活動性肺結(jié)核早期檢驗中熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法的價值分析

袁楨，張云杰

（河南省南陽市宛城區(qū)疾病預(yù)防控制中心 1 化驗室，2 結(jié)核病防治科，河南 南陽 473000）

肺結(jié)核是臨床常見的慢性傳染疾病，其發(fā)生主要與機體免疫能力降低、結(jié)合桿菌感染密切相關(guān)［1－2］，患者患病后多呈現(xiàn)咳嗽、咳痰、發(fā)熱等基礎(chǔ)癥狀。近年來，隨著我國醫(yī)療技術(shù)飛速發(fā)展，肺結(jié)核的鑒別診斷方式逐漸增加，其中痰涂片檢查被作為肺結(jié)核鑒別診斷的 “金標(biāo)準(zhǔn)”，但考慮其所需操作時間過長，且樣本收集方法、染色劑類別等因素會影響檢測結(jié)果［3］。有相關(guān)研究［4］表明，熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法對活動性肺結(jié)核具有良好的診斷效能。本研究對比熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法對活動性肺結(jié)核的診斷價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2020 年3 月至2022 年3 月我中心收治的80 例肺結(jié)核患者，其中男性46 例，女性34 例；年齡27～70歲，平均（43.15 ± 4.52）歲；病程2～9 個月，平均（4.86 ±0.57）個月。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查、影像學(xué)檢查明確診斷為肺結(jié)核；②意識狀態(tài)較好，對研究中各項檢測配合良好；③知曉研究目的，且自愿簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在其他傳染性疾病；②機體多器官功能障礙；③嚴重感染性疾病；④危急重癥；⑤因中途轉(zhuǎn)院或其他原因?qū)е虏±撀洹?/p>

1.2 檢測方法①熒光定量檢驗PCR：在無菌吸管輔助下采集患者1 mL 痰液標(biāo)本，加入處理液并封管震蕩5 mL，室溫環(huán)境下放置15 min，促進痰標(biāo)本充分液化。將獲取樣本轉(zhuǎn)移到錐型離心管予以10 min 常規(guī)離心處理，將去除上層清液的樣本加入2 mL 處理液，充分震蕩后進行熒光定量PCR 檢測，儀器選擇Prism 7000 型熒光定量PCR 儀（美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)）。熒光定量檢驗PCR 陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：擴增曲線Ct 值30～36為 弱陽性，25～29 為 “+”，20～24 為 “++”，15～29 為“+++”，＜15 為 “++++”。②涂片抗酸染色法：常規(guī)獲取受檢對象痰標(biāo)本后進行固定與加熱操作，取金胺 “O” 染色劑滴加于載玻片上，染色時間為30 min，后使用流水洗片，待染色劑完全清除后另外滴加脫色劑并直至整個樣本均被覆蓋，待痰膜呈現(xiàn)無色狀后繼續(xù)使用流水洗片，上述操作完成后重復(fù)滴加染色劑－流動自來水沖洗，并在室內(nèi)溫度下風(fēng)干，利用低倍顯微鏡對處理后樣本進行篩查，后使用高倍顯微鏡再次確認檢測結(jié)果。顯微鏡下50 視野觀察到1～9 條抗酸桿菌為弱陽性，10～49 條為 “+”，顯微鏡下1 視野內(nèi)抗酸桿菌1～9 條為 “++”，10～99 條為 “+++”，≥100 條為 “++++”。

1.3 觀察指標(biāo)以最終的臨床診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法診斷效能，并分析兩種檢測方式與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性。靈敏度＝真陽性例數(shù)／（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）× 100%；特異度＝真陰性例數(shù)／（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）× 100%；準(zhǔn)確度＝（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）／總例數(shù)× 100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料行χ2檢驗，一致性采用κ 檢驗，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法的診斷結(jié)果80 例肺結(jié)核患者經(jīng)臨床診斷確診活動性肺結(jié)核70 例，非活動性肺結(jié)核10 例。以臨床診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，熒光定量檢驗PCR 診斷敏感度為100.00%（70／70），特異度為90.00%（9／10），準(zhǔn)確度為98.75%（79／80）。涂片抗酸染色法診斷敏感度為75.71%（53／70），特異度為20.00%（2／10），準(zhǔn)確度為68.75%（55／80）。κ 檢驗分析結(jié)果顯示，熒光定量檢驗PCR 與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性較好（κ ＝0.940，P ＜0.05）；涂片抗酸染色法檢查結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性中等（κ ＝0.591，P ＜0.05）。見表1。

表1 熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法的診斷結(jié)果（例）

2.2 不同檢測方法診斷效能比較熒光定量檢驗PCR 對活動性肺結(jié)核的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均高于涂片抗酸染色（P ＜0.05）。見表2。

表2 熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法診斷效能比較

3 討論

痰標(biāo)本是診斷肺結(jié)核的 “金標(biāo)準(zhǔn)”，但該檢查手段相關(guān)操作較多，且易受到痰液收集質(zhì)量的影響，因此大規(guī)模應(yīng)用于篩查并不現(xiàn)實［5］。痰涂片抗酸染色法是近年來逐漸興起的一種高效檢查手段，在實施染色－洗片－復(fù)染操作后能對不易著色的痰液標(biāo)本進行標(biāo)記，一定程度上提高診斷結(jié)果可信度［6］，但結(jié)果易受外界因素影響，因此部分患者在應(yīng)用該方法篩查時并不能獲得理想效果，易出現(xiàn)漏診、誤診情況。熒光定量檢驗PCR 應(yīng)用熒光化學(xué)物質(zhì)對聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進行實時監(jiān)控，整個檢查過程均在儀器支持下進行，且整個反應(yīng)過程中的Ct 值在各時間點均與起始拷貝數(shù)呈線性增長關(guān)系，可有效提高測量結(jié)果的準(zhǔn)確度。本研究結(jié)果顯示，熒光定量檢驗PCR 對活動性肺結(jié)核的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度高于涂片抗酸染色法（P ＜0.05），表明熒光定量檢驗PCR 對活動性肺結(jié)核具有更好的診斷效能，可提高診斷準(zhǔn)確度，為患者疾病早期治療提供診斷支持。李艷紅等［7］選擇88 例肺結(jié)核患者，收集痰標(biāo)本后分別進行熒光定量檢驗PCR 與涂片抗酸染色法檢測，結(jié)果顯示熒光定量檢驗PCR 對肺結(jié)核的診斷效能高于涂片抗酸染色法（P ＜0.05），與本研究結(jié)果一致。李蘇梅等［8］的研究也認為，熒光定量檢驗PCR 在痰標(biāo)本檢測與診斷中的應(yīng)用優(yōu)勢明顯，可測量與標(biāo)記多個熒光信號，為Ct 值相關(guān)曲線建立與分析提供更多數(shù)據(jù)參考。

綜上所述，熒光定量檢驗PCR 對活動性肺結(jié)核的診斷效能優(yōu)于涂片抗酸染色法，可作為早期篩查手段予以推廣應(yīng)用。但在獲取痰標(biāo)本時可能存在抑制因子、標(biāo)本處理方法不當(dāng)、DNA提取不當(dāng)?shù)纫蛩貙?dǎo)致結(jié)果準(zhǔn)確率降低，臨床上可針對上述因素予以改善，最大程度提升熒光定量檢驗PCR 的臨床診斷效能。