江西省市售清熱解毒口服液的質量分析

肖芳紅，方慧瓊，廖寶源，吳應帥，吳曉勇，李功輝

贛州市綜合檢驗檢測院，江西 贛州 341000

清熱解毒口服液為清熱解毒類中成藥，屬于乙類非處方藥（OTC），由黃芩、梔子、金銀花等十二味藥材組方，具有清熱解毒的功效，用于熱毒壅盛所致的發熱面赤、煩躁口渴、咽喉腫痛；流感、上呼吸道感染見上述證候者，臨床上常用于治療流感、上呼吸道感染、痤瘡、兒童手足口等疾病［1］。目前，已獲國家藥品監督管理局批準的生產企業有203 家，共221 個批準文號。本研究共抽取樣品42 批，涉及批準文號19 個、生產企業19 家，執行標準均為《中國藥典》2015 年版一部。本研究對清熱解毒口服液現行標準中黃芩苷的含量測定方法進行修訂，制定了HPLC 法同時測定黃芩苷和梔子苷的含量測定方法［2-11］，分別按現行標準和修訂后的標準對42 批樣品進行檢驗，并對檢驗結果進行對比分析，評價該品種質量狀況。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260 高效液相色譜儀（安捷倫公司）、Waters e2695 高效液相色譜儀（沃特世公司）、XSE205DU 電子天平（梅特勒公司）、METTLER FE20 pH 計（梅特勒公司）。

1.2 試劑與試藥

本研究抽取的清熱解毒口服液來自19 個廠家，共42 批次，規格均為10 mL/支，詳見表2。

對照品：黃芩苷（批號110715-201821，含量95.4%），梔子苷（批號110749-201919，含量97.1%），綠原酸（批號110753-202018），連翹苷（批號110821-201816），菝葜皂苷元（批號110744-201711），麥冬（批號121013-201711）均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 按現行標準檢驗

對19 個廠家的42 批樣品按《中國藥典》2015年版一部清熱解毒口服液標準進行檢驗，各項檢驗結果如下。

2.1.1 性狀 標準規定應為棕紅色的液體；味甜、微苦。經檢驗，42 批樣品均符合規定。

2.1.2 鑒別 鑒別（1）為綠原酸的薄層色譜鑒別，鑒別（2）為梔子苷的薄層色譜鑒別，鑒別（3）為連翹苷的薄層色譜鑒別，鑒別（4）為菝葜皂苷元的薄層色譜鑒別，鑒別（5）為麥冬的薄層色譜鑒別。按標準檢驗，結果42 批樣品均符合規定，但有部分批次樣品在鑒別（2）中梔子苷斑點較弱。

2.1.3 檢查 pH 值按標準檢驗，42 批樣品pH 值范圍為4.8～5.7，均符合規定（標準規定pH 值應為4.5～6.5）。裝量按標準檢驗，42 批樣品均符合規定。微生物限度按標準檢驗，42 批樣品需氧菌總數小于100 cfu/mL、霉菌和酵母菌總數小于10 cfu/mL、大腸埃希菌未檢出，均符合規定。

2.1.4 含量測定 本法為黃芩苷的HPLC 法含量測定，標準規定本品每1 mL 含黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計，不得少于1.0 mg。按標準檢驗，42批樣品均符合規定。

2.2 含量測定方法修訂

現行標準含量測定方法為HPLC 法測定黃芩苷的含量，為提升本品質量的可控性，結合現有標準檢驗時發現的鑒別（2）中部分批次樣品梔子苷斑點較弱的問題，將方法修訂為HPLC 法同時測定黃芩苷和梔子苷的含量。

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Sharpsil-T C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相以甲醇為流動相A，以0.2%磷酸溶液為流動相B，按表1 中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為238 nm；柱溫35 ℃；進樣量10 μL。理論板數按梔子苷峰計算應不低于3 000。

表1 梯度洗脫表

2.2.2 溶液的配制 混合對照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對照品0.010 81 g、梔子苷對照品0.012 95 g，分別置100 mL 量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述黃芩苷對照品溶液5 mL、梔子苷對照品3 mL，置同一25 mL 量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：精密量取供試品2 mL，置100 mL 量瓶中，加50%甲醇適量，振搖，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 專屬性試驗 按供試品工藝制備缺黃芩和梔子的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，并按上述色譜條件進樣測定。結果表明：陰性對照溶液在與梔子苷對照和黃芩苷對照色譜峰保留時間處無相應色譜峰，陰性無干擾，說明本法專屬性良好。見圖1。

