著增加，血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK含量均顯著增加，經杏貝止咳顆粒治療后，可顯著減少咳嗽次數，延長咳嗽潛伏期，改善組織增生和炎性細胞浸潤，降低肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞和中性粒細胞的數量，減少血清、肺泡灌洗液和肺組織勻漿上清中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK的含量。

綜上，本研究發現杏貝止咳顆粒能有效改善PIC，其機制可能與減少血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK的含量從而降低咳嗽敏感性有關。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 蘇楠. 《咳嗽基層診療指南 (2018年)》的解讀 [J]. 中華全科醫師雜志, 2019, 18(11): 1112-1114.

[2] Lai K F, Lin L, Liu B J,. Eosinophilic airway inflammation is common in subacute cough following acute upper respiratory tract infection [J]., 2016, 21(4): 683-688.

[3] 唐志軍, 毛智榮, 屠春林, 等. 亞急性咳嗽1007例臨床分析 [J]. 重慶醫學, 2011, 40(33): 3399-3400.

[4] 胡詣璋, 趙俊, 崔璦. 感染后咳嗽發病機制及治療進展 [J]. 臨床藥物治療雜志, 2016, 14(1): 11-16.

[5] Capristo C, Rossi G A. Post-infectious persistent cough: Pathogenesis and therapeutic options [J]., 2017, 69(5): 444-454.

[6] 李飛俠, 朱佳, 王文, 等. 一種感染后咳嗽動物模型制作方法的建立及評價 [J]. 中華中醫藥學刊, 2013, 31(10): 2315-2317.

[7] 岳盈盈, 李鵬, 李志會, 等. 呼吸道合胞病毒感染兔呼吸系統組織病理學的改變和相關指數評分標準的建立 [J]. 中國比較醫學雜志, 2010, 20(6): 21-25.

[8] 范開亮. HO-1和中藥大柴胡湯對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺和肺保護機制的研究 [D]. 濟南: 山東大學, 2019.

[9] Sadofsky L R, Ramachandran R, Crow C,. Inflammatory stimuli up-regulate transient receptor potential vanilloid-1 expression in human bronchial fibroblasts [J]., 2012, 38(2): 75-81.

[10] Lv H N, Yue J L, Chen Z,. Effect of transient receptor potential vanilloid-1 on cough hypersensitivity induced by particulate matter 2.5 [J]., 2016, 151: 157-166.

[11] De Logu F, Patacchini R, Fontana G,. TRP functions in the broncho-pulmonary system [J]., 2016, 38(3): 321-329.

[12] 趙祥安, 王瑞, 朱佳. TRPV1在感染后咳嗽中的作用機制及其藥物治療前景 [J]. 臨床肺科雜志, 2015, 20(1): 125-128.

[13] 衡立君, 高國棟, 陳軍. 辣椒素受體VR1在局部炎癥狀態下的敏化機制 [J]. 神經解剖學雜志, 2004, 20(3): 315-318.

[14] El-Hashim A Z, Jaffal S M, Al-Rashidi F T,. Nerve growth factor enhances cough via a central mechanism of action [J]., 2013, 74: 68-77.

[15] Maher S A, Dubuis E D, Belvisi M G. G-protein coupled receptors regulating cough [J]., 2011, 11(3): 248-253.

[16] 賴克方, 聶怡初. 感染后咳嗽發病機制、診斷與治療研究進展 [J]. 中華肺部疾病雜志: 電子版, 2014, 7(5): 481-485.

[17] 王延玲, 孫懿. 感冒后咳嗽的中醫藥干預進展 [J]. 上海醫藥, 2020, 41(12): 30-32.

[18] 吳立崢, 李云濤, 邢磊. 杏貝止咳顆粒輔助治療對老年慢性阻塞性肺疾病穩定期患者生活質量、焦慮抑郁狀態及肺功能的影響[J]. 藥物評價研究, 2022, 42(12): 2541-2547.

Therapeutic effect of Xingbei Zhike Granules on post-infectious cough in guinea pigs

YUAN Sheng-nan1, ZHANG Xin-zhuang2, LIU Jing2, FAN Xiao-xue2, CAO Liang2, WANG Zhen-zhong2, XIAO Wei1, 2

1. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China 2. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China

To explore the effect of Xingbei Zhike Granules (杏貝止咳顆粒, XBZK) on post-infectious cough (PIC).In addition to control group, 3—4 weeks old SPF male Hartley guinea pigs were used to establish PIC guinea pig model by nasal drops of lipopolysaccharide, smoking and capsaicin atomization. After successful modeling, guinea pigs were divided into model group, Xingbei Zhike Granules low-, medium- and high-dose (0.93, 1.86, 3.72 g/kg) groups, Asmeton (21.62 mg/kg) group and Suhuang Zhike Capsules (蘇黃止咳膠囊, 313.88 mg/kg) group. After the last administration, cough frequency and latency were measured by capsaicin atomization. Substance P (SP), calcitonin gene related peptide (CGRP), neuropeptide A (NKA) and neuropeptide B (neuropeptide B, NKB), nerve growth factor (NGF), prostaglandin E2(PGE2) and bradykinin (BK) levels in serum, alveolar lavage fluid and lung tissue were detected by ELISA. The leukocyte classification in alveolar lavage fluid was determined by blood analyzer. Pathological changes of lung tissue were observed by hematoxylin-eosin (HE) staining.Compared with control group, the weight of guinea pigs in model group was slowly increased, the number of coughs was significantly increased (< 0.001), the latent period of cough was significantly shortened (< 0.001), the proportions of neutrophils and eosinophils were significantly increased (< 0.01, 0.001), and the contents of SP, CGRP, NKA, NKB, NGF, PGE2and BK in serum, alveolar lavage fluid and lung tissue were significantly increased (< 0.01, 0.001). Hyperplasia and inflammatory cell infiltration in lung tissue were obvious. Compared with model group, Xingbei Zhike Granules improved the slow increase trend of body weight in PIC guinea pigs, significantly reduced the number of coughs (< 0.001), prolonged the cough incubation period (< 0.001), significantly reduced the proportions of eosinophils and neutrophils in white blood cells (< 0.01, 0.001), and significantly reduced the contents of SP, CGRP, NKA, NKB, NGF, PGE2and BK in serum, alveolar lavage fluid and lung tissue (< 0.05, 0.01, 0.001), relieved the histopathological changes of lung tissue.Xingbei Zhike Granule has therapeutic effect on PIC guinea pigs.

post-infectious cough; guinea pigs; Xingbei Zhike Granules; cough sensitivity; neurogenic inflammation

R285.5

A

0253 - 2670(2023)10 - 3197 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.10.017

2023-02-15

2021年國家中醫藥管理局青年岐黃學者項目（國中醫藥人教函[2022]6號）

袁勝男（1998—），女，碩士研究生，研究方向為中藥新藥研發及過程控制。E-mail: 1163855048@qq.com

肖 偉，中國工程院院士，研究員，博士生導師，研究方向為中藥新藥研發及過程控制。E-mail: kanionlunwen@163.com

[責任編輯 李亞楠]