子宮內膜癌組織NRP1、Talin1的表達及其臨床意義

王紅玫,韓偉,張丹

(重慶市大足區人民醫院 婦科,重慶 402360)

我國子宮內膜癌在女性生殖系統惡性腫瘤中是發病率僅次于宮頸癌的第二大惡性腫瘤,且其發病年齡趨于年輕化[1]。子宮內膜癌發生在子宮內膜,在女性圍絕經期和絕經后發生較多[2]。迄今,子宮內膜癌的發病機制尚未完全明確,尋找能夠有效預測子宮內膜癌預后的生物標志物對于其靶向治療具有重要意義。神經纖毛蛋白-1(NRP1)是一種跨膜糖蛋白,在胚胎組織發育、血管生成、腫瘤轉移中有重要作用[3]。有研究發現,NRP1表達上調改變腫瘤微環境,促進腫瘤細胞有絲分裂,刺激腫瘤生長、浸潤、轉移[4]。踝蛋白1(Talin1)是一種細胞骨架蛋白,廣泛參與癌癥的發生發展過程,如癌細胞的極化、轉移等[5-6]。目前,對子宮內膜癌組織NRP1、Talin1表達研究較少。本研究通過檢測子宮內膜癌組織中NRP1、Talin1的表達,探究二者與腫瘤進展、預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年1月在我院就診的子宮內膜癌患者156例,患者均行手術治療,術中收集癌組織和癌旁組織。患者年齡31～76歲,平均(62.50±12.76)歲,其中≥60歲87例,<60歲69例;腫瘤大小≥5 cm 50例,<5 cm 106例;淋巴結轉移46例,未轉移110例;腫瘤低分化65例,中、高分化91例;腫瘤浸潤深度淺肌層93例,深肌層63例;臨床分期Ⅰ～Ⅱ期99例,Ⅲ期57例。納入標準:(1) 按照《子宮內膜癌診斷與治療指南(第四版)》[7]診斷為子宮內膜癌的患者;(2) 初診,具有手術治療指征并接受手術治療者;(3) 在本院治療前未接受過放、化療或其它抗腫瘤治療者。排除標準:(1) 伴有慢性疾病,如合并心腦血管疾病等;(2) 合并其他惡性腫瘤;(3) 孕期或哺乳期女性;(4) 有心理或精神障礙。本研究通過本院倫理委員會批準,患者及家屬知情并簽署同意書。

1.2 主要儀器和試劑

鼠抗人NRP1抗體購自中國上海恪敏生物科技有限公司;鼠抗人Talin1單克隆抗體購自中國深圳市康初源有限公司;免疫組織化學試劑盒購自深圳子科生物有限公司;顯色試劑盒購自中國深圳市康初源有限公司;二抗購自上海莼試生物技術有限公司;石蠟切片機購自中國上海恪敏生物科技有限公司;顯微鏡購自北京德航五洲科技有限公司。

1.3 樣品采集

采集子宮內膜癌患者癌組織和癌旁組織,置于無液氮RNA樣品組織保存液中,-80 ℃保存待測。

1.4 免疫組化法檢測NRP1、Talin1表達情況

采用免疫組化法測定患者癌組織和癌旁組織NRP1、Talin1表達水平。用4%甲醛將待測組織樣本固定24 h,石蠟包埋, 4 μm厚切片。對切片脫蠟、脫水,加入相應的一抗,4 ℃孵育過夜,然后用PBS沖洗兩次,加入二抗,4 ℃孵育1 h,采用DAB顯色、蘇木素復染,然后分化、脫水、封片、鏡檢。

1.5 染色結果判定標準

采用半定量評分法判定表達結果。陽性細胞比例判定標準:陽性細胞比例<25%記為0分;25%～50%記為1分;51%～75%記為2分;>75%記為3分。染色強度判定標準:無染色記為0分;弱染色記為1分;中染色記為2分;強染色記為3分[8]。根據染色指數判定結果,染色指數為陽性細胞比例和染色強度評分的乘積,染色指數范圍為0～9分,染色指數≥3分為陽性,染色指數<3分為陰性[9]。評分過程由兩名專業人員操作。

1.6 隨訪

對子宮內膜癌患者術后進行為期5年的隨訪。隨訪方式為電話隨訪或入院復查,隨訪內容為患者生存情況。隨訪終止時間為2022年1月,隨訪終點為患者死亡或隨訪結束。本研究中,隨訪死亡患者死因均為子宮內膜癌。

1.7 統計學處理

采用SPSS 25.0統計軟件處理數據。計數資料以例表示,行χ2檢驗。采用Kaplan-Meier法分析NRP1、Talin1表達與患者預后的關系。采用多因素Cox回歸分析影響子宮內膜癌患者預后的危險因素。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 癌組織和癌旁組織NRP1、Talin1陽性表達情況

癌組織中NRP1陽性率為62.82%,高于癌旁組織的35.26%(P<0.05);Talin1在癌組織中的陽性率為61.54%,低于癌旁組織的95.51%(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 癌組織和癌旁組織NRP1、Talin1陽性表達情況 例

A.子宮內膜癌組織NRP1的表達;B.癌旁組織NRP1的表達;C.子宮內膜癌組織Talin1的表達;D.癌旁組織Talin1的表達圖1 癌組織和癌旁組織中NRP1、Talin1的陽性表達

2.2 NRP1、Talin1表達與子宮內膜癌患者臨床病理特征的關系

組織分化程度低、臨床分期Ⅲ期的子宮內膜癌患者NRP1陽性率升高,Talin1陽性率降低,差異均具有統計學意義(P<0.05);不同年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、肌層浸潤患者NRP1、Talin1的表達差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 NRP1、Talin1表達與子宮內膜癌患者臨床病理特征的關系 例

