醬香型白酒除雜后長期大劑量飲用對小鼠生長的影響研究

杜 莎，鄧文飛，趙玉珍，楊榮增，孫曉東

（力天酒業(yè)研究院（西安）有限公司，陜西西安 710014）

白酒作為我國傳統(tǒng)的酒精飲料而廣受關(guān)注，近年來隨著“健康中國”戰(zhàn)略的實(shí)施，白酒健康也成了人們關(guān)注的重點(diǎn)[1]。活性炭是一種疏水吸附劑，常被用于去除白酒中的有害物質(zhì)和異雜味[2]，傳統(tǒng)的活性炭有著較大缺陷，在吸附酒中有害物質(zhì)成分的同時也會吸附相當(dāng)量的有益呈香呈味物質(zhì)成分，導(dǎo)致酒水口味變得寡淡[3-4]。為了保證酒水除雜效果明顯的同時克服傳統(tǒng)活性炭除雜的缺陷，近年來行業(yè)內(nèi)研制了新型炭制吸附劑。炭分子篩是通過對傳統(tǒng)活性炭進(jìn)行破碎、多級清洗、氈制成型、干燥、碳化活化，脫除傳統(tǒng)活性炭自身的灰分、雜質(zhì)、雜味，重組其孔隙，堵塞其吸附白酒有益物質(zhì)的孔徑，使其成為專用于吸附白酒中甲醇、甲醛、正丙醇、各種醛類物質(zhì)、塑化劑、氰化物、重金屬等有害物質(zhì)的新型材料[5]。Q/SLT0001S—2022 與GΒ 29215—2012 相比各項(xiàng)關(guān)鍵指標(biāo)均優(yōu)于GΒ 29215—2012，見表1[6]。本試驗(yàn)通過研究經(jīng)酒用炭分子篩處理前后的53%vol 醬香酒對小白鼠生長的影響，對比白酒的除雜處理對小鼠毒性的影響，為白酒的健康化發(fā)展和酒民的飲酒健康提供理論依據(jù)。

表1 兩標(biāo)準(zhǔn)理化指標(biāo)差異

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

1.1.1 動物

清潔級KM 小白鼠60 只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2) g，購自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院SPF 實(shí)驗(yàn)動物中心，動物合格證號：SCXK(陜)2018-001，飼養(yǎng)溫度21～26 ℃，濕度45 %～55 %，光暗交替12 h，可自由飲水?dāng)z食。

1.1.2 樣品

酒樣：53%vol 醬香酒，市場隨機(jī)購買的某知名品牌醬香酒；除雜處理后53%vol醬香酒，由力天酒業(yè)研究院（西安）有限公司除雜技術(shù)處理。純凈水。

1.1.3 儀器設(shè)備

電子秤、分析天平、灌胃針管、解剖器具。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組

將60 只小白鼠隨機(jī)分為3 組，每組各20 只（雌雄各半），分別為Ⅰ組（53%vol 醬香酒）、Ⅱ組（除雜后53 %vol 醬香酒）和對照組（純凈水），試驗(yàn)時長60 d，試驗(yàn)期間雌雄分開飼養(yǎng)一周然后混合飼養(yǎng)一周，如此往復(fù)直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.2.2 小白鼠標(biāo)記

使用染色標(biāo)記法對小白鼠進(jìn)行標(biāo)記，用0.5 %的甲紫溶液標(biāo)記雄鼠，用3%苦味酸乙醇溶液標(biāo)記雌鼠，分別標(biāo)記1—10號。

1.2.3 給樣形式

使用普通灌胃針管進(jìn)行灌胃給樣，劑量各組均為20 mL/kg·d，連續(xù)灌胃5 d，然后休息2 d，如此反復(fù)直至試驗(yàn)結(jié)束。試驗(yàn)期間食、水均正常飲用。

1.2.4 生育鼠處理

通過觀察各組中雌鼠陰道口有無白色陰道栓、體重是否驟增作為雌鼠受孕依據(jù)，將明顯受孕的雌鼠單獨(dú)飼養(yǎng)，給樣正常，安裝夜間記錄儀，觀察并記錄雌鼠生崽個數(shù)。雌鼠生崽后繼續(xù)放回原組，正常實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 小白鼠死亡與處死

對實(shí)驗(yàn)過程中死亡的小白鼠進(jìn)行及時解剖，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時對所有小白鼠采用頸椎脫臼法處死并解剖，解剖的臟器存放于防腐劑中。

1.3 數(shù)據(jù)記錄分析

記錄：每日飼養(yǎng)房溫濕度；每只小白鼠給樣日的給樣前體重；各組死亡鼠的死亡體重及解剖臟體（心臟、脾臟、肝臟、肺臟、腎臟、胸腺）重量并計(jì)算臟器系數(shù)；各組生育鼠的崽鼠數(shù)目。

