基于HPLC-ECD研究牡荊葉抗氧化的譜-效關系

吳其妹　李影　李志榮　劉明容　馬繼敏　余念念　 陳榮祥　周亞平

摘 要：? 為研究牡荊葉指紋圖譜與抗氧化活性的譜-效關系，該研究首先建立了18批牡荊葉的高效液相色譜-電化學檢測法（HPLC-ECD）指紋圖譜，對不同來源牡荊葉藥材進行聚類分析，鑒定主要酚類化合物且測定其含量，分析牡荊葉的總酚和總黃酮含量，并采用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法、氧自由基吸收能力法及鐵離子還原能力法考察其體外抗氧化活性，通過皮爾遜相關分析、灰度關聯分析及偏最小二乘回歸分析法研究牡荊葉的譜-效關系。結果表明：（1）牡荊葉的指紋圖譜標定21個共有峰，共指認出10個峰，其含量順序為綠原酸>異葒草苷>木犀草苷>異牡荊素>異綠原酸A>異綠原酸C>原兒茶酸>葒草苷>異綠原酸B>新綠原酸；不同產地樣品間相似性較高，相似度結果為0.816～0.983。（2）系統聚類分析顯示，樣品含量對分類有一定影響，不同來源樣品被分為3類，其中南北方樣品存在一定差異。（3）牡荊葉中總酚和總黃酮的含量分別為15.82～61.83 mg·g-1和27.85～157.65 mg·g-1，樣品均具不同程度的抗氧化活性。（4）譜-效關系表明，牡荊葉的抗氧化活性是多種化合物協同作用的結果，峰9（異葒草苷）、峰4和峰5（綠原酸）等化合物對牡荊葉藥材抗氧化活性的貢獻最大。綜上表明，牡荊葉具有較好的抗氧化活性，其中主要的活性指標是異葒草苷和綠原酸。該研究結果可為牡荊葉抗氧化活性成分的篩選及其質量控制提供參考依據。

關鍵詞： 牡荊葉， HPLC， 電化學檢測， 抗氧化， 譜-效關系， 總酚， 總黃酮

中圖分類號：? Q946文獻標識碼：? A文章編號：? 1000-3142（2023）06-1124-11

Spectrum-effect relationship of antioxidant activity in Vitex negundo var. cannabifolia leaves based on HPLC-ECD

WU Qimei1， LI Ying1， LI Zhirong2， LIU Mingrong1， MA Jimin2， YU Niannian2， CHEN Rongxiang2，3， ZHOU Yaping1*

（ 1. School of Pharmacy， Zunyi Medical University， Zunyi 563000， Guizhou， China; 2. School of Basics Medicine， Zunyi Medical University，

Zunyi 563000， Guizhou， China; 3. Zunyi Engineering Technology Research Center of Physical and Chemical Analysis， Zunyi 563000， Guizhou， China ）

Abstract：? In order to study the spectrum-effect relationship between fingerprint and antioxidant activity of the leaves of Vitex negundo var. cannabifolia， the fingerprints of 18 batches of V. negundo var. cannabifolia leaves were established by high performance liquid chromatography-electrochemical detection （HPLC-ECD）， and the cluster analysis of medicinal materials from different sources was performed simultaneously. The main phenolic compounds from V. negundo var. cannabifolia leaves were identified and determined. The contents of total phenolics and total flavonoids in V. negundo var. cannabifolia leaves were analyzed， and the antioxidant activities in vitro were evaluated by the methods of DPPH radical scavenging capacity， ABTS radical scavenging capacity， oxygen radical absorbance capacity and ferric ion reducing ability power. The spectrum-effect relationships of V. negundo var. cannabifolia leaves were analyzed by Pearson correlation analysis， gray relational analysis and partial least square regression analysis. The results were as follows： （1） The fingerprints of V. negundo var. cannabifolia leaves were established with 21 common peaks and a total of 10 peaks were identified. The order of content was? chlorogenic acid > isoorientin > luteoloside > isovitexin > isochlorogenic acid A > isochlorogenic acid C > protocatechuic acid > orientin > isochlorogenic acid B > neochlorogenic acid. The similarity among the samples from different producing areas was high， and the values were ranged from 0.816 to 0.983. （2） The results of the cluster analysis showed that the content of the compounds had a certain influence on the classification and the samples from different sources were divided into three categories， among which the samples from the south and the north were different. （3） The contents of total phenolics and total flavonoids in V. negundo var. cannabifolia leaves were 15.82 to 61.83 mg·g-1 and 27.85 to 157.65 mg·g-1， respectively， and the antioxidant activity of all samples from V. negundo var. cannabifolia leaves existed differences. （4） The spectrum-effect relationship indicated that the antioxidant activity of V. negundo var. cannabifolia leaves was the result of the synergistic effect of many compounds， and compounds such as peak 9 （isoorientin）， peak 4 and peak 5 （chlorogenic acid） made the greatest contribution to the antioxidant activity of V. negundo var. cannabifolia leaves. V. negundo var. cannabifolia has good antioxidant activity， and the main activity indexes are isoorientin and chlorogenic acid. This study can provide a reference basis for the screening and quality control of antioxidant components in V. negundo? var. cannabifolia.