2.3 NRP1、Talin1表達與患者預后的關系

對患者隨訪5年,NRP1陽性患者的累計生存率為61.22%(60/98),陰性患者為93.10%(54/58);Talin1陽性患者的累計生存率為92.71%(89/96),陰性患者為41.67%(25/60)。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示,NRP1陽性患者生存率低于陰性患者(χ2=18.821,P<0.001),Talin1陰性患者生存率低于陽性患者(χ2=48.893,P=0.001),見圖2。

圖2 NRP1、Talin1表達與預后的關系

2.4 Cox回歸分析影響子宮內膜癌預后的危險因素

以子宮內膜癌患者生存狀況為因變量(死亡=1,存活=0),以年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、肌層浸潤、組織分化程度、臨床分期和NRP1、Talin1表達為自變量,進行Cox回歸分析。單因素、多因素Cox回歸分析結果均顯示,NRP1陽性表達、Talin1陰性表達、分化程度低、臨床分期Ⅲ是影響子宮內膜癌患者預后的危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 Cox回歸分析影響患者預后的危險因素

3 討 論

子宮內膜癌是女性生殖系統三大惡性腫瘤之一,其發病率排全球女性罹患癌癥的第六位[7]。近年來,子宮內膜癌發病率升高、發病年齡趨于年輕化[10]。子宮內膜癌多發生于絕經期、絕經后的女性,臨床表現為陰道異常流血,多數患者確診時已是中晚期[11]。目前,子宮內膜癌的主要治療手段為手術治療、放療、化療、內分泌治療等,但患者預后較差,生存時間短[12-13]。迄今,子宮內膜癌的發生機制尚未完全清楚。尋找子宮內膜癌有效的生物標志物,對改善患者的治療、預后,提升患者生存質量具有重要的意義。

NRP1是屬于神經纖毛蛋白家族的一種跨膜受體,具有調節神經系統軸突、促進血管新生、修復血管損傷等功能[4,14]。多項研究表明,NRP1在腫瘤的發生發展中起重要作用。有研究發現,在食管鱗狀細胞癌中NRP1過表達促進癌細胞增殖,刺激食管鱗狀細胞癌的發展[15]。因此,NRP1有可能是癌癥治療的潛在靶點。Talin1屬于踝蛋白家族,踝蛋白家族是一類重要的大分子骨架蛋白、調控蛋白,在不同環境中具有不同的作用機制,發揮特定的功能[16]。Talin1位于細胞基質附著位點,通過活化整合素進而影響腫瘤的發生、轉移等[17]。迄今,對子宮內膜癌中NRP1和Talin1的表達水平及其與病情進展、預后的關系研究較少。本研究結果顯示,NRP1在癌組織中的表達水平高于其在癌旁組織中的表達水平,Talin1在癌組織中的表達水平低于其在癌旁組織中的表達水平,說明NRP1和Talin1的異常表達均與子宮內膜癌發生發展有關。Zhu等[18]發現,膽管癌中NRP1表達上調促進癌細胞的增殖和遷移,促進腫瘤生長。已證實,Talin1與肝癌細胞的遷移和黏附有關,并且可作為肝癌的診斷指標[19]。以上研究提示,NRP1、Talin1異常表達可能通過某種途徑調控子宮內膜癌細胞增殖、遷移等活性,進而對疾病進展有積極促進作用。楊永超等[4]研究顯示,NRP1異常表達與涎腺腺樣囊性癌的臨床分期、腫瘤細胞是否侵犯頸部淋巴結、組織學類型有關。本研究結果顯示,組織分化程度低和臨床分期Ⅲ期的子宮內膜癌患者NRP1陽性率升高,Talin1陽性率降低,表明NRP1和Talin1可能通過某種途徑參與子宮內膜癌的發生發展,與病情惡化有關,可作為其臨床檢測指標。此外,NRP1高表達的肝細胞癌患者術后1年內復發率高于低表達者[20]。有研究[21]表明,在結直腸癌中,Talin1低表達促進腫瘤發展,低表達者預后較差。結合NRP1、Talin1表達情況,本研究采用Kaplan-Meier法分析兩者與子宮內膜癌患者的預后關系,結果顯示NRP1陽性患者的生存率低于陰性患者,Talin1陰性患者的生存率低于陽性患者,提示NRP1高表達、Talin1低表達的子宮內膜癌患者生存率較低、預后較差,二者可能成為子宮內膜癌治療的潛在靶基因。多因素Cox回歸分析顯示,NRP1高表達、Talin1低表達是影響子宮內膜癌患者不良預后的危險因素,提示NRP1高表達和Talin1低表達具有評估子宮內膜癌患者預后的作用,通過檢測二者表達水平,臨床可制定合理治療方案,改善治療、預后效果,降低死亡率。

綜上所述,子宮內膜癌患者組織中NRP1表達上調,Talin1表達下調,二者與組織分化程度、臨床分期以及患者預后密切相關,是影響子宮內膜癌患者預后的危險因素。NRP1和Talin1共同參與了子宮內膜癌的發生發展過程,與腫瘤發展關系密切,可作為預測子宮內膜癌患者預后的生物標志物。臨床可參考二者表達水平評估患者病情,進而改善預后。但本研究并未對子宮內膜癌的發病機制與NRP1和Talin1的關系進行研究,后續需進一步探索二者與子宮內膜癌發生的關系。