殺菌劑防治浙貝母灰霉病田間藥效調查方法比較

柳采秀 張楠 吳長興 聶東興 徐筆奇 蒼濤

摘要

為探索殺菌劑防治浙貝母灰霉病的準確、高效、方便的藥效調查方法，選擇生產中常用的嘧霉胺、唑醚·氟酰胺、氟菌·肟菌酯3種殺菌劑，采用葉片病斑分級、整株病斑分級、整株病葉率分級、莖稈發病率、莖稈發病分級5種調查方法，對比不同方法對防治效果評價的影響。5種調查方法各有優缺點，葉片病斑分級法樣本量大，采集數據多，其結果更接近實際;整株病斑分級法相對簡便，可增加植株的取樣量，使樣本更具代表性，但操作中易產生判斷誤差;整株病葉率分級法和莖稈發病率法簡便，但會放大病害的危害程度，高估或低估藥劑防治效果;莖稈發病分級法結合病斑大小、形狀等特征能較準確地評價植株發病情況。采用不同評價方法，3種殺菌劑對浙貝母灰霉病的防治效果表現較一致，唑醚·氟酰胺和氟菌·肟菌酯的防治效果較好，防效分別在75.22%～88.83%、68.87～86.82%之間，而嘧霉胺的防治效果略差（57.86%～77.89%）。

關鍵詞

浙貝母;?灰霉病;?殺菌劑;?藥效調查方法

中圖分類號：

S?435.67

文獻標識碼：?A

DOI：?10.16688/j.zwbh.2022051

Comparison?of?investigation?methods?for?field?control?effect?of?fungicides?to?gray?mold?on?Fritillaria?thunbergii

LIU?Caixiu1，?ZHANG?Nan2，?WU?Changxing1，?NIE?Dongxing2，?XU?Biqi1，?CANG?Tao1*

（1.?Institute?of?Agroproduct?Safety?and?Nutrition，?Zhejiang?Academy?of?Agricultural?Sciences，?Hangzhou?310021，China;

2.?Institute?for?the?Control?of?Agrochemicals，?Ministry?of?Agriculture?and?Rural?Affairs，?Beijing?100125，?China）

Abstract

In?order?to?explore?accurate，?efficient?and?convenient?efficacy?investigation?method?of?fungicides?for?controlling?gray?mold?on?Fritillaria?thunbergii，?three?commonly?used?fungicides，?pyrimethanil，?pyraclostrobin·fluxapyroxad?and?fluopyram·trifloxystrobin?were?selected?to?assess?by?using?five?investigation?methods，?including?leaf?lesion?grading?method，?the?whole?plant?lesion?grading?method，?the?whole?plant?diseased?leaf?rate?method，?stalk?morbidity?method?and?stalk?disease?grading?method.?The?results?showed?that?the?five?investigation?methods?had?their?own?advantages?and?disadvantages.?Result?yielded?by?the?leaf?lesion?grading?method?was?more?accurate?while?large?amount?of?experimental?samples?and?data?were?required.?The?whole?plant?lesion?grading?method?was?relatively?simple，?and?increased?the?sampling?amount，which?made?the?samples?more?representative，?but?judgment?errors?were?easily?produced.?The?diseased?leaf?rate?method?and?the?stalk?morbidity?method?sometimes?enlarged?the?degree?of?disease，?enhanced?or?reduced?the?evaluation?of?control?effect，?although?both?methods?were?convenient?and?objective.?In?comparison，?the?stalk?disease?grading?method?combined?with?the?size?and?shape?of?lesion?could?more?accurately?evaluate?the?whole?plant?disease.?The?control?effects?among?the?three?fungicides?with?five?investigation?methods?were?consistency.?However，?compared?with?pyrimethanil?（control?efficacy?of?57.86%-77.89%），?pyraclostrobin·fluxapyroxad?and?fluopyram·trifloxystrobin?showed?relatively?higher?control?effects?of?75.22%?-88.83%?and?68.87-86.82%，?respectively.

