益母草堿可溶性微針的制備與初步研究

陳健敏，蔡小真，朱丹虹，李金蘭，陳科元

（1.莆田學(xué)院藥學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，莆田 351100；2.藥物分析與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，莆田 351100；3.中藥質(zhì)量研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，澳門科技大學(xué)，澳門 999078）

益母草堿（leonurine)是從益母草中提取出來的一種有機(jī)胺類生物堿，具有廣泛的藥理活性，包括抗血小板聚集、抗纖維化、抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛、降血脂、保護(hù)神經(jīng)和心肌等[1-2]。然而，目前益母草堿的相關(guān)制劑研究仍然處于臨床前或臨床研究階段，尚未有上市產(chǎn)品。臨床和臨床前研究主要聚焦于益母草堿的口服制劑，但因其半衰期較短，腸道首過效應(yīng)（intestinal first pass effect，消除90%的益母草堿)等導(dǎo)致益母草堿絕對口服生物利用度非常低（大鼠為4.2%，狗為7.0%)，嚴(yán)重限制了口服制劑在臨床上的應(yīng)用[3]。注射劑可不經(jīng)過胃腸道代謝直接進(jìn)入體循環(huán)，生物利用度較高，但注射時會引起疼痛和創(chuàng)傷，而且益母草堿水溶性差難以制成針劑，廣泛應(yīng)用也受到一定限制。因此，開發(fā)滿足臨床需要的益母草堿的新劑型，對其臨床應(yīng)用具有深遠(yuǎn)的意義。

經(jīng)皮給藥系統(tǒng)（transdermal drug delivery systems，TDDS）是指藥物通過皮膚吸收，在局部或全身達(dá)到有效血藥濃度，實(shí)現(xiàn)預(yù)防或治療疾病的一種給藥方式[4]。與傳統(tǒng)給藥方式（口服和注射）相比，經(jīng)皮給藥系統(tǒng)具有很多優(yōu)勢，例如能避免腸道和肝臟的首過效應(yīng)，使用安全方便，無痛無創(chuàng)口等，在臨床上越來越受到患者的青睞[5]。然而，目前臨床上可用于經(jīng)皮給藥的藥物并不多，主要因?yàn)閭鹘y(tǒng)乳膏劑以及現(xiàn)代骨架型、膜控型貼劑等受皮膚角質(zhì)層的屏障作用，大部分藥物經(jīng)皮滲透的速率和效率較低[6-7]。益母草堿的水溶性差，較難通過皮膚屏障從而導(dǎo)致治療效果不理想[8]。可溶性微針（dissolving microneedles)是結(jié)合了皮下注射和經(jīng)皮給藥二者優(yōu)勢的一種新型經(jīng)皮給藥載體，是由針狀突起物排列而成的陣列，每根突起物長約為25～1 000 μm[9]。它將藥物包埋在針狀突起物內(nèi)，通過穿透角質(zhì)層，形成小孔道[10]，打破角質(zhì)層的屏障作用，藥物直接進(jìn)入皮內(nèi)，大大提高藥物的經(jīng)皮吸收率[11]。可溶性微針的尺寸微小，不易觸及皮下神經(jīng)，因此不會引起明顯的疼痛感；穿刺形成的細(xì)微通道可以在數(shù)小時內(nèi)自動愈合，不會造成出血和創(chuàng)傷；使用簡單方便，患者可以在家自行給藥[12]。正因?yàn)檫@些優(yōu)勢，可溶性微針已成為解決難溶性藥物經(jīng)皮遞送難題的有效載體。本文制備益母草堿可溶性微針來促進(jìn)藥物的經(jīng)皮吸收，通過考察微針的形態(tài)特征、力學(xué)強(qiáng)度、體外溶出、皮膚吸收率和皮膚安全性等指標(biāo)，初步建立益母草堿可溶性微針給藥體系，為其經(jīng)皮給藥制劑的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試劑 益母草堿（>98%)獲贈于中藥質(zhì)量研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（澳門科技大學(xué))；聚乙烯醇（PVA)、聚乙烯吡咯烷酮（PVP)、羅丹明B、亞甲基藍(lán)、三氯乙醛、無水乙醇、甲醇、磷酸二氫鈉·二水和磷酸氫二鈉·十二水均為分析純，購于上海晶純生物科技有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 微針力學(xué)強(qiáng)度測試儀（艾得堡儀器，Handpi-NK-50）、電子天平（上海卓精科技有限公司，BSM）、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，DHG-9240B）、智能透皮儀（北京新諾華儀器有限公司，YB-P6）、單反數(shù)碼相機(jī)（佳能，700D）、高效液相色譜儀（美國Agilent Technologies 公司，1200 series）、體視顯微鏡（深圳賽克數(shù)碼科技開發(fā)有限公司，SK2500TSH）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物與皮膚模型 動物相關(guān)的方法與試驗(yàn)步驟均嚴(yán)格按照莆田學(xué)院動物倫理委員會的批件[2020（30）]執(zhí)行。雄性Sprauge-Dawley（SD）大鼠（200±10）g 購于福建省閩侯縣吳氏實(shí)驗(yàn)動物貿(mào)易有限公司，飼養(yǎng)在12 h 明暗循環(huán)，溫度為（22±1）℃，相對濕度為40%～60%的動物房中。大鼠離體皮膚模型制備流程如下：大鼠用5%水合氯醛溶液（劑量為0.7 mL/100 g）麻醉處死，再進(jìn)行脫毛處理，取腹部皮膚，去除皮下脂肪后，用pH 7.4 的磷酸緩沖溶液（PBS）洗凈，分裝于自封袋中，放入冰箱冷凍室（-20℃）儲藏備用。