Key words： Vitex negundo var. cannabifolia leaves， HPLC， electrochemical detection， antioxidation， spectrum-effect relationship， total phenolics， total flavonoids

牡荊（Vitex negundo var. cannabifolia）是馬鞭草科牡荊屬植物，分布于中國華東各省及廣西、廣東、河北、貴州、四川等地，其葉具有解表化濕、祛痰平喘等功效（《全國中草藥匯編》編寫組，1996；國家藥典委員會，2020）。牡荊主要成分為酚酸、黃酮、木脂素和萜類等化合物?，F代藥理研究表明，牡荊具有抗氧化、抗炎鎮痛、抑菌、抗腫瘤等生物活性（舒柄垚等，2020）?？寡趸悄登G的主要生物活性之一，向蓉等（2021）研究表明牡荊水提取物和醇提取物均具有一定的抗氧化活性，其中酚酸和黃酮類物質是其主要活性成分。Hu等（2015）研究上證實大部分酚酸類物質具有較強的2， 2′-聯氮-二（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）自由基清除活性。然而，其抗氧化活性藥效物質基礎尚不明確，并且未將指紋圖譜結合生物活性進行質量控制評價研究。

譜-效關系研究是將藥用植物的指紋圖譜與其藥效結果相結合起來，通過建立“譜-效”數學模型來反映中藥的內在品質，其廣泛應用于藥用植物內在質量控制評價研究（王勤等，2017；晏朝操和張建峰，2020）。HPLC具有靈敏度高、分離度和重現性好、高效快速、應用范圍廣等特點，目前已成為色譜指紋圖譜研究的首選方法，而電化學檢測法（electrochemical detection， ECD）通過測量物質的電信號變化，可選擇性地檢測具有氧化還原性質的化合物，如帶有硝基、巰基、酚羥基等基團的有機化合物。因此，可用HPLC-ECD篩查藥用植物的抗氧化活性成分（羅敏等，2020; Zhang et al.， 2021）。目前，譜-效關系研究的分析方法眾多，其中灰度關聯分析法（gray relational analysis， GRA）能夠分析共有峰峰面積的變化與藥效指標的變化趨勢，偏最小二乘回歸分析法（partial least square regression analysis， PLSR）對于系統的信息和噪聲更易于辨別，可以彌補灰度關聯分析法中關聯度均為正值所帶來的分析誤差（劉曉燕等，2020）。因此，常將GRA和PLSR相結合應用于譜-效關系分析研究。

本研究收集18批不同來源的牡荊葉樣品，采用HPLC-ECD和體外抗氧化活性評價方法，通過建立HPLC-ECD指紋圖譜且結合樣品含量測定、系統聚類分析（hierarchical cluster analysis， HCA）和譜-效關系分析，擬探討以下問題：（1）牡荊葉的化學成分及其含量；（2）牡荊葉不同化學成分對抗氧化活性的貢獻。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材與試劑 新鮮牡荊葉樣品采自廣西、廣東和河北，按照2020年《中國藥典》中牡荊葉的鑒定要求，經遵義醫科大學孟令杰博士鑒定為馬鞭草科牡荊屬牡荊（Vitex negundo var. cannabifolia）的葉，其詳細信息見表1。新鮮牡荊葉于40 ℃下烘干后，分別粉碎并過50目篩，放置在4 ℃條件下保存備用。

