老年動脈瘤性蛛網膜下腔出血介入栓塞術治療患者血清miR-124、miR-27a-3p與預后的關系

李倫，段建，幸文利

遂寧市中心醫院腦血管疾病科，四川遂寧 629000

動脈瘤性蛛網膜下腔出血（SAH）具有高病死率、高致殘率等特點，即使成功施行顱內動脈瘤介入栓塞術，仍有部分患者尤其是老年患者會出現腫瘤破裂再出血，甚至死亡［1-2］。因此，探索能評估老年動脈瘤性SAH患者預后的相關因素對于臨床確定防治措施及提高患者生存率具有重要意義。近年來新發現的微小RNA（miRNA）可介導轉錄后基因沉默，調節蛋白表達，參與腦梗死、SAH等神經系統疾病的發生發展［3-4］。miR-124是成人及胚胎腦組織中表達最豐富的miRNA，可通過抑制細胞增殖、促進細胞分化等途徑參與腦缺血性疾病的發生發展［5］。miR-27a-3p主要分布于消化系統及神經系統，其表達在高血壓腦出血患者中呈下降趨勢［6］。但目前關于血清miR-124、miR-27a-3p水平與老年SAH經顱內動脈瘤介入栓塞術治療患者預后的關系鮮見報道。為此，我們進行了如下研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標準：①符合動脈瘤性SAH診斷標準［7］，結合顱腦CT及MRI檢查確診；②年齡≥60歲；③成功施行顱內動脈瘤介入栓塞術。排除標準：①合并急慢性感染；②合并嚴重心肝腎疾病；③存在出血傾向及凝血機制異常，或近期服用抗血小板藥及抗凝藥；④有心腦血管意外家族史；⑤顱內血腫明顯需行開顱手術。選取2019年1月—2022年6月我院收治并符合上述標準的老年動脈瘤性SAH顱內動脈瘤介入栓塞術后患者200例，根據其術后28 d生存情況［8］分為生存組182例和死亡組18例。生存組男92例、女90例，年齡（70.51 ± 4.46）歲，破裂動脈瘤直徑：≤5 mm 70例、＞5～15 mm 98例、＞15～25 mm 14例，發病至入院時間：≤6 h 136例，＞6～24 h 46例，Fisher分級：1級29例、2級51例、3級84例、4級18例，Hunt-Hess分級：Ⅰ級35例、Ⅱ級56例、Ⅲ級61例、Ⅳ級30例，合并高脂血癥28例、糖尿病20例、高血壓26例，吸煙史56例。死亡組男9例、女9例，年齡（71.13 ± 4.05）歲，破裂動脈瘤直徑：≤5 mm 7例、＞5～15 mm 10例、＞15～25 mm 1例，發病至入院時間：≤6 h 11例，＞6～24 h 7例，Fisher分級：1級3例、2級5例、3級8例、4級2例，Hunt-Hess分級：Ⅰ級4例、Ⅱ級6例、Ⅲ級7例、Ⅳ級1例，合并高脂血癥3例、糖尿病4例、高血壓3例，吸煙史6例。兩組上述資料均具有可比性（P均＞0.05）。本研究通過醫院倫理委員會審核，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 血清miR-124、miR-27a-3p檢測方法 采用實時熒光定量PCR法。兩組于術前及術后3、7 d抽取外周靜脈血3 mL，室溫靜置30 min，待血樣凝結后，1 200 r/min離心15 min，取上清液。滴加焦炭酸二乙酯，-20 ℃冰箱保存待測。滴加TRIzol試劑提取總RNA，通過NanoDROP?ND-1000測定RNA濃度及純度合格。取1 μL RNA根據反轉錄試劑盒進行逆轉錄反應，合成cDNA。PCR反應體系20 μL，反應條件：95 ℃、5 min，95 ℃、30 s，58 ℃、30 s，72 ℃、30 s，72 ℃、5 min，共40個循環［9］。以U6作為內參，采用2-ΔΔCt法計算miR-124、miR-27a-3p相對表達量。

