干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術在結核病臨床診斷中的應用價值分析

丁祥

鹽城市大豐人民醫院檢驗科，江蘇大豐 224000

結核病主要是由結核桿菌感染引起的慢性傳染病，在青年人中較為多見，潛伏期為4～8 周，80%的患者發生于肺部，患者常會出現低熱、乏力、咳嗽等癥狀，對其正常生活帶來極大困擾，威脅身體健康[1]。近年來，該病發病率逐漸呈上升趨勢，控制結核病的流行尤為重要[2]。對于此病，既往臨床主要采用細菌學檢測，但該方法耗時較長，敏感性較低，診斷效能無法滿足臨床需求。結核菌素皮膚過敏試驗為一種免疫學檢測方法，應用較為廣泛，但易受非結核分枝桿菌感染、卡介苗接種的影響，假陽率較高。而干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術（enzyme-linked immunosorbent assay for interferon release in vitro, ELIIGRA）為結核分枝復合群間接的免疫學篩查技術，操作簡單、設備儀器要求低、檢測周期短，應用價值高[3]。但目前，臨床關于ELIIGRA 對結核病的臨床診斷價值鮮見報道。基于此，本文選擇2020年1 月—2022年11 月鹽城市大豐人民醫院收治的118 例疑似結核病患者，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院就診的疑似結核病患者118例，其中男82例、女36例；年齡12～86歲，平均（49.00±10.21）歲；體質指數14～24 kg/m2，平均（19.00±1.12）kg/m2。本文研究已經通過本院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：可耐受本研究相關檢查；認知功能、溝通能力良好；知情且簽署協議書。

排除標準：有惡性腫瘤疾病者；肝、腎功能障礙者；合并慢性阻塞性肺病、支氣管哮喘、支氣管擴張等疾病者；合并免疫系統、感染性疾病者；近期使用糖皮質激素、免疫抑制劑等者；具有神經系統疾病或病史、無法正常溝通交流者；臨床資料不完整者；依從性差者。

1.3 方法

1.3.1 結核菌素皮膚過敏試驗方法 應用皮內注射法，先吸0.1 mL 純蛋白衍生物（pure protein derivative, PPD）原液備用，再吸0.2 mL PPD 原液加入0.9%氯化鈉注射液稀釋至0.4 mL，以備使用。PPD用量：第1 次試驗液：每0.1 mL 中含有0.0001 mg。對注射部位進行常規消毒，于上肢前臂進行皮內注射0.1 mL 標準PPD，2～3 d 后，觀察并記錄實驗結果。觀察局部是否有硬結，并記錄硬結直徑，取平均值作為最終值，直徑平均≥5 mm 為陽性，＜5 mm 為陰性。

1.3.2 ELIIGRA 試驗方法 應用酶聯免疫斑點（enzyme-linked immunospot, ELISPOT）試劑（深圳市達科為生物技術公司），采集受試對象10 mL 靜脈血，應用乙二胺四乙酸進行抗凝處理，2 h 內將其血液標本分離成為單個核細胞（peripheralbloodmononuclearcell, PBMC），洗滌2 次，于ELISPOT 培養板中預包被抗-IFN-γ 抗體，于板中各種加100 μL 的細胞懸液，每孔細胞數約為2.0×105個。在陽性對照孔內，每孔加入濃度為5 μg/mL 的植物血凝素（phytohemagglutinin, PHA）；禁止在陰性對照孔各孔中添加刺激物。于實驗孔中加入濃度為5 μg/mL 的PoolB、ESAT-6、PoolA 等特異性抗原刺激物。之后將培養板放在溫度為37℃、含有5%CO2的培養箱中，持續培養16～24 h。2 h 后洗板，將生物素化的抗IFN-γ 加入并溫育1 h。應用親和素標記二抗，再持續孵育1 h，加底物液，顯色。顯色洗板后應用自來水終止反應，應用ELISPOT 測定儀記錄斑點數。檢測結果（每孔斑點數排除陰性孔中斑點數）斑點數量≥30，為陽性；若PoolB、ESAT-6、PoolA 中≥1 種抗原結果為陽性，則結果為陽性；若3 種抗原測試結果均為陰性，則結果為陰性。