1.4 分析方法的建立 參考文獻(xiàn)中的方法[13]，采用高效液相色譜法檢測樣品中的益母草堿含量，具體檢測條件如下。色譜柱：Agilent C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相:甲醇∶水=70∶30；流速:1.0 mL/min；檢測波長：277 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精密稱取益母草堿30 mg ，用甲醇定容至250 mL 容量瓶中，配成120 μg/mL 的益母草堿儲備液。用甲醇將儲備液分別稀釋成濃度為3.75、7.50、15.00、30.00、60.00 和120.00 μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按以上色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以益母草堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制線性回歸曲線，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=35 769X-90 856，R2=0.999 4，結(jié)果表明益母草堿在濃度范圍3.75～120.00 μg/mL 內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

1.5 微針的制備及含量測定 益母草堿可溶性微針的制備參考本課題組之前的方法[14]，分為普通可溶性微針（common dissolving microneedles，CDMNs）和針體載藥微針（tip loaded dissolving microneedles，TDMNs）2 種制備方法，如圖1 所示。分別配制含0.1%和0.2%益母草堿的高分子溶液（5%PVP+5%PVA），按以下流程制備CDMNs:將含藥的高分子溶液按一定量加入PDMS 微針模具中，然后離心讓溶液進(jìn)入模具微孔，再加入適量的溶液（總體積為500 μL），干燥脫模后得到針體和背襯均含藥的CDMNs。分別配制含1%和2%益母草堿的高分子溶液（5%PVP+5%PVA），按以下流程制備TDMNs：將含藥的高分子溶液50 μL 加入PDMS 微針模具中，然后離心讓溶液進(jìn)入模具微孔，溶劑揮發(fā)后，再加入適量的不含藥的高分子溶液（15%PVP+15%PVA），干燥脫模后得到針體含藥的TDMNs。為了考察藥物在CDMNs和TDMNs 兩種類型微針針體的分布情況，用刀片小心地將微針針體切下，分別將切下的針體和殘留的背襯溶解于適量PBS 中，采用高效液相色譜法檢測其中的益母草堿的含量。

圖1 益母草堿可溶性微針制備流程示意圖Fig 1 Schematic diagram of leonurine soluble microneedle preparation process

