產前基因檢測在同型地中海貧血基因攜帶者中應用價值分析

黎雪華，董錦蓮，周偉敏

高州市婦幼保健院婦保科，廣東 高州 525200

地中海貧血（簡稱地貧）屬于一種慢性溶血性疾病，由珠蛋白合成障礙所致，是常見的單基因遺傳病。地貧患者臨床癥狀輕重不一，患者可能無癥狀表現，也可能會造成嚴重貧血，對患者的內分泌系統及肝臟、心臟等進行損害［1］。依據珠蛋白受損程度，可分為α-地貧、β-地貧兩種，其中重型α-地貧在宮內便會由于嚴重貧血導致胎兒水腫，造成死胎、流產或出生后不久死亡［2］。重型β-地貧于出生后3～6個月發病，多數在5歲前死亡，即使存活也需要定期進行輸血治療［3-4］。地貧的發生會給患者家庭及社會帶來沉重的經濟負擔，增加患者心理負擔，已經成為我國一個重要的公共衛生問題，妊娠合并地貧可能會增加低出生體重、早產等不良妊娠結局。目前地貧尚無根治性方法，故對同型地貧基因攜帶者夫婦進行產前診斷，這對預防重型地貧患兒的出生、提高人口質量具有重要影響［5］。鑒于此，本研究將分析產前基因檢測在同型地貧基因攜帶者中應用價值，為預防地貧提供科學依據，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年4月—2021年4月高州市婦幼保健院進行優生優育咨詢或產生檢查的孕婦及配偶，采用血常規、血紅蛋白電泳進行篩查，針對98對疑似為陽性地貧基因攜帶者夫婦進行基因診斷，其中78對夫婦雙方均為α-地貧基因攜帶者，16對均為β-地貧基因攜帶者，4對為復合α、β-地貧基因攜帶者。孕婦年齡20～43歲，平均年齡（29.74±2.06）歲；孕周11～26周，平均孕周（17.13±1.15）周；體質量指數（BMI）18.2～30.5 kg/m2，平均BMI（25.81±2.03）kg/m2；受教育年限2～17年，平均受教育年限（11.03±2.59）年。本研究獲醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 入選標準

（1）納入標準：①夫婦雙方簽署知情同意書。②夫婦為同型地中海貧血。③孕婦均為單胎妊娠。（2）排除標準：①合并貧血、心臟病、高血壓、糖尿病等疾病。②行為異常，患有精神疾病，或認知功能、言語功能障礙，無法積極配合臨床診治。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集采用乙二胺四乙酸二鉀采血管（規格為3mL），負壓抽取丈夫前臂靜脈血2mL×1管，共計2mL，保存于-80℃冰箱備用；同時在孕婦抽取羊水前，采用乙二胺四乙酸二鉀采血管從孕婦前臂負壓抽取2mL；同時對羊水進行抽取20 m L，以對基因進行檢測，并分析胎兒染色體核型。

1.3.2 基因檢測外周血基因組的提取采用全自動核酸提取儀（Lab-Aid824型，廈門致善生物科技股份有限公司提供），依據DNA提取試劑盒（廣東凱普生物科技股份有限公司提供）說明書進行羊水基因組提取；α-地貧缺失型、α-地貧突變型和β-地貧基因檢測試劑盒均購自深圳亞能生物技術有限公司，α-地貧基因診斷：采用單管多重Gap-PCR技術對α-珠蛋白基因缺失型--、-α3.7、-α4.2、--THAI進行檢測；采用聚合酶鏈反應—反向斑點雜交法（PCR-RDB）技術測定α-珠蛋白基因突變型αCS、αQS、αWS；β-地貧基因診斷：采用PCR-RDB技術檢測我國常見的17種β-珠蛋白基因突變型。

1.4 評價指標

分析基因檢測結果及胎兒染色體核型結果。

2 結果

2.1 分析基因檢測結果

78對α-地貧基因攜帶者基因檢測中-SEA/αα占比最高為38.46%，--SEA/--SEA占比次之為16.67%；16對β-地貧基因攜帶者基因檢測中CD17（A→T）/N占比最高為25.00%，CD17（A→T）/CD17（A→T）、CD26（GAG＞AAG）/N、N/N占比次之，均為12.50%；4對復合α-、β-地貧基因攜帶者中重型、中間型各1例，輕型2例，見表1、表2、表3。