原兒茶酸、綠原酸、木犀草苷、沒食子酸、奎諾二甲基丙烯酸酯（Trolox）（阿拉丁生化科技股份有限公司，批號分別為K1717091、J1523050、10122401、L1810248、A2010059，純度≥97%）；葒草苷、異葒草苷、新綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C（成都普菲德生物技術有限公司，批號分別為20031202、20052201、19042305、20032601、20032602、20080802，純度≥98%）；異牡荊素 （上海詩丹德標準技術服務有限公司，批號為ST09650120，純度≥ 98%）；蘆?。▏幖瘓F化學試劑有限公司，批號為2016092，純度≥95%）；甲醇、乙腈均為色譜級，均購自北京伊諾凱科技有限公司；其余試劑均為分析純。

1.1.2 儀器 Thermo UltiMate 3000 bio-RS型HPLC儀，檢測器為ECD-3000 RS；Sorvall ST 8R型高速離心機（美國賽默飛世爾科技有限公司）；SpectraMax i3x型多功能酶標儀［美谷分子儀器（上海）有限公司］；ME104E型電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；Purelab Chorus 2型純水超純水系統（英國埃爾格公司）；GZX-9070MBE型電熱鼓風干燥箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）。

1.2 方法

1.2.1 標準品溶液的制備 精密稱取原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、葒草苷、異葒草苷、異牡荊素、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C適量，用甲醇溶解制成2 mg·mL-1的標準品儲備液，于-20 ℃下冷凍保存以備用。

1.2.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取不同批號的牡荊葉樣品，以80%甲醇為溶劑，按1∶30 （g·mL-1）的料液比在25 ℃下超聲提取30 min，于9 000 r·min-1條件下離心5 min，取上清液加80%甲醇按1∶1等體積稀釋混勻，過0.22 μm有機濾膜即制得供試品溶液。

1.2.3 色譜條件 XBridge BEH Shield RP18色譜柱（3.0 mm × 150 mm， 2.5 μm）；流動相乙腈（A）-甲酸銨檸檬酸混合溶液（B）（25 mmol·L-1甲酸銨溶液和25 mmol·L-1檸檬酸溶液以1∶1等體積混勻，用甲酸調pH至2.6）梯度洗脫（0 ～ 9.5 min， 5% → 7.5% A; 9.5 ～ 12.5 min， 7.5% → 12% A; 12.5 ～ 30 min，保持12% A; 30 ～ 40 min， 12% → 19% A; 40 ～ 48 min，保持19% A; 48 ～ 53 min， 19%→ 45% A; 53～55 min， 45%→80% A）；ECD檢測電壓700 mV；流速0.6 mL·min-1；柱溫45 ℃，樣溫12 ℃；進樣量1 μL。

1.2.4 總酚、總黃酮含量測定及體外抗氧化實驗

1.2.4.1 總酚含量測定 參照DDzugan等（2018）的方法并稍作修改，先吸取250 μL供試品稀釋液（加80%甲醇稀釋40倍）和250 μL 0.25 mol·L-1 Folin酚試劑混合靜置3 min后，加入500 μL 15% Na2CO3溶液混勻后暗反應30 min，離心取上清液于酶標儀760 nm處測定吸光度。以沒食子酸溶液為標準，所有樣品測量結果均以沒食子酸當量（mg·g-1）表示。沒食子酸標準品與吸光度值的回歸方程為y=0.014 2x+0.062 5， R2= 0.998 8。

1.2.4.2 總黃酮含量測定 參照He等（2015）的方法并稍作修改，先吸取500 μL供試品稀釋液（加80%甲醇稀釋5倍）、1 000 μL 80%甲醇、250 μL 5% NaNO2 溶液，混勻放置6 min后，再加入250 μL 10% Al（NO3）3溶液，混勻放置6 min后，又加入2 000 μL 4% NaOH溶液，混勻放置15 min后，于酶標儀510 nm處測定吸光度。以蘆丁溶液為標準，所有樣品測量結果均以蘆丁當量（mg·g-1）表示。蘆丁標準品與吸光度值的回歸方程為y=0.000 9x + 0.046 0， R2=0.999 2。

1.2.4.3 鐵離子還原能力（ferric ion reducing antioxidant power， FRAP）測定 參照王金梅等（2017）的方法并稍作修改，分別吸取供試品稀釋液（加入80%的甲醇稀釋60倍），加入80%的甲醇至100 μL后，加入300 μL TPTZ工作液混勻反應，5 min后于酶標儀593 nm處測定吸光度。以Trolox溶液為標準，所有樣品測量結果均以Trolox當量（mg·g-1）表示。Trolox標準品與吸光度值的回歸方程為y=0.019 2x + 0.022 2， R2=0.996 9。