數(shù)據(jù)分析：數(shù)據(jù)處理及描述統(tǒng)計(jì)分析采用Excel 2016 完成，t 檢驗(yàn)、相關(guān)性分析等采用SPSS 23.0完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 小白鼠的體重特征

為研究試驗(yàn)過程中小白鼠的體重變化特征，計(jì)算各組每隔5 天小白鼠體重的平均值，變化特征見圖1。三組小白鼠體重在實(shí)驗(yàn)過程中整體增長，Ⅰ組和Ⅱ組給樣第1 天體重明顯下降，隨后逐漸上升，Ⅱ組的整體體重水平明顯優(yōu)于Ⅰ組。對照組在第36 天和實(shí)驗(yàn)組在第41 天以后的體重明顯浮動是懷孕雌鼠與生育影響。由表2 配對樣本t 檢驗(yàn)可知，隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，Ⅰ組、Ⅱ組與對照組比較體重增長顯著降低(t＜0，P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅱ組體重增長顯著高于Ⅰ組(t＜0，P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果表明除雜后減弱了飲用普通53%vol醬香酒對小白鼠體重的影響。

圖1 小鼠體重變化結(jié)果

表2 小鼠體重變化對比

2.2 試驗(yàn)鼠生育百分率

表3 結(jié)果表明，Ⅰ組共有3 只雌鼠生育，生育崽鼠總數(shù)為37 只，生育率為64.9 %；Ⅱ組共有4 只雌鼠生育，生育崽鼠總數(shù)為48 只，生育率為70.6 %；對照組有9 只雌鼠生育，生育崽鼠總數(shù)為87 只，生育率為81.3 %。結(jié)果表明，除雜處理減弱了普通53%vol醬香酒對小白鼠生育率的影響。

表3 小鼠生育狀況表 （只）

2.3 試驗(yàn)鼠臟器臟體比特征

表4 結(jié)果表明，Ⅰ組的心臟體比顯著高于Ⅲ組(t＞0，P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，脾臟系數(shù)顯著低于Ⅲ組(t＜0，P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余臟器系數(shù)與Ⅲ組無顯著差異性(P＞0.05)。由表5 可知，Ⅱ組的各臟器系數(shù)與Ⅲ組相比無顯著差異性(P＞0.05)。結(jié)果表明，普通53 %vol 醬香酒對小白鼠心臟與脾臟造成一定影響，除雜后的53%vol醬香酒與對照組沒有顯著性差異。

表4 Ⅰ組與對照組臟體比比較

表5 Ⅱ組與對照組臟體比比較

為進(jìn)一步研究兩實(shí)驗(yàn)組臟器系數(shù)與對照組的差異性，以對照組各臟器系數(shù)的均值為檢驗(yàn)值，對兩實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行單樣本t 檢驗(yàn)（表6）可知，Ⅰ組心臟系數(shù)顯著高于對照組平均水平(t＞0，P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)顯著低于對照組平均水平(t＜0，P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，腎臟系數(shù)顯著高于對照組(t＞0，P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅱ組各臟器系數(shù)相比于對照組平均水平無顯著差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，普通53 %vol 醬香酒對實(shí)驗(yàn)鼠的臟器影響較大，除雜后的53%vol醬香酒降低了對實(shí)驗(yàn)鼠臟器的影響。

表6 Ⅰ組、Ⅱ組與對照組臟器系數(shù)均值的比較

2.4 試驗(yàn)小白鼠死亡率

表7 結(jié)果表明，截至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，Ⅰ組小鼠共計(jì)死亡14 只，其中雌雄各占7 只，總體死亡率為70%；Ⅱ組小鼠共計(jì)死亡11只，其中雄鼠死亡5只，雌鼠死亡6 只，總體死亡率為55 %；對照組死亡0只。以上數(shù)據(jù)看出53%vol醬香酒組的死亡率要高于給樣除雜后53%vol醬香酒組的死亡率。

表7 小鼠死亡狀況表 (只)

3 討論

白酒中可能會帶有甲醇、甲醛、正丙醇、各種醛類物質(zhì)、塑化劑、氰化物、重金屬等有害物質(zhì)，以上物質(zhì)可能是從原料中帶入，生產(chǎn)過程中產(chǎn)生及受生產(chǎn)設(shè)備的影響進(jìn)入酒中[7-8]，通過特有的除雜工藝可以有效去除白酒中的一些有害物質(zhì)。本試驗(yàn)利用日齡5 周的18～22 g 小白鼠研究經(jīng)酒用除雜炭分子篩除雜后的53%vol醬香酒在飲用60 d過程中與未除雜的53 %vol 醬香酒比較對小鼠生長影響的特點(diǎn)。

