嗜果刀孢菌在野杏葉片致病過程中主要酶的種類及活性分析

劉楚麗 魯海龍 陳虹瑾 孫洪濤 馬榮

摘要：【目的】明確引起野杏穿孔病的嗜果刀孢菌（Wilsonomyces carpophilus）在致病過程中主要酶的種類及活性。【方法】通過3，5-二硝基水楊酸（DNS）法開展了細(xì)胞壁降解酶的種類及其活性的測(cè)定，并分析了野杏葉片受嗜果刀孢菌侵染后抗氧化酶活性的變化。【結(jié)果】首次發(fā)現(xiàn)嗜果刀孢菌在體外不同誘導(dǎo)物培養(yǎng)條件下均可產(chǎn)生木聚糖酶、多聚半乳糖醛酸酶（PG）、聚甲基半乳糖醛酸酶（PMG）等6 種細(xì)胞壁降解酶，且酶活性呈顯著差異。嗜果刀孢菌侵染野杏葉片后產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶中PG和PMG酶活性最高，羧甲基纖維素酶活性最低；過氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）3 種抗氧化酶活性隨嗜果刀孢菌侵染時(shí)間的延長(zhǎng)呈先上升后下降趨勢(shì)。【結(jié)論】首次明確果膠酶在嗜果刀孢菌致病過程中起重要作用，野杏葉片受嗜果刀孢菌危害后體內(nèi)抗氧化酶活性升高。

關(guān)鍵詞：野杏；穿孔病；嗜果刀孢菌；細(xì)胞壁降解酶；抗氧化酶

中圖分類號(hào)：S662.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980（2023）04-0747-10

野杏（Prunus armeniaca）是世界上廣泛栽培杏的起源物種，也是我國(guó)新疆特色果樹的重要種質(zhì)資源，具有極高的科研價(jià)值、生態(tài)價(jià)值及應(yīng)用價(jià)值[1]。近年來，穿孔病的發(fā)生已成為威脅野杏健康生長(zhǎng)的重要影響因子，其中以嗜果刀孢菌（Wilsonomycescarpophilus）引起的穿孔病最為嚴(yán)重。該病原菌具有潛伏侵染的特性，主要危害核果類植物的葉片和果實(shí)，也可危害嫩枝、休眠芽及花萼，嚴(yán)重影響植株生長(zhǎng)和果品質(zhì)量[2-4]。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于嗜果刀孢菌的研究多集中在病原菌的種類和防治方面，少數(shù)學(xué)者研究了該菌的流行病學(xué)、真菌寄主范圍、遺傳多樣性及次生代謝產(chǎn)物等[3-11]。關(guān)于嗜果刀孢菌引起的穿孔病致病機(jī)制的研究很少，尚未有嗜果刀孢菌致病過程中產(chǎn)生的酶的種類及活性的相關(guān)研究。

病原菌與寄主的相互作用是一個(gè)十分復(fù)雜的過程，病原菌產(chǎn)生對(duì)寄主正常生理活動(dòng)有影響的代謝產(chǎn)物。酶、毒素和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)是國(guó)內(nèi)外科研工作者研究最多的病原物主要的三大致病因子[12]。研究發(fā)現(xiàn)植物在受到病原物侵染后，膜系統(tǒng)受到傷害，細(xì)胞膜透性增強(qiáng)，過氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）等抗氧化酶會(huì)參與植物的防御，這些指標(biāo)被作為植物抗病性鑒定的重要生理指標(biāo)[13]。此外，宿主細(xì)胞壁是阻止病原真菌侵入的一道屏障。病原真菌入侵時(shí)通過分泌多種細(xì)胞壁降解酶，降解組成宿主細(xì)胞壁的各種多糖物質(zhì)，從而破壞細(xì)胞壁和胞間層，或?qū)е录?xì)胞分離，組織潰散[14]。Adaskaveg[15]證實(shí)了扁桃穿孔病病原菌（W.carpophilus）在侵入寄主的過程中先破壞細(xì)胞壁，在一定程度上加速了病原菌侵入。Chiu 等[16]的研究表明，果膠酶在褐腐菌（Monilinia fructicola）致病過程中發(fā)揮了重要的作用。王鵬程等[17]也證實(shí)了細(xì)胞壁降解酶在棗黑斑病菌（Alternaria sp.）侵入棗果過程中的作用。然而不同的病原菌所分泌的細(xì)胞壁降解酶種類是不同的，并且不同的降解酶在致病過程中發(fā)揮的作用也不同。目前關(guān)于嗜果刀孢菌（W. carpophilus）在危害野杏穿孔病的過程中產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶的種類及其活性變化等研究未見報(bào)道，以及嗜果刀孢菌侵染過程中寄主體內(nèi)抗氧化酶的生理指標(biāo)是如何變化的尚不清楚。