1.2.4.4 DPPH自由基清除實驗 參照Zhang等（2015）的方法并稍作修改，分別吸取80 μL的供試品稀釋液（加入80%的甲醇稀釋20倍），加入80%的甲醇至200 μL后，再加入DPPH自由基母液［DPPH∶80%甲醇=1∶10 （mg·mL-1）］400 μL，搖勻，暗反應10 min后，于酶標儀517 nm處測定吸光度。以80%甲醇為空白組，不同濃度的Trolox溶液為對照組。所有樣品測量結果均以清除率表示，清除率計算公式：

DPPH清除率=（A空白組-A樣品組）/A空白組×100%（1）

1.2.4.5 ABTS 自由基清除實驗 參照Aati等（2018）的方法并稍作修改，分別吸取100 μL的供試品稀釋液（加入80%的甲醇稀釋30倍），加入200 μL的ABTS工作液，混勻暗反應20 min后，于酶標儀734 nm處測定吸光度。以80%甲醇為空白組，不同濃度的Trolox溶液為對照組。所有樣品測量結果均以清除率表示，清除率計算公式：

ABTS清除率=（A空白組-A樣品組）/A空白組×100%（2）

1.2.4.6 氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity， ORAC）測定 在供試品溶液中加入磷酸鹽緩沖溶液稀釋500倍得到供試品稀釋液，實驗步驟參照徐維盛等（2014）的方法，每隔5 min測定一次熒光強度，總時間為3 h。以磷酸鹽緩沖溶液為空白組，不同濃度的Trolox溶液為對照組。所有樣品測量結果均以Trolox（mg·g-1）表示，具體計算公式表示為式（3）和式（4）：

AUC=0.5 ×? ［ 2 × （f0 + f1 + … + fn-1 + fn） - f0 - fn ］ × △t（3）

式中：AUC為熒光衰退曲線下面積；fn為第n個測定點的相對熒光強度；△t為測定熒光強度的時間間隔。

ORAC值=［（AUC樣品組-AUC空白組）/（AUCTrolox-AUC空白組）］ × CTrolox/C樣品組）（4）

Trolox標準品與凈熒光衰退曲線下面積（AUCTrolox-AUC空白組）的回歸方程為y=1.368 0x + 8.301 9， R2=0.994 6。

1.2.5 數據處理與分析 采用Excel 2013軟件進行數據處理和灰度關聯分析；采用SPSS 26軟件進行皮爾遜相關分析和系統聚類分析；采用SIMCA 14.1軟件進行PLSR分析。色譜圖和PLSR結果通過Origin 2021軟件進行繪制。

2 結果與分析

2.1 指紋圖譜方法學考察

2.1.1 精密度試驗 取牡荊葉（批號為S2），按“1.2.2”項下方法制備成供試品溶液，于“1.2.3”項的色譜條件連續進樣6次，21個共有峰保留時間的RSD≤0.45%，峰面積的RSD≤1.31%，這說明試驗方法符合分析檢測要求。

2.1.2 重復性試驗 取牡荊葉（批號為S2），按“1.2.2”項下方法制備成6份供試品溶液，于“1.2.3”項的色譜條件下進樣分析，21個共有峰保留時間的RSD≤1.72%，峰面積的RSD≤4.81%，結果表明試驗建立的方法重復性較好。

2.1.3 穩定性試驗 取牡荊葉（批號為S2）按“1.2.2”項下方法制備成供試品溶液，在“1.2.3”項的色譜條件下分別于0、4、8、12、16、18、24 h進樣分析，21個共有峰保留時間的RSD≤0.58%，峰面積的RSD≤3.94%，結果表明24 h內穩定性較好。

2.2 HPLC-ECD指紋圖譜的建立及共有峰指認

分別取18批牡荊葉，按照“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，同“1.2.3”條件測定并記錄色譜圖和總峰面積，將色譜圖導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012版）》，以S8為參照圖譜，生成牡荊葉HPLC-ECD指紋圖譜（圖1）、混合標準品圖（A）和對照指紋圖譜（B）（圖2）。通過多點校正和Mark峰匹配得到21個共有峰，其中峰1、2、5、8、9、11、12、14、15、17分別為原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、葒草苷、異葒草苷、異牡荊素、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C。計算其與對照指紋圖譜的相似度，相似度結果為0.816～0.983，樣品S1-S18的相似度分別為0.843、0.983、0.967、0.959、0.953、0.916、0.969、0.966、0.968、0.980、0.978、0.953、0.974、0.947、0.964、0.847、0.816、0.950。

