陜西省大型真菌新記錄種
——吉林擬鬼傘*

劉 愚，霍文嚴，賀雪蓮，陳 軍，張黎光，祁 鵬，戴 璐，李峻志**

（1.陜西省微生物研究所，陜西 西安 710000；2.陜西省太白林業局，陜西 寶雞 721600）

擬鬼傘屬（Coprinopsis）隸屬于擔子菌門（Basidiomycota）傘菌綱（Agaricomycetes）傘菌目（Agaricales）小脆柄菇科（Psathyrellaceae）[1]。由于其孢子呈暗色，部分種具有菌蓋會自溶成黑色的特點，1797年PERSON[2]將此類大型真菌物種從蘑菇屬（Agaricus）中分離出來，歸為鬼傘屬。1994年HOPPLE[3]使用分子生物學手段發現鬼傘屬是非單系的。2001年REDHEAD[4]結合分子生物學和形態學特征，證明了HOPPLE 的結論，并將原鬼傘屬的物種重新分為4 個新屬：鬼傘屬（Coprinus）、擬鬼傘屬（Coprinopsis）、小鬼傘屬（Coprinellus）和近地傘屬（Parasola）；其中后3 個屬分入小脆柄菇科（Psathyrellaceae）。2020年W?CHTER 和MELZER[5]對小脆柄菇科進行系統學分析，發現小鬼傘屬非單系，又重新分類，建立了刺毛鬼傘屬（Tulosesus）和心孢鬼傘屬（Narcissea）；將原Coprinellus pakistanicus歸入新屬Punjabia，這是目前對鬼傘類大型真菌最新的科學分類。

黃柏塬自然保護區地處秦嶺南麓，是秦嶺自然保護區群的核心區域，與老縣城保護區、佛坪自然保護區、長青保護區、牛尾河自然保護區、太白山自然保護區相鄰。該保護區是北亞熱帶和暖溫帶的過渡地帶，地處中國南北植物交匯處，因此，秦嶺植被垂直帶譜明顯，植物區塊化明顯，容易形成局部的生態和環境圈，生態環境獨特[6]。特殊的地理位置與多樣的山地垂直帶譜，為秦嶺大型真菌的生物多樣性提供了良好基礎[7]。

2021年至2022年，對陜西省內黃柏塬自然保護區的大型真菌生物多樣性進行了系統的調查，共采集到大型真菌標本150 余份。通過結合傳統的形態學及分子系統學的方法，將編號為20210526 號標本鑒定為吉林擬鬼傘（Coprinopsis jilinensis）。這是首次在陜西省境內發現吉林擬鬼傘，不僅豐富了秦嶺地區大型真菌資源的物種多樣性，也對秦嶺地區的生態環境保護提供了科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

子實體樣品（編號20210526），于2021年9月9日采集自太白縣黃柏塬自然保護區。干燥標本現保藏于陜西省微生物研究所秦嶺菌物標本館（SXIM）。

1.2 試驗方法

1.2.1 形態學觀察

在野外采集樣本時，對樣本的生境、外觀形態進行拍照留存，并進行相應的觀察記錄。內容包括生境特征；菌蓋大小、形狀、顏色、表面特征；菌褶形狀、顏色、寬度；菌肉顏色；菌柄形狀、長度、直徑、表面特征等；傷變色，是否有乳汁產生等[8]。之后使用干燥變色硅膠處理樣品，防止標本發生美拉德反應。顯微觀察時，先使用5% KOH 溶液對干燥的樣品進行復水處理，制作切片，用剛果紅染色。使用Olympus BX43 光學顯微鏡對樣品的菌蓋、菌絲、菌幕菌絲、孢子、擔子等顯微結構進行觀察，并測量記錄菌絲、孢子等的大小[9]。

1.2.2 分子生物學檢測

1）DNA 提取。使用生工生物工程股份有限公司的真菌基因組DNA 提取試劑盒，按照說明書提取樣本基因組DNA。

2）ITS 序列PCR 擴增。以樣本基因組DNA 為模板，以ITS4/ITS5 作為擴增引物，對樣本的ITS 序列進行PCR 擴增。擴增程序為：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性40 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，30次循環；72 ℃延伸6 min。取15 μL PCR 產物進行瓊脂糖凝膠電泳（參數為120 V，60 min）檢測。