表1 78對α-地貧基因攜帶者基因檢測結果

表2 16對β-地貧基因攜帶者基因檢測結果

表3 4對復合α-、β-地貧基因攜帶者基因檢測結果

2.2 分析胎兒染色體核型

98例胎兒染色體核型分析結果顯示有11例染色體正常變異，1例add（13）（p13），86例46，XN；98對夫婦均進行優生遺傳咨詢，其中18例重型地貧患兒均進行引產。

3 討論

地貧在地中海地區國家，諸如土耳其、意大利及希臘等，較為常見。在我國，地貧是長江以南的地區較為常見的遺傳病，地貧基因攜帶者約占世界人口總數的4.8%，已成為危害人類健康的常見溶血性疾病。地貧作為常見的遺傳性溶血性貧血病，近年來地貧發生率不斷上升，已成為影響人類健康的重要原因。地貧可分為α型、β型兩種，依據臨床癥狀及其基因型可分為重型、中間型及輕型，其中重型地貧為致死性疾病，重型地貧患兒的出生會給家庭帶來嚴重的精神負擔及經濟壓力，對人口質量構成嚴重威脅［6］。同時重型地貧缺乏有效治療方法，故于產前診斷，并選擇性終止妊娠以減少重型地貧患兒的出生，為防控地貧的重點所在［7-8］。輕型地貧患者無典型臨床表現，僅需定期復查及密切觀察即可，對生長發育、智力及壽命無明顯影響。中間型地貧患者貧血程度不一，包括中間型β-地貧、血紅蛋白H病，治療方法較多［9］。

地貧屬于常染色體隱性遺傳病，其遺傳方式符合孟德爾定律，夫婦雙方同為地貧基因攜帶者，則生育重型地貧患兒的概率約為25%，若一方為地貧基因攜帶者，則生育子女成為地貧基因攜帶者概率約為50%［10-11］。本研究結果顯示，同型地貧基因攜帶者中α-、β-地貧基因型分別以--SEA、CD17（A→T）為主，且重型地貧具有較高的檢出率，同時在對同型地中海貧血基因攜帶者進行基因檢測的同時，需要對有無其他遺傳病進行觀察。目前針對進行優生優育咨詢或產生檢查的孕婦及配偶，首先通過血常規、血紅蛋白電泳進行地貧篩查，針對疑似為陽性地貧基因攜帶者需要進行基因診斷，診斷為同型地貧攜帶者的夫婦可在臨床醫生指導下進行產前診斷及遺傳咨詢，以避免重型地貧患兒的出生。妊娠合并地貧極易導致低出生體重低或早產的發生，中重型地貧胎兒極易出現貧血，導致胎兒宮內缺氧、宮內窘迫，增加低體重患兒的發生，增加剖宮產率［12-13］。攜帶者篩查、基因診斷、遺傳咨詢和產前診斷是預防重型地貧的有效措施。臨床上需要加強對地貧孕婦的健康教育，促使孕婦能夠深入了解并正確認識地貧對妊娠結局的不良影響，促使孕婦圍產保健意識得以提高，提高胎兒地貧產前診斷的依從性。產前診斷是實現地貧預防目標的最后屏障，開展地貧產前篩查及診斷對減輕家庭及社會負擔、提高人口素質具有重要作用，尤其需要重視對重型地貧的產前診斷，在發現重型地貧胎兒時，需要對孕婦及其家屬做好相關遺傳指導，基于孕婦及其家屬知情與自愿原則，對重型地貧胎兒采取干預措施［14-15］。但本次研究中納入樣本量小，且未對妊娠結局及新生兒指標進行分析，可能會對研究結果準確性造成一定影響，還有待臨床深入分析研究，以進一步分析產前基因檢測在同型地中海貧血基因攜帶者中應用價值，為同型地中海貧血基因攜帶者的產前診斷工作的實施及圍生期保健提供確切參考，為提升地貧的防治水平助力。

綜上所述，在同型地貧基因攜帶者中進行產前基因檢測能夠防止重型地貧患兒的出生，其中α、β-地貧基因型分別以--SEA、CD17（A→T）為主，需要依據產前基因檢測結果為孕婦及其家屬提供有效的遺傳咨詢。