Key?words

Fritillaria?thunbergii;?gray?mold;?fungicide;?investigation?method?of?field?control?effect

浙貝母Fritillaria?thunbergii?Miq.是百合科貝母屬多年生宿根草本植物，以地下鱗莖入藥，具有清熱潤肺、止咳化痰等藥用功效，是著名中藥材“浙八味”之一［1］。浙貝母少有野生，多為人工栽培，浙江是浙貝母的傳統主產區，全省種植面積約0.33萬hm2?［2］。近年來，隨著中藥材產業的不斷發展，浙貝母的種植面積和種植區域也在不斷擴大，目前我國江蘇、江西、安徽、福建、上海、湖南、湖北等地均有種植。

灰霉病是一種由葡萄孢屬Botrytis真菌引起，可危害蔬菜、果樹、花卉等多種植物的重要病害，屬于氣流傳播的低溫高濕型真菌病害［35］。灰霉病是浙貝母生產過程中最主要的病害，嚴重影響浙貝母的產量和質量。病原菌潛育期短，當溫度達15℃，相對濕度85%以上時即可發病，在溫度20～25℃、相對濕度達90%以上時為灰霉病高發期［6］。浙貝母地上部生長發育溫度為4～30℃，開花適溫為22℃左右，此時如遇陰雨天氣極易導致灰霉病大發生，花器、葉片和莖稈等地上部位均可發病，花器極易先于其他組織發病，而葉片的發病癥狀最為明顯。染病花器初期變褐色，似水漬狀，天氣干燥時花器凋謝;葉片發病初期，嫩葉上出現暗綠色小點，不斷擴大成橢圓形或不規則形的綠褐色病斑，病斑邊緣有明顯的墨綠色水漬狀環;莖稈發病初期，初現墨綠色水漬狀病斑，后擴大至莖部一周，導致葉片黃萎枯死［2，6］。

目前，使用殺菌劑防治是控制浙貝母灰霉病的主要措施。根據對浙江省浙貝母化學農藥使用情況的調研，其中約80%的化學農藥是用于防治灰霉病，但目前暫無防治浙貝母灰霉病的農藥產品登記，選擇和使用不恰當的農藥品種可能會對浙貝母的質量安全造成不利影響。為了引導農藥的合理使用，篩選對灰霉病高效低風險的農藥品種是保障浙貝母質量安全的必要因素之一，本文選擇3種殺菌劑開展防治浙貝母灰霉病的田間藥效試驗方法評價研究，比較5種不同方法的優缺點，以期提出合理的田間藥效評價方法，為篩選防治浙貝母灰霉病的高效藥劑提供科學依據和方法參考，對浙貝母產業的發展具有重要意義。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

試驗在浙江省磐安縣新渥街道馬汪塘進行，浙貝母品種為‘浙貝1號，于2019年10月播種，露地栽培，栽培條件一致。土壤質地為砂壤土，有機質含量中等，地勢平坦，排灌方便。

試驗藥劑分別為400?g/L嘧霉胺懸浮劑（SC），拜耳股份公司;42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑（SC），巴斯夫歐洲公司;43%氟菌·肟菌酯懸浮劑（SC），拜耳作物科學（中國）有限公司。

1.2?試驗設計

試驗共設4個處理，分別為400?g/L嘧霉胺懸浮劑360?g/hm2（以有效成分含量計，下同）;42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑190.8?g/hm2;43%氟菌·肟菌酯懸浮劑193.5?g/hm2和清水對照。每處理4次重復，共16個小區，每小區30?m2，隨機區組排列。于2020年3月16日浙貝母灰霉病發生初期進行第1次施藥，3月24日進行第2次施藥，共施藥2次。施藥時，按照常規施藥方式使用浙江濛花噴霧器有限公司生產的MHD20型背負式電動噴霧器（工作壓力0.3～0.4?MPa）對植株均勻噴霧，用水量為675?L/hm2，空白對照處理噴施等量清水。試驗前10?d及試驗期間沒有進行其他病蟲草害的藥劑防治。

試驗于第2次施藥后15?d，分別采用5種方法調查植株葉片或莖稈的發病情況，統計發病率或病情指數，計算防治效果。

1.3?調查方法

1.3.1?葉片病斑分級法

每小區隨機取5點，每點調查5株浙貝母上的所有葉片，以葉為單位，每葉按病斑面積占整片葉面積的百分率進行分級［78］。具體分級指標為：0級，未發病;1級，病斑面積占單葉葉片面積5%以下;3級，病斑面積占單葉葉片面積6%～15%;5級，病斑面積占單葉葉片面積16%～25%;7級，病斑面積占單葉葉片面積26%～50%;9級，病斑面積占單葉葉片面積50%以上。

1.3.2?整株病斑分級法

每小區隨機取5點調查，每點調查10株浙貝母，以株為單位，按每株所有葉片上的病斑總面積占所有葉片總面積的百分率進行分級［9］。分級指標為：0級，未發病;1級，病斑面積占整株葉片面積1%以下;3級，病斑面積占整株葉片面積2%～5%;5級，病斑面積占整株葉片面積6%～15%;7級，病斑面積占整株葉片面積16%～30%;9級，病斑面積占整株葉片面積30%以上。