筆者在本研究中通過嗜果刀孢菌活體外誘導(dǎo)培養(yǎng)和接種野杏葉片后，采用3，5- 二硝基水楊酸（DNS）法和考馬斯亮藍(lán)（Bradford）法測(cè)定嗜果刀孢菌在野杏葉片內(nèi)外產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶活性，分析比較其變化趨勢(shì)。研究結(jié)果為深入了解其致病機(jī)制提供理論依據(jù)及對(duì)開展穿孔病的預(yù)防和控制等工作具有重要意義。

1 材料和方法

1.1 材料

供試菌株：嗜果刀孢菌菌株XJAU-Y046-7m2 源自天山野果林野杏葉片，種類鑒定由前期研究完成[18]。供試寄主：栽植于新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)地的2～3 a（年）的野杏。

1.2 方法

1.2.1 嗜果刀孢菌體外細(xì)胞壁降解酶的提取 以Czaper 液體培養(yǎng)基（KNO3 2.0 g，KCl 0.5 g，F(xiàn)eSO40.01 g，K2HPO4 1.0 g，MgSO4 ·7 H2O 0.5 g）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加10 g 不同誘導(dǎo)物至錐形瓶中，主要有蔗糖、果膠、微晶纖維素、羧甲基纖維素（CMC）、濾紙粉、脫脂棉屑、野杏葉片，最后用蒸餾水定容至1 L。通過磷酸將培養(yǎng)基的pH 調(diào)至5.0，于121 ℃高溫滅菌20 min。

將PDA平板上純化培養(yǎng)10 d 的嗜果刀孢菌，用直徑0.5 cm 打孔器選取菌落生長(zhǎng)一致的菌餅，選取5 個(gè)菌餅置于盛有100 mL上述培養(yǎng)基的250 mL的三角瓶?jī)?nèi)，25 ℃下振蕩培養(yǎng)7 d 后過濾去除菌絲，4 ℃ 10 000 r·min-1 離心30 min，棄去沉淀，留上清液（粗酶液）備用[17，19]。

1.2.2 嗜果刀孢菌產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶的活性測(cè)定 參考Douaiher 等[20]和Siah 等[21]的研究方法測(cè)定羧甲基纖維素酶（Cx）、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶、聚甲基半乳糖醛酸酶（PMG）、多聚半乳糖醛酸酶（PG）的活性。利用DNS比色法，在分光光度計(jì)540 nm處測(cè)定反應(yīng)混合物吸光值，根據(jù)酶反應(yīng)所釋放的還原糖含量計(jì)算上述酶活性。酶活性單位為50 ℃下每分鐘每毫升酶液（每毫克蛋白）催化底物產(chǎn)生1 μmol還原糖所需酶量，根據(jù)D-半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算生成的還原糖。

果膠甲基反式消除酶（PMTE）的活性測(cè)定：在232 nm處測(cè)定反應(yīng)混合物吸光值，30 ℃下每分鐘每毫升酶液催化底物釋放1 μmol 不飽和醛酸為一個(gè)酶活單位（U·mL-1）。酶蛋白濃度測(cè)定按照Bradford的方法，用考馬斯亮藍(lán)G-250 顯色，在595 nm 比色測(cè)定，用牛血清做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 嗜果刀孢菌產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶對(duì)野杏葉片的降解作用 采用離體針刺法，將1.2.2 中得到的經(jīng)7 種誘導(dǎo)物誘導(dǎo)的酶液各2 mL，分別滴加在無菌的棉球上，使棉球完全潤(rùn)濕。取野杏葉片，用滅菌后的3 號(hào)昆蟲針在葉片的左右兩側(cè)對(duì)稱針刺大小一致的傷口，右邊接種以酶液潤(rùn)濕的棉花，左邊以煮沸滅活的酶液為對(duì)照處理，每個(gè)處理3 次重復(fù)。25 ℃左右光照條件下培養(yǎng)，7 d 后觀察葉片變化情況。

