血清粒細胞巨噬細胞集落刺激因子、人中性粒細胞多肽1-3、CD64聯合預測新生兒敗血癥抗感染轉歸的價值

胡婷，劉悅

新生兒敗血癥是新生兒時期嚴重感染性疾病，其發病率呈不斷升高趨勢，極低出生體質量兒發病率高達16.4%左右，若未得到及時有效救治，則會危及病兒生命安全［1-2］。目前，抗感染治療是新生兒敗血癥首選治療方案，但受病兒病情、個體差異性、抗生素耐藥性等因素影響，導致部分病兒無法取得理想療效，對此類病兒及早識別至關重要［3-4］。粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）是一種多肽類激素樣造血生長因子，可促進單核-巨噬細胞分化，參與炎癥發生發展［5］。人中性粒細胞多肽1-3（human neutrophil polypeptide 1-3，HNP1-3）屬于人α-防御素，是內源性免疫成分，可抵抗病原微生物侵害［6］。中性粒細胞表面抗原CD64主要表達于中性粒細胞表面，在受到炎癥刺激時呈現大量表達［7］。現階段尚未有研究報道關于三者聯合預測新生兒敗血癥抗感染轉歸的價值，故本研究對此進行探討，旨在為臨床及早預測轉歸結局、制定更合理可靠的防治措施提供新思路與數據支持。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取三二〇一醫院2019年1月至2021年10月新生兒敗血癥病兒92例作為研究對象，男55例，女37例，日齡（12.23±2.95）d，范圍為5～21 d，分娩方式：自然分娩62例，剖宮產30例，病情程度：非危重45例，危重45例，極危重2例，其中早產22例，低體質量兒10例。納入標準：均出現發熱、面色蒼白、煩躁不安、拒奶等臨床癥狀，伴有外周血象改變，病原菌培養呈陽性；符合《新生兒敗血癥診斷及治療專家共識（2019年版）》［8］中新生兒敗血癥相關診斷標準；均為首次確診，參與本研究前未接受相關抗感染治療；病兒監護人均知曉本研究方案，自愿簽訂知情同意書。排除標準：伴有遺傳性代謝性疾病者；存在先天性消化道畸形、先天性心臟病者；合并嚴重肝腎功能異常、病毒感染、自身免疫性疾病者。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 所有病兒入院均給予維持水電解質平衡、改善微循環、吸氧等對癥支持治療措施，首先給予美羅培南20 mg/kg+氯化鈉溶液5～10 mL，靜脈滴注，每12小時給藥1次，在確定病原菌及藥敏試驗結果后給予針對性抗生素行抗感染治療。連續用藥7 d。治療7 d后根據抗感染轉歸結局分為有效組與無效組，抗感染轉歸結局判定標準參考《新生兒敗血癥診斷及治療專家共識（2019年版）》［8］。

1.2.2 血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平檢測方法 于所有病兒抗感染治療前采集清晨空腹靜脈血2 mL，離心處理，3 000 r/min，10 min，取上清液，采用酶聯免疫吸附法檢測血清GM-CSF、HNP1-3水平，試劑盒購自美國貝克曼庫爾特公司，采用購自美國貝克曼庫爾特Cytomics FC 500流式細胞儀、沃文特公司鼠抗人CD64-FITC、CD45-PE試劑盒檢測血清CD64水平，所有操作均遵循試劑盒說明書。

1.3 觀察指標 （1）兩組臨床資料、血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平，臨床資料包括齡、性別、分娩方式、病情程度、低體質量兒、早產、合并化膿性腦膜炎等，其中病情程度以新生兒危重病例評分（neonatal critical case score，NCIS）評估，該評分包含心率、收縮壓、呼吸、氧分壓、pH值、鈉、鉀、血肌酐、血尿素氮、紅細胞壓積、胃腸道表現11項內容，每項10分，總分110分，91～110分為非危重，70～90分為危重，＜70分為極危重。（2）血清GM-CSF、HNP1-3、CD64與病情程度的相關性。（3）血清GM-CSF、HNP1-3、CD64對抗感染轉歸結局的影響。（4）血清GM-CSF、HNP1-3、CD64對抗感染轉歸結局的預測價值。