1.3.3?整株病葉率分級法

每小區隨機取5點調查，每點調查10株浙貝母，以株為單位，每株按病葉數占總葉片數的百分率進行分級［10］。具體分級指標為：0級，未發病;1級，病葉數占總葉片數10%以下;3級，病葉數占總葉片數11%～25%;5級，病葉數占總葉片數26%～50%;7級，病葉數占總葉片數51%～75%;9級，病葉數占總葉片數75%以上。

1.3.4?莖稈發病率法

每小區隨機取5點調查，每點調查20株，統計莖稈發病株數，計算每小區莖稈發病率。

1.3.5?莖稈發病分級法

每小區5點取樣調查，每點調查20株，按每株莖稈發病情況進行分級，記錄病害級別和各級病株數。具體分級方法為：0級，未發病;1級，莖稈初現暗綠色至褐色小病斑;3級，莖稈有典型褐色病斑;5級，莖稈有長型水漬狀病斑，病斑一側葉片尖部變黃、萎蔫;7級，莖稈有病斑繞莖1/2以上，病斑一側葉片變黃、萎蔫;9級，病斑致莖稈折斷或全株枯黃萎蔫。

1.4?數據分析

根據下列公式計算防治效果，采用DPS?18.10數據處理軟件中Duncans新復極差法對各處理間防治效果進行統計分析。

莖稈發病率=莖稈發病株數/調查總株數?×?100%;

病情指數=∑［各級病株數（葉數）×相對級數值］/［調查總株數（葉數）×發病最高級代表值］×100;

防治效果=［對照區病情指數（或莖稈發病率）-處理區病情指數（或莖稈發病率）］/對照區病情指數（或莖稈發病率）×100%。

2?結果與分析

2.1?安全性

試驗期間目測觀察不同施藥處理和清水對照，除灰霉病的癥狀外，未觀察到葉片卷曲、褪綠、矮化、畸形等副作用，說明在試驗劑量下，各處理對浙貝母安全，無不良反應。

2.2?調查方法比較

2.2.1?葉片病斑分級法結果

采用該調查方法，400?g/L嘧霉胺SC、42.4%唑醚·氟酰胺SC、43%氟菌·肟菌酯SC對浙貝母灰霉病的防效分別為57.86%、77.57%、70.55%。方差分析結果，42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑處理的防效與43%氟菌·肟菌酯無顯著差異，但顯著優于400?g/L嘧霉胺懸浮劑處理的防效（表1）。

葉片病斑分級法是殺菌劑防治灰霉病田間藥效試驗較常用的調查評價方法，該方法是以病斑面積作為調查指標，以葉為調查單位，調查一定數量植株時，所獲得的數據量較多，其結果可較真實地反應浙貝母葉片灰霉病的發生情況。但在人工栽培條件下浙貝母普遍密植，每667?m2密度可達30?000～40?000株，每株普遍不少于15片葉，按試驗取樣量一般不少于總樣本量1%的要求，以該方法完成試驗需要耗費大量的時間和人工。

2.2.2?整株病斑分級法結果

采用該調查方法，42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑和43%氟菌·肟菌酯懸浮劑處理對浙貝母灰霉病防治效果分別為88.83%、86.82%;400?g/L嘧霉胺懸浮劑處理的平均防治效果為65.49%，但3個藥劑的不同重復間差異較大，且3個藥劑處理間的防治效果無顯著差異。

整株病斑分級法也是以病斑面積作為調查指標，但其以株為單位，根據每株病斑總面積占整株葉片總面積的百分率進行分級。該方法的優點是在相同的調查時間內，較前一種方法可大幅度提高植株取樣量，使取樣更具有代表性。該方法的不足是在取樣量有所增加的情況下，數據量大幅減少;此外，整株浙貝母葉片較多，發病程度不一，估算整株葉片的病斑面積占整株葉片總面積的百分率時，人為誤差過大，極易影響調查結果的穩定性。本次試驗的3個藥劑對浙貝母灰霉病的平均防治效果雖與前一種方法較接近，但經方差分析結果顯示，3個藥劑防效間差異不顯著，導致較難準確評價最終試驗結果。

2.2.3?整株病葉率分級法結果

采用該調查方法，3種藥劑的防效在77.89%～88.04%之間。42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑的防效為88.04%，顯著優于400?g/L嘧霉胺懸浮劑的防效，略優于43%氟菌·肟菌酯懸浮劑的防治效果，但差異不顯著。

整株病葉率分級法也是以株為單位，統計整株葉片灰霉病發生率并分級。該方法相對簡單、直觀，主觀因素影響小，調查結果可有效反應灰霉病發生的均勻性，而當不同植株的病葉率相同或相近，而發病的嚴重程度不同時，該方法無法準確反映藥劑減輕病害的程度。