1.2.4 嗜果刀孢菌在野杏葉片內(nèi)產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶的提取 將PDA 平板上純化培養(yǎng)10 d 的嗜果刀孢菌，用直徑0.5 cm打孔器選取菌落生長(zhǎng)一致的菌餅，接種至健康的野杏葉片上，以接種空白培養(yǎng)基作為對(duì)照，于接種后2、4、6、8、10、12、14、16 d 分別取樣。稱取葉片1 g，放入研缽中，冰浴研磨，加入5 mL1 mol ·L- 1 NaCl 提取液（20 mmol ·L- 1 Tris-HCl 緩沖液，pH 值7.4），4 ℃、5000 r · min-1下離心15 min，取上清液（粗酶液）備用，4 ℃保存。

1.2.5 野杏葉片中抗氧化酶的提取及活性測(cè)定 葉片的接種方法同1.2.4，于接種后1、3、5、10、15 d分別取樣。稱取1 g 野杏葉片，剪碎放入研缽中，加適量磷酸緩沖液，冰浴研磨成勻漿，4 ℃，12 000 r ·min-1，冷凍離心30 min，取上清液為提取粗酶液。POD活性測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法[22]、SOD活性測(cè)定采用四唑氮藍(lán)還原法[23]、CAT活性測(cè)定參照高俊鳳[24]的方法，酶活性根據(jù)公式計(jì)算，每個(gè)處理3 次重復(fù)。酶活性= ▲OD ×V0.01×Vt ×w ×t。

式中：0.01為酶活性單位；V是提取酶液的體積；Vt 為測(cè)定時(shí)酶液用量；w表示用于提取酶的葉片質(zhì)量；t 為▲OD 變化所用時(shí)間；酶活性單位為U/ （鮮質(zhì)量·時(shí)間）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

將測(cè)定的全部數(shù)據(jù)采用Excel 2010 進(jìn)行處理和分析，計(jì)算3 次重復(fù)的平均值，利用IBM SPSS Statistics22.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析，采用Duncan檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較及差異顯著性分析，使用Origin2018 64Bit軟件進(jìn)行圖表制作。

2 結(jié)果與分析

2.1 嗜果刀孢菌在不同外源誘導(dǎo)物下產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶的種類

嗜果刀孢菌在7 種不同外源誘導(dǎo)物培養(yǎng)基上均能產(chǎn)生羧甲基纖維素酶（Cx）、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶、聚甲基半乳糖醛酸酶（PMG）、多聚半乳糖醛酸酶（PG）、果膠甲基反式消除酶（PMTE），且酶活性呈現(xiàn)顯著性差異（表1）。6 種酶中PG 酶活性最高，其次為PMG、木聚糖酶、Cx、β-葡萄糖苷酶，而PMTE酶活性最低，其中PG、PMG、PMTE 屬于果膠酶，木聚糖酶、Cx、β-葡萄糖苷酶為纖維素酶。嗜果刀孢菌在分別以蔗糖、果膠、羧甲基纖維、微晶纖維素、濾紙粉、脫脂棉屑、野杏葉片為誘導(dǎo)物的培養(yǎng)基中，產(chǎn)生的PG酶活性依次為：（1397.175±34.450）、（1 585.614 ± 0.779）、（563.215 ± 9.290（552.313±20.763）、（519.350 ± 24.951）、（561.917 ± 8.366）、（600.072±5.850）U·mL-1；產(chǎn)生的PMG酶活性依次為（1 061.566±15.658）、（426.168±1.189）（128.715±4.69（125.081±1.579）、（121.188±2.125）、（140.395±0）、（165.053±2.993）U·mL-1；產(chǎn)生的PMTE酶活性依次為（13.127±5.636）、（5.211±1.745）、（8.510±2.285）、（21.703 ± 8.025）、（16.426 ± 4.120）、（2.573 ± 1.143）、（21.703±1.745）U·mL-1。PG、PMG、分別在果膠、蔗糖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中酶活性最高，果膠、蔗糖為PG、PMG的最佳誘導(dǎo)物。