2.3 標準曲線和檢測限

分別取“1.2.1”項下的對照品溶液制備成系列質量混合標準品溶液，在“1.2.3”條件下，以對照品質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，以信噪比為3∶1計算分析方法的檢測限（LOD）。結果顯示各化合物在一定的質量濃度范圍下，峰面積有良好的線性相關性（表2），相關系數大于0.999，LOD為2.2～30.4 ng·mL-1。

2.4 加標回收實驗

稱取已知含量的牡荊葉樣品，平行精密稱定6份，加入一定量的對照品混合儲備溶液，于“1.2.3”項下的色譜條件進樣分析。表2結果顯示，10種化合物的回收率為90.13%～99.56%，RSD≤6.41%，該方法的準確度良好。

2.5 含量測定

按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，于“1.2.3”項的色譜條件下，測定不同產地牡荊葉的10個化合物含量，結果見表3。由表3可知，牡荊葉含有豐富的酚酸和黃酮類化合物，不同批次和產地的各成分含量存在較大差異。以各批次含量的平均值計算，含量最高的化合物為綠原酸，其次分別為異葒草苷、木犀草苷、異牡荊素、異綠原酸A、異綠原酸C、原兒茶酸、葒草苷、異綠原酸B、新綠原酸。

2.6 聚類分析

為了研究產地與含量之間的關系，以21個共有峰的相對峰面積為變量，采用HCA分析方法，通過SPSS 26軟件采用平方歐式距離為測量度對18批牡荊葉樣品進行聚類分析（圖3）。圖3結果表明，當歐式距離為4左右時，藥材可分為3類，即測定的10個化合物總含量分別為13.06～31.69、38.01～41.03、78.99 mg·g-1。河北產地藥材為13.06～31.69 mg·g-1，而廣東和廣西的在分類中存在交叉情況。

2.7 總峰面積、總酚含量、總黃酮含量及體外抗氧化實驗結果

18批牡荊葉HPLC-ECD總峰面積、總酚、總黃酮含量及體外抗氧化實驗結果見表4。由表4可知，不同批次牡荊葉的總酚、總黃酮類化合物存在較大差異，其含量分別為15.82～61.83 mg·g-1和27.85～157.65 mg·g-1。牡荊葉具有一定的DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、氧自由基吸收能力及鐵離子還原能力，說明牡荊葉80%甲醇提取物具有一定抗氧化活性。

2.8 譜-效關系分析

2.8.1 皮爾遜相關分析 對牡荊葉HPLC-ECD樣品的總峰面積、總酚含量、 總黃酮含量分別與體外抗氧化活性進行皮爾遜相關分析比較，結果見表5。

由表5可知，牡荊葉中總酚、總黃酮含量分別與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、ORAC氧自由基吸收能力及鐵離子還原能力均呈顯著正相關，相關系數大于0.77。ECD檢測器可選擇性地檢測具有氧化還原性質的化合物，同時，分析結果表明HPLC-ECD樣品中總峰面積與總酚、總黃酮的含量和體外抗氧化活性均呈顯著正相關。

2.8.2 灰度關聯分析 采用均值化法對原始數據進行無量化處理。以不同批次牡荊葉的抗氧化結果作為母序列，以共有峰峰面積作為子序列，分辨系數ρ取0.5，按照文獻（帖曉燕等，2021; Du et al.， 2021）的方法計算共有峰與藥效之間灰度關聯度系數（r）的大小，結果見表6。

由表6可知，牡荊葉中的共有峰與各抗氧化活性的關聯度很高，關聯度均大于0.79，表明牡荊葉的抗氧化活性是多種化合物的協同作用結果。以4種抗氧化活性關聯度的平均值計算，關聯度最高的10個峰依次為峰9（異葒草苷）>峰4>峰2（新綠原酸）>峰5（綠原酸）>峰6>峰11（異牡荊素）>峰20>峰12（木犀草苷）>峰15（異綠原酸A）>峰14（異綠原酸B）。