圖1 HPLC色譜圖：A.混合對照品溶液，B.供試品溶液，C.陰性對照溶液

2.2.4 方法學考察（1）線性關系考察。精密稱取黃芩苷對照品、梔子苷對照品各適量，加50%甲醇制成每1 mL 分別含黃芩苷4.13 μg、10.31 μg、20.63 μg、51.56 μg、103.13 μg 及梔子苷3.02 μg、7.54μg、15.09 μg、62.87 μg、125.74 μg 的混合對照品溶液，分別進樣測定。以對照品溶液濃度為橫坐標X，以峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線，計算回歸方程。結果：梔子苷回歸方程為Y=15.434 5X-2.426 3，相關系數r為1.000，進樣濃度在3.02 μg/mL～125.74μg/mL 范圍內與峰面積呈良好的線性關系；黃芩苷回歸方程為Y=13.969 0X-2.535 0，相關系數r為1.000，進樣濃度4.13 μg/mL～103.13 μg/mL 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

（2）重復性。取同一批號樣品制備供試品溶液6 份，分別進樣測定，測得梔子苷、黃芩苷平均含量分別為1.57 mg/mL、1.19 mg/mL，RSD 分別為0.7%、0.6%,說明本法重復性良好。

（3）穩定性。取供試品溶液分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、9 h 分別進樣測定，結果梔子苷、黃芩苷峰面積RSD 分別為0.9%、1.0%，說明供試品溶液在9 小時內穩定。

（4）精密度。取同一份供試品溶液，連續進樣6 次，結果梔子苷、黃芩苷峰面積RSD 分別為0.2%、0.2%，說明儀器精密度良好。

（5）回收率試驗。精密量取已知含量的供試品（梔子苷為1.569 7 mg/mL、黃芩苷為1.185 1 mg/mL）1 mL，置100 mL 量瓶中，分別精密加入“2.2.2”中的梔子苷對照品母液（0.125 7 mg/mL）、黃芩苷對照品母液（0.103 1 mg/mL）各10 mL，再加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置，濾過，取續濾液進樣測定。結果梔子苷、黃芩苷回收率分別為99.5%、100.3%，RSD 分別為0.9%、0.8%，說明本法準確度良好。

（6）耐用性試驗。取同一批次樣品制備的供試品溶液，采用不同儀器、不同品牌色譜柱進樣測定，且使用了不同柱溫和流速的色譜條件測定，結果各色譜條件下測得的含量接近，峰形良好，主峰與雜峰完全分離，說明本法耐用性良好。

（7）樣品測定。按上述方法對42 批樣品分別進行測定，結果見表2 樣品含量測定結果。

表2 樣品含量測定結果 mg/mL

參考現行標準中黃芩苷含量限度，限度暫擬定為：本品每1 mL 含黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計，不得少于1.0 mg；含梔子以梔子苷（C17H24O10）計，不得少于0.6 mg（梔子苷相當于所測樣品平均值的70%，結合《中國藥典》2015 年版一部對梔子中梔子苷的含量限度，轉移率為49.8%）。

3 討論

3.1 現行標準檢驗的差異分析

按現行標準檢驗，42 批樣品均符合規定。其中pH 值的限度為4.5～6.5，本次所測pH 值范圍區間為4.8～5.7。不同生產企業稍有差異，分析原因：（1）不同企業生產工藝參數有區別，比如煎煮加水量、溫浸溫度等；（2）不同企業使用的輔料類別及使用量上有差異，在矯味劑的選擇上，有蔗糖和甜菊素，部分企業還添加了桔子香精，防腐劑的使用上有苯甲酸鈉和山梨酸鉀兩種。

3.2 修訂前后含量測定結果的差異分析

按現行標準黃芩苷含量測定項檢驗，42 批樣品均符合規定，但不同廠家之間的黃芩苷含量差異較大，最大值有3.9 mg/mL，最小值僅為1.2 mg/mL，推測原因為生產工藝參數不同及黃芩藥材質量參差不齊。按修訂后的含量測定方法測定，并按擬定限度判定，黃芩苷含量均符合規定，且與原方法測得值基本一致，但有7 個廠家的21 批次樣品梔子苷含量低于限度，且不同生產企業之間及同一生產企業不同批次間差異較大，最大值有2.6 mg/mL，最小值僅為0.1 mg/mL，原因可能是：（1）各生產企業用于投料的梔子藥材質量參差不齊，梔子藥材采購驗收標準中沒有含量測定項。（2）各企業具體的生產工藝參數（比如煎煮加水量、煎煮罐壓力等）有差異。（3）因現行標準中未對梔子藥材進行定量控制，難以保證生產廠家真實、足量投料，從而導致了產品質量的差異。

3.3 建議

應修訂清熱解毒口服液含量測定方法，增加梔子苷的含量測定，從標準上提高清熱解毒口服液的質量。