2.2 嗜果刀孢菌體外誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶的降解作用

將添加不同誘導(dǎo)物蔗糖、果膠、微晶纖維素、羧甲基纖維素（CMC）、濾紙粉、脫脂棉屑、野杏葉片誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶液分別接種于野杏葉片后呈現(xiàn)不同程度的降解，對(duì)照葉片無癥狀。不同誘導(dǎo)物誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶液接種至葉片2 d 后接種點(diǎn)出現(xiàn)黃褐色斑點(diǎn)，7 d 后出現(xiàn)黑褐色病斑（圖1）。由病斑直徑顯著性分析可知（表2），以野杏葉片誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶液降解野杏葉片的能力最強(qiáng)，發(fā)病病斑最大，其次是以蔗糖、果膠誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶液，而以微晶纖維素、羧甲基纖維素（CMC）、濾紙粉、脫脂棉誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶液作用于葉片后呈現(xiàn)的病斑較小，降解能力弱。

2.3 嗜果刀孢菌侵染野杏葉片后細(xì)胞壁降解酶的活性變化

2.3.1 纖維素酶活性變化 野杏葉片接種嗜果刀孢菌2 d 后出現(xiàn)黃褐色小圓斑，隨后病斑不斷擴(kuò)展。野杏葉片接種病菌后Cx 酶活性在2～4 d 呈急劇上升、4～8 d 波動(dòng)上升、8～16 d 急劇下降的趨勢(shì)，酶活性在接種后的第4 天和第8 天出現(xiàn)峰值（49.031、51.626 U·mL-1），依次為對(duì)照組的1.313 倍和2.096 倍，酶活性在接種第14 天時(shí)急劇下降至40.465 U·mL-1。對(duì)照組Cx 酶活性呈現(xiàn)先上升再逐漸下降最后緩慢上升，且處理組Cx酶活性始終高于對(duì)照組酶活性（圖2-A）。

受嗜果刀孢菌侵染后野杏葉片內(nèi)的β-葡萄糖苷酶活性在2～4 d 呈急劇升高、4～12 d 波動(dòng)下降、12～16 d 緩慢上升的趨勢(shì)，接種第4 天酶活性達(dá)55.519 U·mL-1為最高峰，為對(duì)照組的1.862 倍，隨后在接種第12 天酶活性急劇下降至33.717 U·mL-1。對(duì)照組β-葡萄糖苷酶活性隨接種時(shí)間的增加呈緩慢波動(dòng)上升的趨勢(shì)（圖2-B）。

木聚糖酶活性變化為2～8 d 呈急劇升高、8～12 d后急劇下降、14～16 d波動(dòng)下降的趨勢(shì)，接種第8天達(dá)到高峰，酶活性為116.516 U·mL-1，為對(duì)照組的2.014倍，在接種第12天時(shí)酶活性急劇下降至88.743 U·mL-1，12 d 后變化較平緩。對(duì)照組木聚糖酶活性呈先上升隨后緩慢下降的趨勢(shì)，且變化趨勢(shì)沒有處理組明顯（圖2-C）。

2.3.2 果膠酶活性變化 PG 酶活性在接種2～6 d短時(shí)間內(nèi)急劇上升，隨后在6～8 d 急劇下降，8～16 d 變化逐漸穩(wěn)定，接種6 d 時(shí)達(dá)到高峰，酶活性為1 784.435 U·mL-1，為對(duì)照組的2.309 倍，隨后在接種第8 天時(shí)酶活性急劇下降至632.776 U·mL-1，隨后酶活性變化逐漸穩(wěn)定。對(duì)照組PG 酶活性在接種后變化趨勢(shì)平緩，PG 酶活性明顯低于處理組（圖3-A）。

PMG酶活性在接種病菌后2～6 d 急劇上升，6～8 d 急劇下降，8～16 d 逐漸平穩(wěn)，接種第6 天時(shí)達(dá)到高峰，酶活性為530.511 U·mL-1，為對(duì)照組的1.981 倍，在接種第8 天時(shí)酶活性急劇下降至216.186 U·mL-1，隨后酶活性變化穩(wěn)定。對(duì)照組PMG酶活性在接種后有緩慢上升的趨勢(shì)，但其變化明顯小于處理組（圖3-B）。

