宮頸細胞HPV DNA檢測與hTERC、HER-2、c-myc基因檢測對CINⅠ自然轉歸的預測效能

齊麗敏，張學玲，孫波，公春蘭，馮曄

(1滄州醫學高等專科學校，河北滄州061001；2滄州市人民醫院)

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宮頸細胞HPV DNA檢測與hTERC、HER-2、c-myc基因檢測對CINⅠ自然轉歸的預測效能

齊麗敏1，張學玲2，孫波2，公春蘭1，馮曄1

(1滄州醫學高等專科學校，河北滄州061001；2滄州市人民醫院)

摘要：目的比較宮頸細胞HPV DNA檢測與人端粒酶基因(hTERC)、人類表皮生長因子受體2(HER-2)、c-myc基因檢測對宮頸上皮內瘤樣病變Ⅰ級(CINⅠ)自然轉歸的預測效能。方法 初診為CINⅠ的患者43例，采用PCR檢測宮頸細胞HPV DNA，熒光原位雜交技術(FISH)檢測hTERC、HER-2和c-myc基因，分別于就診后6、12、18、24個月對43例患者進行定期隨訪。隨訪12、24個月時再次行高危型HPV檢測。隨訪結束對患者進行陰道鏡下病理活檢。分析并比較HPV DNA、hTERC、HER-2、c-myc基因檢測結果對CINⅠ自然轉歸的預測效能。結果43例患者失訪3例，壽命表法得出平均隨訪41.3例，隨訪24個月后，病變自然消退31例(75.1%)、病變持續7例(16.9%)、進展2例(4.8%)。初次就診HPV DNA檢測陽性者與陰性者的病變進展率(持續/進展)差異無統計學意義(P>0.05)；隨訪12、24個月時HPV持續陽性者病變進展率高于陰性者(HPV轉陰者+持續陰性者)，HPV DNA持續陽性者病變持續/進展率高于陰性者(P<0.05，RR=3.75，95%CI：1.245~11.299)。初診hTERC、HER-2、c-myc基因陽性者病變持續/進展率均高于陰性者(P均<0.05，RR分別為4.735、4.306、4.667，RR的95%CI分別為1.121~20.007、1.454~12.746、1.392~15.645)。結論 CINⅠ患者初診時宮頸細胞HPV DNA檢測結果與病變進展無關，持續監測可提示病變進展情況；初診時hTERC、HER-2、c-myc基因檢測陽性者宮頸病變有較大進展可能。

關鍵詞：人乳頭瘤病毒；人端粒酶基因；人類表皮生長因子受體2；c-myc；宮頸上皮內瘤變；宮頸癌前病變；宮頸脫落細胞學檢測

目前研究[1]認為，宮頸上皮內瘤變Ⅰ級(CINⅠ)的轉歸多數傾向于逆轉，只有小部分會進展為更高級別的病變。美國陰道鏡與宮頸病理學會(ASCCP)共同制定的宮頸癌前病變處理指南建議CINⅠ可以隨訪觀察為主。宮頸癌前病變和早期宮頸癌的篩查及尋找預測CINⅠ轉歸的可靠指標是宮頸癌研究領域的熱點。2013年9月~2015年9月，本研究比較了宮頸細胞HPV DNA檢測與人端粒酶基因(hTERC)、人類表皮生長因子受體2(HER-2)、c-myc基因檢測對CINⅠ自然轉歸的預測效能，為CINⅠ的處理提供參考。

1資料與方法

1.1臨床資料CINⅠ患者43例，年齡27~55歲, 均為已婚或有性生活史婦女。納入標準：①病理診斷為單純CINⅠ，不合并局部病灶CINⅡ及以上；②既往無宮頸癌和CIN病史；③既往無陰道鏡活檢史及宮頸物理治療或手術史；④非妊娠期婦女；⑤無自身免疫性疾病、肝腎慢性疾病及其他慢性疾病；⑥同意進行隨訪觀察，并簽署知情同意書。

1.2宮頸細胞中HPV DNA、hTERC、HER-2、c-myc基因檢測使用專用宮頸脫落細胞采集器在宮頸外口順時針旋轉3~5圈，將刷子置入3 mL宮頸細胞保存液中，放入4 ℃冰箱保存。檢測23種HPV DNA，包括18種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83)和5種低危型(HPV6、11、42、43、81)。采用熒光原位雜交法(FISH)檢測宮頸細胞中的hTERC、HER-2、c-myc基因。擴增異常細胞判斷標準：單個間期細胞核中綠色信號≥2個、紅色信號>2個表示hTERC、HER-2基因有擴增；單個間期細胞核中紅色信號>2個表示c-myc基因有擴增。

1.3隨訪方法分別于就診后6、12、18、24個月對43例患者進行隨訪。隨訪12、24個月時再次行高危型HPV檢測。隨訪結束對患者進行陰道鏡下病理活檢。將每次隨訪檢查結果錄入個人隨訪檔案。對于隨訪中途行宮頸物理治療或手術的患者，自治療之日起將其剔除隨訪名單。