體重變化是衡量動物是否正常生長發(fā)育的重要指標(biāo)[9]，本研究過程中Ⅰ組和Ⅱ組體重顯著低于對照組，表明大量飲酒抑制了小白鼠的生長發(fā)育，Ⅱ組的體重增長顯著高于Ⅰ組，說明除雜處理后的53%vol 醬香酒降低了對小白鼠生長發(fā)育的抑制作用。在灌胃給酒第21 天后兩實(shí)驗(yàn)組體重正常增長，表明機(jī)體對白酒產(chǎn)生了一定的耐受性，第41 天以后體重增減幅度大是由于各組均有雌鼠懷孕，從而影響各組體重變化。

長期大量飲酒會推遲雌鼠的陰道開張日齡，抑制雌鼠子宮發(fā)育與卵巢功能[10-11]，長期大量的飲酒也會導(dǎo)致雄鼠精子密度降低，增加雄鼠的精子畸形率，抑制雄鼠睪丸的生長發(fā)育[12-13]，造成睪丸病變，從而導(dǎo)致睪丸生成精子、合成并分泌雄性激素的能力受到抑制[14-15]，進(jìn)而影響小白鼠正常的生殖機(jī)能，本研究中Ⅱ組的生育率大于Ⅰ組，表明除雜后的53%vol醬香酒降低了對小白鼠的生殖毒性。

心臟作為人體的重要器官，心臟健康一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)之一，長期大量飲酒會導(dǎo)致人體心腔擴(kuò)大、心肌增厚，從而導(dǎo)致心臟質(zhì)量增加[16-18]，張麗等[19]通過長期大量給大鼠飲酒研究得到大劑量飲酒5 個月后心臟主要表現(xiàn)為離心性肥大。脾臟和胸腺作為重要的免疫器官，直接決定機(jī)體全身的免疫水平，免疫器官重量的降低是免疫抑制所導(dǎo)致，反之則表示免疫增強(qiáng)，生長發(fā)育較快[20]，研究表明，長期大量飲酒會抑制脾臟和胸腺的生長發(fā)育[12]。腎臟是僅次于肝臟的酒精代謝和排泄器官[21]，臨床研究表明長期飲酒會導(dǎo)致腎質(zhì)量和腎臟指數(shù)升高，腎小球系膜細(xì)胞增生，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，間質(zhì)內(nèi)小血管增生、擴(kuò)張、水腫[22-24]。本研究通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各臟器系數(shù)可知，Ⅰ組小白鼠心臟系數(shù)和腎臟系數(shù)顯著高于對照組，脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)顯著低于對照組，Ⅱ組的小鼠各臟器系數(shù)均與對照組無顯著差異。

死亡率可以直觀比較兩實(shí)驗(yàn)組的毒性強(qiáng)弱，由于大劑量連續(xù)灌胃，足夠引起小白鼠急性、慢性酒精性中毒[25-26]，急性酒精中毒是在一次飲用過量酒精后中樞神經(jīng)系統(tǒng)處于先興奮后抑制狀態(tài)，嚴(yán)重會導(dǎo)致呼吸、心跳受到抑制而死亡[27]。慢性酒精中毒是指長期大量飲用酒精造成的精神、神經(jīng)系統(tǒng)和多器官的損害[28]，隨著飲酒時間增長導(dǎo)致死亡，此外就是酒中其他有害物質(zhì)對機(jī)體的影響[29]。本研究Ⅰ組的死亡率為70%，Ⅱ組的死亡率為55%，表明除雜處理降低了53%vol醬香酒對小白鼠的毒性。

綜上所述，經(jīng)酒用除雜炭分子篩除雜后的53 %vol 醬香酒相比于普通53 %vol 醬香酒增進(jìn)了小白鼠的生長發(fā)育能力，增進(jìn)了小白鼠的生育能力，降低了長期大量飲酒對小白鼠心臟、脾臟、腎臟、胸腺等臟器的毒性，降低了小白鼠的死亡率。本研究驗(yàn)證了酒用除雜炭分子篩除雜后的53%vol醬香酒降低了對小白鼠的生長毒性，然而與對照組相比，長期大量飲酒對機(jī)體的危害仍然不可忽視。目前在白酒生產(chǎn)過程中，國內(nèi)白酒行業(yè)關(guān)注重點(diǎn)多在白酒生產(chǎn)工藝，對白酒后處理技術(shù)研究不多，未來加大對于白酒后處理技術(shù)的研究及科學(xué)合理的宣傳飲酒知識，控制合理的飲用量及飲用頻次對于白酒行業(yè)長期健康發(fā)展有不可估量的作用。