17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油高效液相色譜分析

王國強，李彥飛，張凱，馮澤騰，張小軍

(中農立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

烯草酮(clethodim)是由日本住友化學公司和美國Chevron 公司在1987 年聯合開發研制的一種高效、安全、高選擇性的環己烯酮類除草劑[1]，可用于防除大多數一年生及多年生的禾本科雜草，且對雙子葉作物安全。施藥后，禾本科雜草莖葉會將該除草劑迅速吸收并傳導至分生組織及莖尖，分生組織的活性被抑制，細胞被破壞分裂，最終導致雜草死亡[2]。烯草酮主要登記用于棉花、花生、大豆、煙草、油菜及果園等闊葉田防除硬草、早熟禾、馬唐、看麥娘、牛筋草、狗尾草、野燕麥和稗草等一年生禾本科雜草[3]。乙羧氟草醚(benzofluorfen)是由美國羅姆-哈斯公司開發的一種三氟甲基二苯醚類除草劑，具有殺草譜廣、活性高、毒性低等特點[4]，施藥后，被雜草吸收進入植物細胞內，在光照條件下，與細胞內的分子氯反應，生成對細胞具有毒性的化合物四吡咯，積聚后會使植物細胞膜完全消失，然后引起細胞內含物滲漏，最終導致雜草死亡。乙羧氟草醚主要登記用于小麥、大麥、花生、大豆、甘蔗及稻田防除婆婆納、繁縷、苘麻、豬秧秧和薺菜等闊葉雜草[5]。

近年來，烯草酮與乙羧氟草醚的復配，彌補了單劑的缺陷，降低了農民的使用成本，得到各公司廣泛推廣使用，但有關復配劑中2 者有效成分同時測定的方法未見報道[6-9]。基于此，本文采用高效液相色譜法開展了正、反相2 種同時檢測17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油中烯草酮和乙羧氟草醚的定量方法研究，旨在為該混配制劑提供一定的技術支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AL204 型電子分析天平(精度為0.000 1 g，梅特勒-托利多儀器有限公司)；TU-1901 型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；Agilent 1220 型高效液相色譜儀配紫外檢測器和色譜工作站(安捷倫科技有限公司)；KQ-500DE 型數控超聲波儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

冰乙酸和丙酮(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；二氯甲烷和正己烷(HPLC 級)，西班牙薩勞Scharlau 有限公司；超純水，實驗室自制；乙腈(HPLC 級)，賽默飛世爾科技有限公司；烯草酮鋰鹽標樣(質量分數99.1%)和乙羧氟草醚標樣(質量分數99.5%)，北京勤誠亦信科技開發有限公司；17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油(12%烯草酮+5%乙羧氟草醚)，實驗室自制。

1.2 色譜條件

正向色譜法：液相色譜柱：Syncronis Silica 不銹鋼柱(150 mm×4.6 mm，內裝5 μm C18填充物)(賽默飛世爾科技有限公司)；流動相：二氯甲烷-正己烷-冰乙酸(28∶70∶2，體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：230 nm；進樣體積：5.0μL。在上述色譜操作條件下，乙羧氟草醚和烯草酮的保留時間分別約為5.9、18.2 min(圖1)。

圖1 混標及試樣的高效液相色譜圖

反相色譜法：液相色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18不銹鋼柱(250 mm×4.6 mm，內裝5 μm C18填充物)(美國安捷倫科技公司)；流動相：乙腈-1%冰乙酸水溶液(80∶20，體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：230nm；進樣體積：5.0μL。在上述色譜操作條件下，乙羧氟草醚和烯草酮的保留時間分別約為11.9、13.9 min(圖1)。

1.3 溶液的配制

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取烯草酮鋰鹽標樣各0.05 g(精確至0.000 2 g)，乙羧氟草醚標樣各0.02 g(精確至0.000 2 g)，分別置于50 mL 容量瓶中，正相方法用流動相溶解并定容至刻度，反相方法用先用3 滴冰乙酸和少量丙酮溶液振搖使之溶解后，再用丙酮溶液定容至刻度，然后均搖勻，脫氣后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油各0.4 g(精確至0.000 2 g)，分別置于50 mL 容量瓶中，正相方法用流動相溶解并定容至刻度，反相方法用丙酮溶解并定容至刻度，然后均搖勻，脫氣后備用。