2.8.3 PLSR分析 PLSR分析是以典型相關分析、主成分分析和多元線性回歸分析方法為基礎的多元統計方法， 能反映共有峰對藥效指標的綜合貢獻程度，相關系數大于0，表明二者之間呈正相關，反之為負相關；在重要投影（VIP）模型中，VIP值>1，表明該成分對模型有顯著影響（劉曉燕等，2020）。本研究以不同批次的牡荊葉HPLC-ECD指紋圖譜中各共有峰的峰面積為自變量（X），以不同批次牡荊葉的抗氧化結果為因變量（Y），采用SIMCA 14.1軟件進行PLSR分析，計算X對應Y的回歸系數和VIP值，結果見圖4。

由圖4可知，峰1（原兒茶酸）和峰16與抗氧化效果呈負相關，其余共有峰在PLSR模型中與各抗氧化活性的回歸系數均呈正相關。共有峰與抗氧活性呈正相關且VIP值大于1的峰有3、4、5（綠原酸）、6、8（葒草苷）、9（異葒草苷）、19、20。

3 討論與結論

本研究建立了18批牡荊葉藥材的HPLC-ECD指紋圖譜，提取出21個共有峰，相似度在0.816以上，說明不同來源的牡荊葉樣品質量較為相近。通過參考文獻（羅婭君等，2011; Huang et al.， 2015）等資料，借助超高效液相色譜串聯質譜儀定性和標準品進行比較，共指認出10個峰，并對其進行定量分析，結果表明牡荊葉主要成分為綠原酸、異葒草苷、木犀草苷和異牡荊素等。通過HCAFRAP表示鐵離子還原能力； DPPH表示1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力； ABTS表示2， 2′-聯氮-二（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）自由基清除能力； ORAC表示氧自由基吸收能力。

分析可知，牡荊葉藥材可能受到采收季節、氣候和新老葉等的影響，樣品分類存在產地交叉情況，而我們所測定化合物的含量差異可能對樣品分類起著相對重要的作用。

對牡荊葉進行體外抗氧化實驗并進行皮爾遜相關分析比較，結果表明牡荊葉具有較強的抗氧化活性，樣品中的總峰面積、總酚、總黃酮和體外抗氧化活性相互之間均呈顯著相關性，這與前人的研究結果（Hu et al.， 2015; Wang et al.， 2022）相符，說明總酚、總黃酮可能是牡荊葉抗氧化活性的主要化合物，HPLC-ECD能夠檢測牡荊葉中的抗氧化活性物質。借助GRA和PLSR分析方法對牡荊葉的共有峰與抗氧化活性進行譜-效關系研究。GRA分析結果表明牡荊葉的抗氧化活性是多種成分協同作用產生的，同時，結合PLSR分析，對牡荊葉抗氧化活性貢獻最大的為峰9（異葒草苷），其次為峰4和峰5（綠原酸）。綠原酸已被報道可能是區分牡荊不同藥用部位的潛在化學標志物，能作為牡荊質量控制的定量指標之一（Hu et al.， 2015），其具有多種功能的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗菌等（王文龍等，2017）。同時，Deepha等（2014）研究表明異葒草苷因含有3′-OH的B環、分子內氫鍵、O-H等結構，在藥物植物中表現出很強的抗氧化活性（Deepha et al.， 2015）。因此，現有研究可反向說明該譜-效關系結果的準確性。

綜上所述，本研究首次基于HPLC-ECD建立牡荊葉藥材的指紋圖譜，本方法篩選得到的抗氧化活性化合物主要為綠原酸類化合物和黃酮類化合物，化合物含量差異對樣品分類有一定的影響，其中異葒草苷和綠原酸對牡荊葉藥材抗氧化作用有重要貢獻。本方法可為牡荊葉藥材關鍵成分的質量控制及質量標志物篩選提供參考，對牡荊葉藥材的質量評價體系的完善具有重要意義。

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（責任編輯 鄧斯麗 蔣巧媛）

收稿日期：? 2022-07-29

基金項目：? 國家自然科學基金（21665031， 81760652）。

第一作者： 吳其妹（1995-），碩士研究生，研究方向為藥用植物開發與利用，（E-mail）510578364@qq.com。

*通信作者：? 周亞平，博士，副教授，碩士研究生導師，研究方向為藥物分析，（E-mail）yaping20302@163.com。