1.4統計學方法采用SPSS18.0軟件進行統計處理。計數資料比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1CINⅠ患者隨訪結果43例患者隨訪12個月時失訪1例，18個月時失訪2例，至隨訪結束時共失訪3例，失訪率為6.98%。隨訪中無行宮頸物理治療或手術的患者。壽命表法得出隨訪24個月獲得隨訪41.3例、病變自然消退率為75.1%(31/41.3)、病變持續率16.9%(7/41.3)、進展率4.8%(2/41.3，全部進展為CINⅡ)。

2.2宮頸細胞HPV DNA檢測結果與CINⅠ自然轉歸的關系43例CINⅠ患者初診時測宮頸細胞HPV DNA陽性29例(67.4%)，隨訪中HPV DNA陽性者失訪1例，HPV DNA陰性者失訪2例；隨訪24個月時初診檢測HPV DNA陽性者病變持續/進展8例、消退20例，HPV DNA陰性者病變持續/進展1例、消退11例，兩者病變進展率(持續/進展)差異無統計學意義(P>0.05)。隨訪12、24個月時再次行HPV DNA檢測，HPV DNA持續陽性者病變持續/進展5例、消退5例，HPV DNA轉陰者分別為3、15例，HPV DNA持續陰性者分別為1、11例，HPV DNA持續陽性者病變進展率高于陰性者(HPV轉陰者+持續陰性者)，HPV DNA持續陽性者病變持續/進展的風險是陰性者的3.75 倍(P<0.05，RR=3.75，95%CI：1.245~11.299)。

2.3宮頸細胞hTERC、HER-2、c-myc基因檢測結果與CINⅠ自然轉歸的關系初診hTERC、HER-2、c-myc基因陽性者病變持續/進展率均高于陰性者(P均<0.05，RR分別為4.735、4.306、4.667，RR的95%CI分別為1.121~20.007、1.454~12.746、1.392~15.645)。詳見表1。

表1　宮頸細胞hTERC、HER-2、c-myc基因

3討論

從CIN進展至宮頸癌需經歷較長過程，對宮頸病變進行篩查、及早發現癌前病變是防治宮頸癌的關鍵環節，對降低宮頸癌發病率有重要價值[2]。由于CINⅠ病變存在自然消退、持續存在和病變進展不同的轉歸，如果能預測CINⅠ是否會發生進展，臨床處理將更有針對性。目前對CINⅠ自然轉歸的相關研究較多，多數學者認為CINⅠ在不進行臨床干預的情況下自然消退率較高[3~6]。

本研究發現CINⅠ患者初次就診時宮頸細胞HPV DNA檢測結果對病變進展無預測價值，這與大部分婦女感染HPV后多能自行清除病毒有關。而隨訪12、24個月時HPV DNA持續陽性者病變進展率高于陰性者，提示高危型HPV持續感染與CINⅠ的持續/進展相關，這也意味著高危型HPV DNA檢測如需作為宮頸病變的篩查手段，需經過長期隨訪與監測，結果才更為可靠[7,8]，而多次重復檢查勢必會給患者帶來經濟和心理雙重壓力，所以有必要尋找其他可靠的指標和檢測方法。

國外研究發現，高危型HPV感染后，宮頸組織端粒酶激活，而c-myc基因對端粒酶的激活起關鍵作用，參與CIN和宮頸癌的發生[9]。HPV16 E6所編碼的蛋白可誘導細胞增殖和分化，使抑癌基因p53失活，最終導致宮頸癌的發病[10]。HER-2表達可通過HPV16 E6調節，推測HER-2基因轉錄或翻譯后的調控可能在宮頸癌發病中起一定作用。FISH技術具有安全、快速、高靈敏度、無創等特點，不僅能顯示細胞中期分裂相，還能顯示間期細胞核，許多國內外學者[11~14]借助FISH技術檢測相關基因進行宮頸癌篩查，但關于用該技術檢測hTERC、HER-2、c-myc基因預測CINⅠ自然轉歸的報道較少見[15,16]。本研究結果顯示，CINⅠ患者初診時宮頸細胞hTERC、HER-2、c-myc基因陽性表達率分別為42.5%、22.5%和30.0%，高于國外報道，可能與本研究納入患者的年齡、居住環境、生活習慣差異等有關系。我們發現，hTERC、HER-2、c-myc基因陽性者CINⅠ病變進展的風險分別為陰性者的4.74、4.31、4.67倍，而HPV DNA持續陽性者病變進展的風險為HPV DNA陰性者的3.75倍，提示hTERC、HER-2、c-myc基因作為CINⅠ持續/進展的預測指標較重復的HPV DNA檢測效能更佳[8]。至于hTERC、HER-2、c-myc基因檢測中哪項對CINⅠ轉歸預測效能最好，還需擴大樣本長時間深入研究。

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(收稿日期：2015-10-26)

中圖分類號：R737.33

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)07-0042-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.015

基金項目：滄州市科學技術局規劃項目(141302003)。