3）將樣本的PCR 擴增產物送至北京擎科生物科技有限公司進行測序。

1.2.3 生物信息學分析

1）ITS 序列分析。使用DNAMAN 9.0 對測序結果進行人工排除序列誤讀檢查。將檢查合格的序列上傳至NCBI 中進行BLAST 比對，確認樣本的拉丁名。下載與樣本相似度高的18 種擬鬼傘屬其他物種的堿基序列，用DNAMAN 進行序列比對，對下載的同物種序列進行整理并保存為fasta 文件。

2）系統發育分析。以毛頭鬼傘Coprinus comatus（KX015766）作為外類群，用MEGA 7 軟件，采用鄰接法（neighbor-joining method）以Kimura-2 parameter 模型構建系統發育樹，Bootstrap 1 000 次。

2 結果與分析

2.1 形態學分析結果

2.1.1 生境特征

樣本于2021年9月采自針闊混交林（以油松和櫟類樹種為主）。采集地海拔為1 800～2 000 m，散生或群生于林地腐殖土上，與饒固等[10]的描述相似。

2.1.2 宏觀結構特征

吉林擬鬼傘子實體的形態特征見圖1。

圖1 吉林擬鬼傘子實體Fig.1 Fruit body of Coprinopsis jilinensis

如圖1世紀，子實體菌蓋直徑3～7 cm，幼時半球型，成熟后扁半球型，中間稍臍凸，表面淺褐色，被白色短絨毛，有絲狀菌膜幕，幼時多，成熟后菌蓋邊緣有少量殘留；菌肉厚，白色；菌褶彎生，寬2 cm，米白色，不等長，波狀，邊緣鋸齒狀，緊密；菌柄長3～6 cm，直徑1.0～1.5 cm，中生，棒狀，由上向下逐漸變粗，基部稍膨大，顏色同菌蓋，表面被細絨毛鱗片，肉質，中心海綿質，上端有細縱條紋，基部有白色菌絲體與附著物相連接。

2.1.3 微觀結構特征

吉林擬鬼傘的顯微結構特征詳見圖2。

圖2 吉林擬鬼傘的顯微結構Fig.2 Microscopic features of Coprinopsis jilinensis

如圖2世紀，樣本擔孢子4.3 μm×8.7 μm，杏仁型，孢子壁薄，光滑，淡黃色至黃褐色；擔子（3.8～11.5）μm×（29.8～34.5）μm，棒狀，無色近透明，壁薄，有2～4 個擔子小梗，為無隔擔子；菌蓋菌絲直徑9.1～18.2 μm，無分枝，有橫隔，壁薄；囊狀體（3.6～8.9）μm×（21.4～33.9）μm，棒狀；菌幕菌絲直徑13.6～20.5 μm，無分枝，有橫隔。

2.2 系統發育分析結果

經測序，編號為20210526 的樣品ITS 序列全長為751 bp，系統發育分析結果見圖3。

圖3 基于ITS 序列構建的系統發育樹Fig.3 Phylogenetic tree based on ITS sequences

如圖3世紀，本次在黃柏塬地區采集到的樣本20210526 與之前學者研究的吉林擬鬼傘為同一分支（其序列一致性為100%），支持率100%，并且與擬鬼傘屬的其他物種分開。分子系統發育分析結果表明樣本20210526 為吉林擬鬼傘Coprinopsis jilinensis。

3 結論

吉林擬鬼傘子的實體小型至中型，不自溶，與鬼傘屬和小脆柄菇科的大部分物種不同。只通過宏觀形態鑒定，不易分辨。吉林擬鬼傘的命名者饒固等[10]發布并描述了吉林擬鬼傘的生物學特征，該物種最先被發現是在吉林省敦化市，生長在針闊混交林。分子生物學的發展對大型真菌的分類有著關鍵性的作用，通過分子生物學分析，可以將很多宏觀形態學相近的不同物種區分出來，使得分類系統更加完善[3，5]。本試驗中通過結合分子手段和宏觀特征，確認采集自陜西秦嶺地區的樣本為吉林擬鬼傘，為陜西省新分布記錄種。