1.4 統計學方法 采用統計學軟件SPSS 22.0處理數據。計量資料以描述，兩獨立樣本t檢驗；計數資料用例（%）表示，χ2檢驗；影響因素采用logistic多因素回歸分析；相關性采用Spearman相關性分析；預測價值采用受試者操作特征曲線（ROC曲線）分析，聯合預測實施logistic二元回歸擬合，返回預測概率logit（P），將其作為獨立檢驗變量。P＜0.05表明差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床資料、血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平 兩組日齡、性別、分娩方式差異無統計學意義（P＞0.05）；無效組病情程度、低體質量兒比例、早產比例、合并化膿性腦膜炎比例、血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平高于有效組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組新生兒敗血癥臨床資料、血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平比較

2.2 血清GM-CSF、HNP1-3、CD64與病情程度的相關性 Spearman相關性分析，血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平與新生兒敗血癥病情程度（賦值：非危重=1，危重=2，極危重=3）呈正相關（rs=0.72、0.74、0.81，均P＜0.001）。

2.3 血清GM-CSF、HNP1-3、CD64對抗感染轉歸結局的影響 以新生兒敗血癥抗感染轉歸結局作為因變量（有效=0，無效=1），logistic回歸分析，校正前，病情程度、低體質量兒、早產、合并化膿性腦膜炎、血清GM-CSF、HNP1-3、CD64對新生兒敗血癥抗感染轉歸結局有獨立影響，校正病情程度、低體質量兒、早產、合并化膿性腦膜炎等其他因素后，血清GM-CSF、HNP1-3、CD64仍對新生兒敗血癥抗感染轉歸結局有獨立影響（P＜0.05），見表2。

表2 新生兒敗血癥92例血清GM-CSF、HNP1-3、CD64對抗感染轉歸結局的影響

2.4 血清GM-CSF、HNP1-3、CD64對抗感染轉歸結局的預測價值 以無效組作為陽性樣本，有效組作為陰性樣本，繪制ROC曲線，結果顯示，血清GMCSF、HNP1-3、CD64聯合預測新生兒抗感染轉歸結局的AUC為0.91［95%CI：（0.83，0.96）］，大于各指標單獨預測0.84［95%CI：（0.75，0.91）］、0.80［95%CI：（0.70，0.87）］、0.77［95%CI：（0.67，0.85）］，靈敏度為91.30%，特異度為81.16%，見圖1。

圖1 新生兒敗血癥92例血清粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）、人中性粒細胞多肽1-3（HNP1-3）、中性粒細胞表面抗原CD64對抗感染轉歸結局的預測價值

3 討論

新生兒敗血癥是全身感染性疾病，相關資料數據顯示，活產新生兒中約有0.1%～0.4%發生敗血癥，病死率高達17%～45%，嚴重威脅新生兒生命安全，防治形勢極為嚴峻［9-10］。合理的抗感染治療是新生兒敗血癥病情轉歸的關鍵所在，及早預測抗感染轉歸結局則對調整治療方案、提高治療效果、改善預后至關重要。

GM-CSF主要由炎癥反應過程中損傷的內皮細胞分泌，主要作用是加快前粒細胞、前單核細胞分化為成粒細胞、單核細胞，促進中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、巨噬細胞的增殖、分化，是反映單核-巨噬細胞生長、增殖、分化的敏感指標［11］。本研究結果顯示，血清GM-CSF水平與新生兒敗血癥病情程度呈正相關，對抗感染轉歸結局有獨立影響。分析原因，新生兒敗血癥病兒體內的淋巴細胞處于異常活化狀態，細胞免疫遭到顯著抑制，造成T淋巴細胞、B淋巴細胞調節紊亂，導致GM-CSF表達增多，其體內炎癥反應、免疫紊亂越嚴重，GM-CSF表達上調趨勢越顯著，從而明顯增加治療難度［12］。同時，國內外報道均證實，細菌及其內毒素等代謝產物是刺激GM-CSF生成的主要物質［13-14］，故其在新生兒敗血癥發生與治療過程中會隨著細菌及其內毒素的產生、增殖、減少、消退等出現相應改變。因此，血清GMCSF可作為預測新生兒敗血病人抗感染轉歸結局的重要指標，臨床還可針對其水平變化采取合理的防治措施，為強化療效、改善預后奠定良好基礎。