PMTE酶活性在接種病菌后2～8 d 急劇升高，8～16 d急劇下降。接種第8天時(shí)酶活性達(dá)130.549 U·mL-1為最高峰，為對(duì)照組的3.003 倍，隨后酶活性急劇下降，16 d 下降至19.724 U·mL-1 。對(duì)照組PMTE酶活性在接種后呈緩慢上升的趨勢(shì)，隨后逐漸下降，其PMTE酶活性明顯低于處理組（圖3-C）。

2.4 嗜果刀孢菌侵染野杏后葉片內(nèi)抗氧化酶的活性變化

野杏葉片受嗜果刀孢菌侵染后，POD活性隨著侵染時(shí)間的增加呈上升趨勢(shì)，在接種第5天時(shí)達(dá)到高峰，酶活性為323.889 U · mg- 1 · min- 1，為對(duì)照組的5.949 倍。對(duì)照組的POD活性隨著時(shí)間的增加呈下降趨勢(shì)（圖4-A）。CAT活性動(dòng)態(tài)變化呈1～5 d急劇上升、5～15 d 波動(dòng)下降的趨勢(shì)，接種第5 天后CAT活性達(dá)到高峰，為81.111 U·mg-1 ·min-1，為對(duì)照組的1.497倍，接種15 d后酶活性為72.778 U·mg-1·min-1。對(duì)照組的CAT 活性隨著時(shí)間的增加呈緩慢上升趨勢(shì)，但其酶活性變化明顯小于處理組（圖4-B）。SOD活性動(dòng)態(tài)變化為1～3 d 呈緩慢下降、5～10 d 急劇上升、10～15 d 緩慢下降的趨勢(shì)，接種第10 天時(shí)酶活性達(dá)最高峰，為228.675 U·mg-1 ·min-1，為對(duì)照組的1.85 倍。對(duì)照組的SOD活性隨病菌危害時(shí)間的增加呈下降趨勢(shì)（圖4-C）。

3 討論

國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞壁降解酶是病原菌致病過程中產(chǎn)生的關(guān)鍵酶。目前尚無嗜果刀孢菌致病過程中產(chǎn)生的酶的種類和活性的研究，筆者在本研究中初步明確嗜果刀孢菌產(chǎn)生的纖維素酶和果膠酶是引起穿孔病發(fā)生的重要致病因子。李寶聚等[19] 發(fā)現(xiàn)黃瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）在不同底物改良的Czaper 液體培養(yǎng)基中和罹病黃瓜組織中均能產(chǎn)生羧甲基纖維素酶（Cx）及果膠甲基半乳糖醛酸酶（PMG）。陳曉林等[25]的研究得出蘋果樹腐爛病菌（Valsa ceratosperma）在培養(yǎng)基誘導(dǎo)和病組織侵染中均能產(chǎn)生β-葡萄糖苷酶、Cx、PG、PMG 和木聚糖酶，并且木聚糖酶活性高于其他種類。李沅澤等[26]測(cè)得蘋果輪紋病菌（Botryosphaeria doyhide）在不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基上均可產(chǎn)生PG、PMG、內(nèi)切-4-1，4-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶和濾紙酶（FPA），但是在發(fā)病蘋果枝條中未檢測(cè)到上述細(xì)胞壁降解酶。張大智等[27]測(cè)得杧果細(xì)菌性角斑病菌（Xanthomonascampestris pv. mangiferaeindicae）在羧甲基纖維素鈉和柑橘果膠誘導(dǎo)培養(yǎng)基和感病杧果葉片中均可分泌Cx、β-glucosidase、PG、PMG、PMTE和PGTE 等細(xì)胞壁降解酶，且Cx 和PMG 的活性高于PMTE 和PGTE。金勤等[28]研究得出膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosorioide）在體外產(chǎn)生的PMG 活性遠(yuǎn)高于Cx 和漆酶。研究測(cè)得嗜果刀孢菌在寄主體內(nèi)外均可產(chǎn)生Cx、木聚糖酶、PG、PMG、β-葡萄糖苷酶和PMTE 等6 種細(xì)胞壁降解酶，在寄主體內(nèi)外酶活性最高的均為果膠酶中的PMG 和PG，纖維素酶活性最低，表明果膠酶在嗜果刀孢菌致病過程中起到了較為關(guān)鍵的作用。前人的研究表明不同種類的病菌分泌的細(xì)胞壁降解酶是不同的，在致病過程中起關(guān)鍵作用的降解酶也不同。通過將嗜果刀孢菌接種到野杏葉片上發(fā)現(xiàn)，在接種第4 天時(shí)PG 和PMG 的活性達(dá)到高峰，顯著高于其他5 種細(xì)胞壁降解酶活性，木聚糖酶和PMTE 的活性在接種后8 d 達(dá)到高峰。表明果膠酶中的PMG 和PG 在嗜果刀孢菌致病過程中分泌最早且果膠酶比纖維素酶對(duì)野杏葉片致病作用明顯。筆者研究發(fā)現(xiàn)野杏葉片接種病菌后細(xì)胞壁降解酶均表現(xiàn)出起伏變化，是否為野杏葉片的免疫對(duì)抗作用有待進(jìn)一步研究。