1.6 微針的力學(xué)強(qiáng)度及穿刺能力表征 采用PVP和PVA 混合物作為基質(zhì)材料制備的CDMNs 已被本課題組證實(shí)具有足夠的力學(xué)強(qiáng)度和穿刺能力[15]。因此，本部分采用本課題組之前報道的方法[16]，只對TDMNs 進(jìn)行力學(xué)強(qiáng)度測試。簡單來說，將TDMNs 針體朝上置于微針力學(xué)強(qiáng)度測試儀的測試臺上，用鋁制平底探頭（直徑10 mm)以0.5 mm/min 的恒定速度垂直向下移動至微針的尖端，記錄位移和力值，直至達(dá)到預(yù)設(shè)的最大位移（0.5 mm)。當(dāng)作用力達(dá)到5、10、15、20、25、30 、35 和40 N 時，用相機(jī)觀察并拍攝TDMNs 的形貌變化。為了測試TDMNs 體外穿刺能力，開展了鋁箔紙穿刺試驗(yàn)和鼠皮穿刺試驗(yàn)。將鋁箔紙（厚度:10 μm)放置在PDMS 微針模具上，再將TDMNs 置于鋁箔紙上，然后在其背部施加適當(dāng)?shù)膲毫Ρ３? min，取出鋁箔紙放置于白紙上，用2%亞甲基藍(lán)溶液涂抹鋁箔上的微孔，觀察染色液是否通過微孔而使白紙染色，最后用相機(jī)拍照記錄。取出冷凍保存的離體大鼠皮膚，用PBS 浸泡1 h 使其恢復(fù)活性，將皮膚墊在柔軟的橡膠片上，將TDMNs置于鼠皮上，用拇指按壓1 min 后取出TDMNs，鼠皮用2%亞甲基藍(lán)溶液染色1 min，觀察并拍照。按以下公式計算TDMNs 的穿刺效率（penetration efficiency，PE)，PE%=（染色孔數(shù)/微針數(shù)）×100%。

1.7 微針的體外溶出和模擬皮膚釋放 采用本課題組之前報道的方法研究益母草堿的體外溶出[17]，步驟如下：用雙面膠將CDMNs 或TDMNs 固定在塑料片上，然后針體朝下扣在Franz 透皮杯的接收池上，再將給藥池扣在塑料片上，夾上馬蹄鐵，然后往接收池中加入PBS 溶液。將Franz 透皮杯置于水浴中（37℃)，磁子以350 r/min 的速度攪拌，開始實(shí)驗(yàn)。在試驗(yàn)開始后的0.5、1、2、4、8 和16 min，分別從接收池中取出全部溶液，并立即加入等量的PBS。為了模擬藥物在皮膚中釋放，采用目前評價可溶性微針體外釋放的較為合理的方法[18]，以Parafilm 作為皮膚模型，將微針刺穿Parafilm 后形成一個半封閉體系，再按體外溶出試驗(yàn)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)開始后的1、2、3、4 和5 h，從接收池中取出全部溶液，并立即加入等量的PBS。所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3 次（n=3)，所得樣品均采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測。計算每個時間點(diǎn)的藥物累積釋放量，再將其對時間作圖。

1.8 微針的皮膚溶解及經(jīng)皮釋放 將活化的鼠皮平鋪在柔軟的橡膠板上，用拇指按壓微針使其刺入皮膚，然后將微針和鼠皮一起放置于1%的瓊脂上，以防止鼠皮水分過度流失而干燥變硬，更好的模擬體內(nèi)環(huán)境；分別在15、30 、60 min 后取出微針，在顯微鏡下觀察并拍照記錄。采用智能透皮儀研究CDMNs（或TDMNs）的經(jīng)皮釋放規(guī)律，具體步驟如下：將CDMNs 刺入皮膚后，將其和皮膚作為一個整體放置在接收池上，用透明膠帶固定，再扣上給藥池，夾上馬蹄鐵，然后往接收池中加入PBS 作為接收液。將Franz 透皮杯置于水浴中（37℃)，磁子以350 r/min 的速度攪拌，開始試驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)開始后的1、3、6、12 和24 h，從接收池中取出全部溶液，并立即加入等量的接收液。試驗(yàn)結(jié)束后，先用刮刀將鼠皮表面殘留的CDMNs 刮取，鼠皮表面再用接收液清洗，二者合并后，用適量接收液稀釋后待測。皮膚對藥物的吸收率=（A-B）/A×100%，其中A 為微針中總藥量；B 為未進(jìn)入皮膚的藥量。200 μL 含益母草堿500 μg 或1 000 μg 的懸濁液（含0.1% 羧甲基纖維素鈉）作為對照組，按上述步驟操作。