HNP1-3是中性粒細胞內嗜天青顆粒的主要成分，作為一種抗菌肽，具有直接殺傷多種細菌、真菌、病毒作用。Akdo?an等［15］報道指出，敗血癥性關節炎病人滑液吸出物中HNP1-3水平顯著高于非感染性關節炎。本研究數據顯示，血清HNP1-3水平與新生兒敗血癥病情程度具有正相關關系，且無效組血清HNP1-3水平高于有效組，可見血清HNP1-3水平不僅與新生兒敗血癥病情程度有關，還會影響抗感染轉歸。正常生理情況下其在血液中的濃度較低，在機體出現急性感染刺激后向細胞外大量分泌，促使其濃度大幅度增加，與機體組織細胞炎性損傷密切相關［16］。同時，在機體因病原體感染出現局部或全身炎癥反應后，HNP1-3會結合抗原抑制病原體在黏膜上皮細胞黏附、增殖，提高機體病原抗原的免疫原性，加快抗原遞呈細胞的遞呈加工過程，發揮抗感染作用，在此過程中為滿足機體抗感染需求，促使其含量呈現代償性增高趨勢，病情越嚴重，代償性增高越明顯［17］。另外，本研究發現，血清HNP1-3對新生兒敗血癥抗感染轉歸結局具有獨立影響，提示臨床可將其用于預測新生兒敗血癥抗感染轉歸中，還有利于及時調整治療方案，為改善預后創造良好條件。

中性粒細胞CD64是免疫球蛋白G抗體表面Fc段高親和力受體，研究表明，其血清水平會在機體出現炎癥侵襲或細菌感染后的1～6 h內迅速升高，且能夠維持24 h左右，在多種感染性疾病中具有良好檢測價值［18-19］。本研究顯示，血清CD64水平不僅與新生兒敗血癥病情程度呈正相關，還對抗感染轉歸結局有獨立影響。原因在于以下方面：正常新生兒體內的CD64僅在中性粒細胞表面少量表達，在細菌侵入機體后，細菌細胞壁的脂多糖和粒細胞集落刺激因子、干擾素等物質均會激活中性粒細胞表面的CD64表達，導致其含量明顯升高，且其在中性粒細胞吞噬細菌作用中扮演重要角色，還會結合配合啟動機體免疫作用，造成病情加劇，顯著增加抗感染治療難度［20］。因此，臨床可通過檢測血清CD64水平為制定抗感染措施、及早預測抗感染轉歸提供參考依據。

本研究經ROC曲線分析證實，血清GM-CSF、HNP1-3、CD64均對新生兒敗血癥抗感染轉歸結局有良好預測價值，且三者聯合預測價值更為可靠，為臨床提供新思路。此外，本研究還發現，logistic回歸分析，校正前，病情程度、低體質量兒、早產對新生兒敗血癥抗感染轉歸結局有獨立影響，提示臨床還應關注這些因素對新生兒敗血癥抗感染轉歸結局的影響。但本研究納入樣本量偏少，可能導致數據偏倚，后續應繼續收集病例，作進一步分析，以獲取更為全面的數據支持。

綜上可知，血清GM-CSF、HNP1-3、CD64聯合預測新生兒敗血癥抗感染轉歸結局的價值較為可靠，且其血清水平對生存狀況有明顯影響，臨床可根據上述血清指標水平變化制定防治措施。