1.4 測定

在上述操作條件下，正相方法和反相方法均待儀器基線穩定后，連續進樣數針標樣溶液，當相鄰2 針標樣峰面積的相對變化小于1.5%時，按照進樣次序為標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行分離和測定。

1.5 計算

試樣中烯草酮(或乙羧氟草醚)的質量分數X(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)平均峰面積值；A2為試樣溶液中烯草酮(或乙羧氟草醚)平均峰面積值；m1為烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)標樣的質量(g)；m2為試樣的質量(g)；P為標樣中烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的質量分數(%)；烯草酮鋰鹽折算為烯草酮的系數為0.983；

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

在17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油有效成分質量分數檢測中，正相方法和反相方法分別通過不斷的調整流動相中二氯甲烷、正己烷、冰乙酸和甲醇、乙腈、0.1%冰乙酸水溶液的不同配制比例，觀察樣品峰型變化和保留時間，依次進行篩選。最終檢測結果表明，正相檢測在流速1.0 mL/min，二氯甲烷-正己烷-冰乙酸的體積比為28∶70∶2 時；反相檢測在流速1.0 mL/min，乙腈-1%乙酸水溶液的體積比為80∶20 時，烯草酮和乙羧氟草醚的出峰時間相對適中，出峰峰型尖銳對稱無拖尾，分離效果好且能較好的滿足分析要求。

2.2 檢測波長的選擇

利用紫外可見分光光度計分別對乙羧氟草醚和烯草酮鋰鹽標樣溶液在190～400 nm 波長下進行紫外掃描，得到關于乙羧氟草醚和烯草酮鋰鹽的最大吸收波長與相關濃度響應值的紫外吸收光譜圖(圖2)。經驗證，乙羧氟草醚和烯草酮鋰鹽在波長為230 nm 時均有較大紫外吸收，得到較好的峰型且能夠使主峰與雜質峰更好的分離。因此，最后選定本分析方法的檢測波長為230 nm。

圖2 烯草酮鋰鹽及乙羧氟草醚的紫外吸收譜圖

2.3 分析方法的線性相關性

根據1.3 節方法分別配制系列質量濃度烯草酮鋰鹽和乙羧氟草醚標準溶液，采用上述2 種方法分別測定峰面積，每個質量濃度樣品進樣3 次。以烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的進樣質量濃度(x)為橫坐標，以烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的峰面積(y)為縱坐標做圖，得烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的線性相關曲線。其正相線性方程分別為：y烯草酮鋰鹽=5 276.7x+480.21，y乙羧氟草醚=7 072.1x+38.402；相關系數分別為：r2烯草酮鋰鹽=0.999 5，r2乙羧氟草醚=0.999 5；其反相線性方程分別為：y烯草酮鋰鹽=5 433.4x+318.53，y乙羧氟草醚=7 699.6x+21.846；相關系數分別為：r2烯草酮鋰鹽=0.999 5，r2乙羧氟草醚=0.999 3，說明2 種方法在測定范圍內均呈現良好的線性范圍。

2.4 方法的精密度

從同一批17%的烯草酮·乙羧氟草醚乳油樣品中分別準確連續稱取5 個試樣，分別采用上述2 種方法進行分析，結果見表1。正相檢測中烯草酮和乙羧氟草醚標準偏差分別為0.02 和0.04，變異系數分別為0.18%、0.76%；反相檢測烯草酮和乙羧氟草醚標準偏差分別為0.03 和0.01，變異系數分別為0.29%、0.14%。說明2 種方法的精密度都能很好滿足工業分析的定量要求。

表1 分析方法的精密度試驗結果

2.5 方法的準確度

準確稱取5 個17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油試樣，均加入一定量的烯草酮鋰鹽標樣和乙羧氟草醚標樣，按照上述條件進樣分析，并計算其回收率，結果見表2。正反相結果均顯示烯草酮和乙羧氟草醚的平均回收率均較高，符合分析標準。

表2 分析方法的準確度試驗結果

3 結 論

本文采用高效液相色譜法建立了2 種能夠同時測定烯草酮和乙羧氟草醚混配制劑中的有效成分的定量分析方法。2 種檢測方法各有優劣，其中正相譜圖與反相譜圖相比雜峰更少一些；而反相條件下，計算所得的烯草酮的含量結果偏低，但均在允許范圍內。2 種方法分離效果良好，方法的準確度和精密度均較高，且簡單高效易操作，因此均可用于烯草酮和乙羧氟草醚復配制劑的質量控制，具有較強的實用價值和可行性。