1.9 體內(nèi)皮膚水分流失（TEWL）實(shí)驗(yàn) 一般來說，皮膚若受損嚴(yán)重則表現(xiàn)出較高的TEWL 值，如果受損程度較小或皮膚完整則表現(xiàn)出較低的TEWL 值，因此可以利用TEWL 值的大小評價皮膚的受損程度和愈合情況[19]。在實(shí)驗(yàn)前1 d，利用剃毛刀將雄性大鼠腹部皮膚的毛發(fā)剃除，殘留毛發(fā)再使用脫毛膏處理。采用水合氯醛麻醉大鼠后，將TDMNs 作用于腹部皮膚，5 min 后移除，采用經(jīng)皮水分流失測試儀記錄每個固定時間點(diǎn)（0、10、30 min、1、2、3、4、5 和6 h）的經(jīng)皮水分流失（transepidermal water loss，TEWL）情況，并用單反數(shù)碼相機(jī)記錄大鼠腹部皮膚的恢復(fù)情況。將靠近TDMNs 作用位點(diǎn)的臨近部位皮膚作為空白對照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次（n=3)，TEWL 值以g/（m2·h)表示。

1.10 統(tǒng)計學(xué)處理 每個試驗(yàn)至少重復(fù)3 次（n=3)，結(jié)果用±s 表示。采用單因素方差分析（ANOVA）和學(xué)生t 檢驗(yàn)對有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，P<0.05 被認(rèn)為具有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 微針形貌表征及劑量控制 干燥脫模后，得到背襯平整、針型完整、針體形態(tài)飽滿的12×12 陣列（長寬為10 mm×10 mm)的CDMNs，每片微針陣列上有144 根針體，如圖2A 和2C 所示。每根針體為四棱錐形，棱錐高為680 μm，各針體之間的間距為600 μm。針體頂部的橫切面為四邊形，兩邊長約20 μm和10 μm，針體頂部面積約為200 μm2。為了更清楚的展示TDMNs 中藥物的分布，在含藥的高分子溶液中加入0.01%的羅丹明B，所制備的TDMNs 如圖2B 和2D 所示。TDMNs 的各個形貌特征均與CDMNs 相同，但藥物主要集中在微針的針體上，證明通過不同的工藝能夠?qū)⑺幬锔患卺橌w上。

圖2 CDMNs 和TDMNs 的形貌特征Fig 2 Morphological characteristics of CDMNs and TDMNs

為掌握微針的制備工藝對藥物分布的影響，對CDMNs 和TDMNs 的針體和背襯的載藥量情況進(jìn)行了分析，結(jié)果如表1 所示。0.1%CDMNs 的針體載藥量（tip drug loaded）和背襯載藥量（backing drug loaded）分別為（9.88±2.36)和（475.04±18.14）μg，二者之和為實(shí)際載藥量（actual drug loaded）（484.92±16.68）μg；理論載藥量（theoretical drug loaded）為500 μg，由此計算載藥效率（drug loading efficiency）為（96.98±3.33）%。1%TDMNs 的針體載藥量和背襯載藥量分別為（456.85±14.82）和（31.49±3.12）μg，載藥效率為（97.67±3.68）%。因0.1%CDMNs 和1%TDMNs 的投入總藥量相同，載藥效率方面沒有顯著差異，但是藥物在針體和背襯中的分布大大不同。1%TDMNs的針體載藥量是0.1%CDMNs 的46 倍，表明TDMNs能夠有效地將藥物富集在針體上，但因擴(kuò)散作用，也有少量藥物分布在背襯中。當(dāng)投藥量翻倍后，TDMNs和CDMNs 針體和背襯載藥量均按比例增加，表明可以通過控制投藥量來準(zhǔn)確控制微針中的藥物劑量。

表1 不同類型微針中的藥物分布和載藥效率（ ±s）Tab 1 Drug distribution and drug loading efficiency in different types of microneedles（ ±s）

表1 不同類型微針中的藥物分布和載藥效率（ ±s）Tab 1 Drug distribution and drug loading efficiency in different types of microneedles（ ±s）

組別 針體載藥量（μg) 背襯載藥量（μg) 實(shí)際載藥量（μg) 理論載藥量（μg) 載藥效率（%)0.1%CDMNs 9.88±2.36 475.04±18.14 484.92±16.68 500 96.98±3.33 0.2%CDMNs 24.35±4.28 958.03±27.25 992.26±24.33 1 000 99.23±2.43 1%TDMNs 456.85±14.82 31.49±3.12 488.34±18.43 500 97.67±3.68 2%TDMNs 913.71±26.38 72.54±5.66 986.25±22.64 1 000 98.62±2.26

