口炎清顆粒中麥冬摻偽情況考察

占麗琴，胡亮，畢武，丁野，孫輝，李文莉

湖南省藥品檢驗檢測研究院，湖南省藥品質量評價工程技術研究中心，湖南 長沙 410001

口炎清顆粒處方包括天冬、麥冬、玄參、山銀花和甘草5 味藥材，功效為滋陰清熱、解毒消腫［1］。口炎清顆粒的處方之一為麥冬ophiopogon japonicus（L.f）Ker-Gawl.的干燥塊根，主產于浙江省、四川省。山麥冬來源包括湖北麥冬liriope spicata（Thunb.）Lour.var.proliferaY.T.Ma 或短葶山麥冬liriopemuscari（Decne.）Baily 的干燥塊根，為麥冬的常見混偽品，主產于湖北省、福建省，市場流通廣泛。麥冬與山麥冬均為百合科植物塊根，二者性狀相近、功效類似［2-7］。另經市場調研，麥冬的生長周期普遍較山麥冬長，市場需求也較山麥冬大，造成麥冬價格高于山麥冬。基于多種因素，一些生產企業存在未嚴格按照《藥品生產質量管理規范》要求進行生產的可能，故本研究對口炎清顆粒中麥冬摻偽情況進行考察。

相關文獻［8-14］顯示,山麥冬皂苷B 和短亭山麥冬皂苷C 分別為湖北麥冬和短亭山麥冬的專屬性成分。本研究以山麥冬皂苷B 作為摻雜湖北麥冬投料的研究指標，短葶山麥冬皂苷C 作為摻雜短葶山麥冬投料的研究指標，建立口炎清顆粒中麥冬摻偽檢查方法，結果本次國抽樣品68 批均未檢出短葶山麥冬皂苷C，59 批次樣品檢出山麥冬皂苷B 成分。初步研究結果顯示口炎清顆粒中麥冬的主要摻偽品為湖北麥冬，故對檢出山麥冬皂苷B 的樣品展開系統的方法學考察，為該藥品安全生產和科學監管提供可靠依據。

1 材料與儀器

儀器：超高效液相色譜儀串聯三重四極桿質譜系統（賽默飛TSQ Endura-UltiMate3000）；電子分析天平METTLER AE240，METTLER TOLEDO XSE205DU；超聲波清洗儀KQ500DE。實驗用有機試劑乙醇、甲酸、甲醇均為色譜級，水為怡寶水。對照物質均購自中國食品藥品檢定研究院，包括山麥冬皂苷B（批號：111907-201804）、短葶山麥冬皂苷C（批號：111908-201102）、麥冬對照藥材（批號：121013-201711），山麥冬（湖北麥冬）（批號：121136-201803）。

口炎清顆粒所有樣品均來自于2022 年國家藥品抽檢，總計68 批次。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Welch UHPLC Ultimate LP-C18 色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%甲酸（B），梯度洗脫（見表1）；流速：0.2 mL/min；進樣體積：3 μL；柱溫：30 ℃。

表1 洗脫梯度表

2.2 質譜條件

采用質譜檢測儀，ESI+模式，噴霧電壓：3 100 V，鞘氣：20 ARb，輔助氣：10 ARb，離子傳輸管溫度：350 ℃，蒸發溫度：300 ℃，掃描方式：MRM。選擇質核比（m/z）723.3→269.1 和723.3→251.1 作為山麥冬皂苷B 檢測離子對，碰撞能量分別為24 V、27 V。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品貯備溶液制備 精密稱取山麥冬皂苷B對照品12.37 mg 置100 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得（濃度為123.7 μg/mL）。

2.3.2 供試品溶液制備 取樣品適量，混勻，研細，取約4.0 g 或1.0 g（無蔗糖），精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 陰性制劑溶液、陽性制劑溶液及標準制劑溶液的制備 將缺麥冬陰性制劑、含湖北麥冬陽性制劑以及標準制劑，按“2.3.2”項下方法制備。

2.4 方法學考察

2.4.1 專屬性試驗 分別取缺麥冬陰性制劑溶液、含湖北麥冬陽性制劑溶液、標準制劑溶液及山麥冬皂苷B 對照品溶液按“2.1”和“2.2”項下條件測定。結果缺麥冬陰性制劑溶液、標準制劑溶液及麥冬藥材在與山麥冬皂苷B 對照品相應的位置上均未出現色譜峰，湖北麥冬藥材和陽性制劑在與山麥冬皂苷B 對照品相應的位置上均出現相應的譜峰。表明口炎清顆粒中的各藥味對山麥冬皂苷B 的測定無干擾，專屬性較好。結果見圖1～6。

圖1 山麥冬皂苷B對照品溶液MRM

圖2 缺麥冬陰性制劑溶液MRM（未檢出山麥冬皂苷B）

圖3 麥冬對照藥材溶液MRM（未檢出山麥冬皂苷B）

圖4 標準制劑溶液MRM（未檢出山麥冬皂苷B）

圖5 含湖北麥冬陽性制劑溶液MRM（檢出山麥冬皂苷B）

圖6 湖北麥冬溶液MRM（檢出山麥冬皂苷B）

2.4.2 線性關系 精密量取“2.3.1”項下山麥冬皂苷B 貯備溶液（濃度為123.7 μg/mL）適量，逐級稀釋得線性關系對照品溶液①～⑥（濃度分別為7.422 0、1.484 4、0.593 7、0.296 8、0.148 4、0.059 3 μg/mL）。按照“2.1”和“2.2”項下的方法進樣測定，分別以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，計算山麥冬皂苷B 的回歸方程為y=109 732x+12 299，r=0.999 0，表明濃度在0.059 3～7.422 0 μg/mL 范圍內山麥冬皂苷B 具有較好的線性關系。結果見表2。