2.2.4?莖稈發病率法結果

采用該調查方法，3種藥劑的防治效果分別為61.54%、75.22%、68.87%，防效均較低，且3個處理間的防治效果無顯著差異。

莖稈發病率調查法僅需判斷每株浙貝母莖稈是否發病，具有直觀、簡便、快速等優點，減少了人為誤差。試驗發現灰霉病優先侵染浙貝母的花器和葉片，嚴重時，可逐步通過葉片等侵染莖稈。當田間灰霉病發生較輕時，莖稈一般未受影響或影響較小，此時則不宜采用該方法判斷田間病害情況。而一旦灰霉病侵染莖稈，則很難防治，正如試驗結果所示，各處理的防治效果均不高，且各處理較難表現出差異。同樣，該方法也不能完全反映藥劑的防治效果。

2.2.5?莖稈發病分級法結果

采用該調查方法，3種藥劑的防治效果分別為66.70%、84.17%、80.36%。方差分析結果顯示，42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑處理的防效顯著優于400?g/L嘧霉胺懸浮劑處理的防效，略優于43%氟菌·肟菌酯懸浮劑處理的防治效果，但差異不顯著。

莖稈發病分級法根據莖稈是否發病、病斑大小、形狀等受害情況綜合判斷發病程度，彌補了莖稈發病率法的不足，該方法可較準確判斷灰霉病對浙貝母植株整體的危害程度。莖稈發病分級法僅在莖稈受到侵染時，才能表現出防效差異，是對灰霉病發生嚴重時，葉部調查方法不能判斷植株整體危害程度的一種補充。在灰霉病發生初期或僅葉部發生病害時，則不適宜使用該方法。

3?結論與討論

灰霉病菌雖可侵染浙貝母的花器、葉片和莖稈，本文僅評價了殺菌劑對浙貝母葉片和莖稈上灰霉病的防治效果，主要原因是實際生產中為了促進浙貝母鱗莖膨大，有效減少養分消耗，在開花后普遍采用摘花打頂的方式消除頂端優勢，所以試驗未對花器上的灰霉病發生情況進行調查。此外，已有的相關研究報道［78，1011］中調查對象多為葉部病斑發生情況，而莖稈同樣作為灰霉病的主要發生部位卻鮮少被統計，試驗結合浙貝母灰霉病實際發生情況，創造性地加入對莖稈發病情況的調查分析。

5種調查評價方法各有優缺點。葉片病斑分級法和整株病斑分級法調查指標均為病斑面積，葉片病斑分級法有大樣本量的優勢，其結果能較真實地反映灰霉病發生情況。整株病斑分級法則以株為單位，雖然相對增加了植株取樣量，但該方法較難準確進行病害分級，極易因個人評估差異，影響最終結果。整株病葉率分級法和莖稈發病率法的調查指標均為發病率，兩者的優點是直觀、便捷、客觀，僅需判斷葉片或莖稈是否發病，這兩種方法均體現的是灰霉病發生的均勻程度，不能代表灰霉病對植株的危害程度，可能會高估或低估藥劑的防治效果。莖稈發病分級法結合莖稈發病率、病斑大小、形狀等綜合判斷莖稈病害程度，可較準確地評價灰霉病對植株的危害情況。當灰霉病發生嚴重時，葉部調查已不能準確判斷灰霉病對植株整體的危害情況，該方法是對植株整體危害判斷的一種補充。在葉片發病初期或莖稈未發病時，不適合采用該方法。綜合比較，當浙貝母灰霉病發生較輕時，可采用葉片病斑分級調查法評價藥效，當病害發生較重，已侵染莖稈時，可采用葉片病斑分級法和莖稈發病分級法結合的方式進行評估。

本文采用的5種評價方法所得結果略有差異，但各種方法的防效趨勢相同，42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑均對浙貝母灰霉病有較好的防治效果，400?g/L嘧霉胺懸浮劑的防效略低。各藥劑的防治效果與朱麗燕等［7，11］、呂先真等［8］的相關研究報道接近。本試驗中嘧霉胺的防治效果略差，初步推斷與抗性有關，其作為防治灰霉病的常用藥劑，近年來不斷有病菌抗性報道［1214］，另外兩種藥劑中的氟唑菌酰胺和氟吡菌酰胺均能抑制孢子萌發、菌絲體生長和孢子形成，可有效防治多種作物的真菌性病害［1516］，目前還鮮有病菌抗性報道［17］。為延緩抗性問題的發展，建議輪換使用不同作用機制的殺菌劑進行化學防治，同時限制同類型農藥使用次數。

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（責任編輯：田?喆）