1.3 統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件。計量資料采用S-W正態性檢驗，呈正態分布以表示，兩組間比較采用t檢驗，重復測量數據采用重復測量的方差分析；非正態分布以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用秩和檢驗。計數資料以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，等級資料采用Ridit檢驗。繪制術后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p預測患者死亡的受試者工作特征（ROC）曲線，計算曲線下面積（AUC）、截斷值、敏感度及特異度，并分析AUC較大時的血清miR-124、miR-27a-3p聯合預測患者死亡的價值。根據術后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p預測患者死亡的截斷值，繪制不同血清miR-124、miR-27a-3p水平患者的生存曲線，并比較其28 d生存率。以患者是否死亡為因變量，以術后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p為自變量，進行影響患者死亡的多因素Logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組不同時間點血清miR-124、miR-27a-3p水平比較 與術前比較，兩組術后3、7 d血清miR-124水平均升高、miR-27a-3p水平均降低，且死亡組變化更明顯（P均＜0.05）。見表1。

表1 兩組不同時間點血清miR-124、miR-27a-3p水平比較（）

表1 兩組不同時間點血清miR-124、miR-27a-3p水平比較（）

注：與同組術前比較，*P＜0.05；與死亡組同時間點比較，#P＜0.05。

n miR-124組別生存組術前術后3 d術后7 d死亡組術前術后3 d術后7 d miR-27a-3p 182 6.67 ± 2.01 7.58 ± 2.27*#8.51 ± 2.55*#0.11 ± 0.04 0.09 ± 0.03*#0.07 ± 0.02*#18 0.12 ± 0.03 0.06 ± 0.01*0.05 ± 0.01*6.48 ± 2.22 9.85 ± 2.96*11.06 ± 3.32*

2.2 血清miR-124、miR-27a-3p預測患者死亡的ROC曲線分析結果 術后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p預測患者死亡的ROC曲線分析結果見表2及OSID碼圖1、2。術后3 d血清miR-124、miR-27a-3p預測患者死亡的AUC均小于術后7 d，術后7 d血清miR-124、miR-27a-3p聯合預測患者死亡的AUC為0.906（95%CI：0.834～0.954），敏感度及特異度分別為94.44%、76.67%，見OSID碼圖3。

表2 術后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p預測患者死亡的ROC曲線分析結果

2.3 不同血清miR-124、miR-27a-3p水平患者的28 d生存率比較 以表2中ROC曲線分析結果的截斷值進行分組，術后3、7 d血清miR-124分別＞9.47、＞10.31者為高危患者（n=57、55），其余為低危患者（n=51、53）。術后3、7 d血清miR-27a-3p分別≤0.07、≤0.06者為高危患者（n=52、58），其余為低危患者（n=56、50）。生存曲線分析結果顯示，術后3 d miR-124、miR-27a-3p高危患者28 d生存率與低危患者比較差異均無統計學意義（P均＞0.05）；術后7 d miR-124、miR-27a-3p高危患者28 d生存率均低于低危患者（P均＜0.05）。見OSID碼圖4～7。

2.4 術后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p與患者死亡的關系 術后3、7 d miR-124水平升高、miR-27a-3p水平降低均是患者死亡的獨立影響因素（P均＜0.05）。見表3。

表3 術后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p影響患者死亡的多因素Logistic回歸分析結果

3 討論

據統計，SAH發病率占腦血管病的12%～20%，其中80%左右為腦動脈瘤破裂所致［10］。對于老年動脈瘤性SAH患者而言，顱內動脈瘤介入栓塞術是最為有效的治療手段，然而動脈瘤所致原發性腦損傷及繼發性病理生理改變會對患者的預后產生消極影響。目前國內外醫療機構對于老年動脈瘤性SAH的鑒別診斷多依賴于影像學手段，雖具有一定價值，但缺乏客觀有效的評價指標，且無法判斷患者預后恢復情況，故尋找有效的生物標志物對于評估老年動脈瘤性SAH的預后尤為重要。