1.4 觀察指標

以痰培養結果為金標準，對比分析兩種方法的診斷效能（靈敏性、特異性、準確性）。

診斷準確性=（真陽例數+真陰例數）/總例數×100%；診斷靈敏性=真陽/（真陽例數+假陰例數）×100%；診斷特異性=真陰例數/（真陰例數+假陽例數）×100%。

1.5 統計方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件處理數據，計數資料以[n(%)]表示，進行χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢查方法診斷結果

痰培養結果：118 例疑似患者中，陽性107 例、陰性11 例。結核菌素皮膚過敏試驗結果：真陽97例、假陽3 例、真陰8 例、假陰10 例；ELIIGRA 試驗結果：真陽105 例、假陽1 例、真陰10 例、假陰2 例。見表1。

表1 兩種檢查方法診斷結果

2.2 兩種檢查方法診斷效能對比

ELIIGRA 試驗的診斷準確性、敏感性均高于結核菌素皮膚過敏試驗，差異有統計學意義（P＜0.001）；兩種檢查方式診斷特異性對比，差異無統計學意義（P=0.092）。見表2。

表2 兩種檢查方法診斷效能對比

3 討論

我國為結核病發病率較高的國家之一，患者總數居世界第二，并且感染者的數量不斷增加，嚴重降低了我國國民的生活質量，威脅患者身體健康[4-6]。目前，在結核病的防治中，最大的難題仍為結核病的診斷問題，臨床上常采用臨床癥狀、影像學、病理學等多種手段聯合診斷，但多數患者缺乏典型的臨床及影像學表現，易出現漏診、誤診等情況，而病理學檢查中標本取材困難，診斷難度高[7-8]。因此，及時尋求一種更安全、有效、簡便的診斷技術具有必要性。

徐寧等[9]學者報道發現，結核γ-干擾素酶聯免疫法釋放試驗結果與病理結果具有較高的一致性。本研究發現，結核菌素皮膚過敏試驗結果：真陽97 例、假陽3 例、真陰8 例、假陰10 例；ELIIGRA試驗結果：真陽105 例、假陽1 例、真陰10 例、假陰2 例。與結核菌素皮膚過敏試驗相比，ELIIGRA 試驗的診斷準確性、靈敏性更高（P＜0.05）。張青卿等人[10]研究數據顯示，結核γ-干擾素釋放試驗診斷肺結核的符合率為88.76%。本文數據顯示，ELIIGRA 診斷結核病的準確率為97.46%。這與張青卿等學者報道一致。提示ELIIGRA 對肺結核的診斷效能較好。主要是因為，結核菌素試驗為臨床常用的檢測結核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis, MTB）的免疫學方法，但其檢測結果會受到非MTB 感染、卡介苗接種的影響，且我國卡介苗接種率比較高，導致結核菌素試驗檢查的假陽性風險較高，影響診斷效能[11-12]。而ELIIGRA 為一種新的免疫學方法，主要通過體外釋放酶聯免疫技術，對全血中MTB 記憶性T 淋巴細胞產生的γ干擾素濃度進行檢測，該方法主要應用缺失區域1，有2 種基因的重組抗原刺激MTB 感染者特異性T 淋巴細胞產生γ 干擾素，具有較強的特異性，還不會受卡介苗接種、非MTB 的干擾，診斷效能較高[13-14]。且ELIIGRA 操作簡單快捷、對設備及儀器的要求也較低，檢測的周期短，可快速、準確做出診斷[15-16]。但本文還發現，ELIIGRA 診斷也出現了假陽性、假陰性的情況，這可能是因為操作流程中有細菌污染實驗，導致檢測結果不準確。

綜上所述，對于結核病患者采用干擾素體外釋放酶聯免疫檢驗技術的診斷準確性較高，可早期準確診斷出此病，便于及時進行治療，臨床應用價值顯著。