在植物與病原物長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化過程中，植物形成了一系列復(fù)雜的防御酶體系抵御病原物的入侵[29]。植物體內(nèi)的POD、CAT、SOD等是防御酶系統(tǒng)中的關(guān)鍵保護(hù)酶，可清除植物細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的O2- .和H2O2 等活性氧物質(zhì)，以此抵御病原菌入侵的危害[30]。金勤等[28]的研究得出油茶受到炭疽病菌的侵染后，植株體內(nèi)的POD、PPO 等防御酶的活性顯著升高。韓彥卿等[31]的研究證實(shí)白發(fā)病菌（Sclerosporagraminicola）侵染抗病品種后CAT、POD、SOD酶活性升高，且遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于感病品種，相反在感病品種中這幾種酶活性顯著下降，表明POD等防御酶在抵御病原菌和保護(hù)植物細(xì)胞免受傷害過程中發(fā)揮重要抗病作用。筆者研究發(fā)現(xiàn)野杏葉片接種嗜果刀孢菌后，POD、CAT、SOD 活性均有所升高，野杏葉片的POD等抗氧化酶活性升高，表明野杏葉片在受到嗜果刀孢菌侵染后，會(huì)通過調(diào)節(jié)自身的抗氧化酶系統(tǒng)減輕植物體內(nèi)活性氧產(chǎn)生的危害。

嗜果刀孢菌可危害杏（P. armeniaca）、扁桃（Amygdalus communis）、稠李（Padus avium）、西洋梨（Pyrus communis）、蘋果（Malus domestica）和冬青櫟（Quercus ilex）等多種寄主植物[32]，其在不同寄主上產(chǎn)生的酶類及活性變化是否存在差異，以及嗜果刀孢菌在致病過程中是否會(huì)產(chǎn)生其他種細(xì)胞壁降解酶如漆酶和PGTE 等，還需進(jìn)一步研究。植物病原菌侵入寄主是一個(gè)復(fù)雜的過程，除了能向外分泌細(xì)胞壁降解酶外，往往還可以產(chǎn)生毒素和激素等致病因子。由于病原菌致病過程中的機(jī)制是非常復(fù)雜的，關(guān)鍵致病因子與不同致病因子間如何協(xié)調(diào)作用等，有待深入研究。

4 結(jié)論

筆者在本研究中首次發(fā)現(xiàn)嗜果刀孢菌在野杏葉片內(nèi)外均可產(chǎn)生多聚半乳糖醛酸酶、羧甲基纖維素酶、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶、聚甲基半乳糖醛酸酶和果膠甲基反式消除酶等6 種細(xì)胞壁降解酶，在野杏葉片內(nèi)外酶活性最高的均為果膠酶中的PMG和PG，纖維素酶活性最低。嗜果刀孢菌細(xì)胞壁降解酶在野杏葉片致病過程中的動(dòng)態(tài)變化表明果膠酶中的PMG和PG在嗜果刀孢菌致病過程中分泌最早，且果膠酶比纖維素酶對(duì)野杏葉片致病作用明顯。野杏葉片受嗜果刀孢菌危害后，POD、CAT、SOD等抗氧化酶活性升高。

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