miRNA屬于高度保守的非編碼小RNA，可通過促進mRNA降解、抑制mRNA翻譯等途徑參與轉錄后基因表達調控。傳統觀念認為，基因表達調控多發生于細胞內；新近研究顯示，血清、腦脊液等細胞外液中存在穩定miRNA，并發現腦出血患者外周血與病灶組織存在幾乎平行的miRNA表達譜［11］。miR-124屬于腦組織特異性miRNA，最早發現于小鼠腦組織，隨后發現其在果蠅、非洲爪蟾、人體大腦中均呈動態變化，在神經系統發育、損傷、修復等生理病理過程中起著重要作用，有可能成為藥物治療的作用靶點之一［12］。近年來越來越多的研究表明，miR-124水平變化與缺血性腦損傷有關［13-14］。體外實驗發現，miR-124在大鼠腦組織缺血半影區的表達明顯高于非缺血區，考慮原因與其可抑制細胞凋亡而發揮神經保護作用有關［15］。馮錦麗等［16］認為，血清miR-124與急性缺血性腦梗死患者梗死面積密切相關。楊劍宏［17］研究指出，血清miR-124在急性腦出血患者中呈高表達，特別是預后不良患者。但目前尚未見血清miR-124與動脈瘤性SAH、高血壓腦出血等缺血性腦損傷疾病患者預后的關系。故本研究嘗試分析其與動脈瘤性SAH術后患者預后的關系，結果顯示生存組術后3、7 d的血清miR-124水平均低于死亡組，提示血清miR-124水平升高可能與患者預后不良有關。推測原因，可能是miR-124可調節下游靶基因Rho蛋白二磷酸鳥苷解離抑制因子（RhoGDIA），抑制血管內皮及血管平滑肌細胞遷移、增殖，損傷血管壁，引發腦出血；同時miR-124可下調神經元RhoG表達，中斷ELMO/Dock180/Rac1信號通路，阻礙神經突向外生長，減少軸突及樹突分支，增加腦出血量，加劇神經功能損傷，導致疾病惡化，甚至死亡［18］。

miR-27a是基因間miRNA，在多種細胞及血管豐富的組織中均有表達，可參與血管生成、炎癥反應、糖脂代謝等病理生理過程。既往關于miR-27a的研究多集中于腫瘤，近年研究發現，miR-27a可通過上調腦組織Toll樣受體4（TLR4）、p38蛋白磷酸化、釋放炎癥因子等，加劇腦缺血小鼠的腦組織損傷［19］。張秀萍等［20］指出，miR-27a可通過調節細胞周期基因、凋亡基因參與腦缺血損傷的病理生理過程。miR-27a-3p是miR-27a的剪切成熟體之一，包含B細胞淋巴瘤/白血病2基因Bcl-2相關轉錄因子1（BCLAF1）及Bcl-2結合成分3（BBC3）等靶基因，且兩者均與凋亡基因Bcl-2密切相關。值得注意的是，腦出血疾病會增加Bcl-2表達，進而引起繼發性腦損傷，若未及時診治可加劇疾病進展，導致患者死亡［21］。但miR-27a-3p能否通過靶基因調控Bcl-2表達尚不得知。本研究結果顯示，生存組術后3、7 d的血清miR-27a-3p水平均低高于死亡組，提示血清miR-27a-3p水平降低可能與患者預后不良有關。分析原因，可能是miR-27a-3p下調可增加BCLAF1、BBC3等靶基因表達，增強Bcl-2基因的促凋亡作用，加劇動脈瘤性SAH術后患者的繼發性腦損傷，從而造成病情惡化［22］。

本研究進一步采取ROC及生存曲線分析發現，血清miR-124、miR-27a-3p對老年動脈瘤性SAH術后患者死亡的預測價值較高，特別是術后7 d的血清miR-124和miR-27a-3p，二者聯合預測患者死亡的AUC為0.906，高于兩項指標單獨預測的AUC。本研究Logistic回歸分析結果顯示，術后3、7 d miR-124水平升高、miR-27a-3p水平降低是患者死亡的獨立影響因素。

綜上所述，老年動脈瘤性SAH經顱內動脈瘤介入栓塞術患者術后血清miR-124水平升高、miR-27a-3p水平降低，且死亡患者變化更明顯，二者聯合檢測有助于評估患者的生存情況。因此，做好老年動脈瘤性SAH術后miR-124、miR-27a-3p的監測工作，對預測預后、指導臨床治療均具有重要意義。