表2 山麥冬皂苷B對照品溶液線性關系考察

2.4.3 重復性試驗 取適量口炎清顆粒內容物，研細，取約4.0 g，按“2.3.2”項下方法，制備六份平行樣。按“2.1”和“2.2”項下方法進樣，測定。結果山麥冬皂苷B 的平均值為11.26 μg/g，RSD 為4.82%，表明該方法具良好的重復性。

2.4.4 精密度試驗 取已知山麥冬皂苷B 含量的供試品溶液，按“2.1”和“2.2”項下方法進樣測定6 次，測定m/z723.3→269.1 離子流色譜的峰面積，離子色譜峰面積的RSD 為4.20%，說明該儀器具良好的精密度。

2.4.5 穩定性試驗 取同一供試品溶液，于制備后0、2、4、8、12、24 h 按“2.1”和“2.2”項下方法進樣，測定。結果m/z723.3→269.1 離子色譜峰峰面積RSD 為2.42%，說明供試品溶液24 h 內具較好穩定性。

2.4.6 回收率試驗 稱取已知山麥冬皂苷B 含量的樣品適量，平行操作6 份，按100%加入山麥冬皂苷B 適量，按“2.3.2”項下方法制備回收率供試品溶液。再按“2.1”項下方法進樣，測定。結果山麥冬皂苷B 的平均回收率為101.84%，RSD 為1.32%，表明該方法準確度良好。結果見表3。

表3 回收率試驗結果

2.4.7 檢測限試驗 以m/z723.3→269.1 作為檢測離子進行檢測，取線性最低點（濃度0.059 3 μg/mL）進行適量稀釋，按信噪比（S/N 約為20）進行折算，山麥冬皂苷B 儀器檢測限為0.064 pg，方法檢出限為0.000 13 μg/g。

2.4.8 耐用性試驗 按上述擬定方法，采用不同品牌的液質聯用色譜儀（TSQ Endura、安捷倫1290INfinityⅡ-6470），不同品牌的色譜柱［Welch UHPLC Ultimate LP-C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）、CAPCELL C18（2.1 mm×100 mm，2 μm）］對同一份口炎清顆粒樣品溶液分別進行測定，結果均檢出山麥冬皂苷B，表明方法耐用性較好。

2.5 限度擬定

一方面《中國藥典》2020 年版規定：“藥屑及雜質通常不得過3%”［1］，山麥冬（湖北麥冬）與麥冬來源為同屬植物，性狀相近；另一方面考慮到中藥制劑生產轉移率及檢驗成本，本研究將考察山麥冬（湖北麥冬）摻入比例為10%時口炎清顆粒中湖北麥冬的檢出情況。

首先，取收集的10 批次山麥冬（湖北麥冬）分別以10%的量摻入麥冬，制成摻偽湖北麥冬10%的麥冬藥材。再按照規定的處方量分別取自制摻偽湖北麥冬10%的麥冬、天冬、玄參、山銀花、甘草藥材按工藝自制湖北麥冬摻偽10%的模擬樣品共計10 份。最后，供試品溶液按“2.3.2”項下方法制備，按“2.1”和“2.2”項下方法測定，結果10 份模擬樣品溶液中山麥冬皂苷B檢出濃度范圍為0.077～0.32 μg/mL。暫擬定山麥冬皂苷B 檢出濃度≥0.32 μg/mL作為判定樣品中檢出湖北麥冬的限度。

2.6 樣品測定

按擬定的方法對本次國家藥品抽檢的68 批次口炎清顆粒進樣測定，結果59 批次樣品檢出山麥冬（湖北麥冬）專屬性成分山麥冬皂苷B，問題批次占全部批次的86.76%。提示生產企業存在摻山麥冬（湖北麥冬）或使用山麥冬（湖北麥冬）替代麥冬投料的可能。

3 討論

實驗前期，分別對不同的提取溶劑包括80%乙醇、30%甲醇、50%甲醇、80%甲醇、100%甲醇進行考察，對加入溶劑甲醇的不同體積10、25、50 mL 進行考察，結果表明25 mL 甲醇的提取效果較好。對山麥冬皂苷B 進行了正、負離子掃描進行考察，結果顯示山麥冬皂苷B 在正離子模式下響應較好。對麥冬摻偽10%湖北麥冬進行考察，結果山麥冬皂苷B 的檢出濃度范圍較大，分析原因可能與湖北麥冬質量有關，故最后擬定檢出限度為濃度的最高值0.32 μg/mL。

本次實驗用樣品來源于兩個不同廠家，結果顯示兩個廠家生產的口炎清顆粒中山麥冬皂苷B 的檢出率分別為96.9%、77.8%，均較高，分析原因可能生產企業質量控制主體意識不強，未嚴格按照《藥品生產質量管理規范》進行生產。

本研究建立口炎清顆粒的麥冬摻偽檢查方法，快速、高效，可以作為現行質量標準的補充，為口炎清顆粒的質量控制提供參考。