2.2 微針的力學(xué)強(qiáng)度和穿刺能力 用微針力學(xué)強(qiáng)度測試儀對2%TDMNs 的力學(xué)強(qiáng)度進(jìn)行測試，結(jié)果如圖3A 所示。TDMNs 在20 N 及以內(nèi)的作用力下，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的變形，表明TDMNs 能夠承受至少20 N 的作用力；每片微針共有144 根針體，即每根針體能承受至少0.14 N 的壓力。隨著作用力的增大，TDMNs 的針體逐漸發(fā)生彎曲，但未發(fā)現(xiàn)微針折斷的情況，表明它有足夠的韌性。以鋁箔模擬皮膚進(jìn)行穿刺實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖3B 所示，在鋁箔上形成了微孔陣列。通過這些微孔，可以將亞甲基藍(lán)溶液染色到白紙上，如圖3C 所示，表明TDMNs 有效穿刺鋁箔，確實(shí)形成了144 個孔道，穿刺效率PE 為100%。TDMNs 作用于鼠皮的結(jié)果如圖3D 所示，微針針體有部分溶解，同時在鼠皮上留下了144 個微孔，亞甲基藍(lán)染色后每個孔都有著色，同時，在顯微鏡下可看到明顯的鼠皮被穿透后留下的孔洞，PE 為100%，表明微針有足夠的硬度可以穿刺皮膚、突破角質(zhì)層。

圖3 TDMNs 的力學(xué)強(qiáng)度測試及穿刺實(shí)驗(yàn)Fig 3 Mechanical strength test and puncture test of TDMNs

2.3 微針的體外溶出和在模擬皮膚中釋放 CDMNs和TDMNs 的體外溶出實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4A 和4B 所示。隨著時間的延長，1%TDMNs 中釋放的藥物逐漸增加，到8 min 時已基本完全釋放；0.1%CDMNs 中的藥物釋放更快，在4 min 時已基本完全釋放。在2%TDMNs 和0.2%CDMNs 中的藥物釋放也發(fā)現(xiàn)同樣的規(guī)律，主要原因可能是CDMNs 的針體和背襯都含藥物，藥物與釋放介質(zhì)接觸的面積較大，藥物溶出速率較快。從圖4B 可以看出，在3 min 內(nèi)CDMNs 和TDMNs 均有50%的藥物釋放，在8 min 藥物釋放率達(dá)到峰值，在95%左右。研究結(jié)果如圖4C 和4D 所示。對比同劑量的CDMNs 和TDMNs，發(fā)現(xiàn)TDMNs的釋放量在每個時間節(jié)點(diǎn)都比CDMNs 高，具有顯著性差異（P<0.05），這結(jié)果與體外溶出剛好相反。例如，如圖4C 所示，1%TDMNs在2 h 時已經(jīng)釋放約400 μg，而0.1%CDMNs 才釋放約256 μg，高劑量組也發(fā)現(xiàn)同樣的規(guī)律。導(dǎo)致這一現(xiàn)象的主要原因在于：當(dāng)微針針體穿刺模擬皮膚后，只有微針的針體直接暴露在接收液中，而TDMNs 針體上的藥物含量遠(yuǎn)高于CDMNs 針體上的藥物，所以導(dǎo)致藥物較快釋放。從圖4D 可以看出，TDMNs 在1.5 h 時釋放率達(dá)到50%，而CDMNs 在2 h 時才達(dá)到50%，不同劑量的TDMNs（或CDMNs）的藥物釋放率基本一致，沒有顯著性差異（P>0.05）；然而對比TDMNs 和CDMNs，發(fā)現(xiàn)TDMNs 的釋放率均顯著（P<0.05）高于CDMNs，表明針體載藥微針的藥物釋放率更高，更有利于藥物的遞送和釋放。

圖4 微針體外溶出和在模擬皮膚中釋放Fig 4 Microneedle dissolution in vitro and release in simulated skin

2.4 微針的皮膚溶解及皮膚吸收率 TDMNs 刺入皮膚后的溶解情況如圖5A 所示，發(fā)現(xiàn)微針刺入皮膚后隨著時間的延長而逐漸溶解，在30 min 時溶解接近一半，而到60 min 針體基本溶解完全。這表明TDMNs作用于皮膚至少需要停留60 min，才能保證藥物的有效釋放。TDMNs 和CDMNs 的經(jīng)皮釋放規(guī)律如圖5B 和5C 所示，TDMNs 藥物的釋放速率和釋放量均高于同等劑量的CDMNs，而同等劑量的懸濁液各個時間點(diǎn)的藥物濃度均低于檢測限，故無數(shù)據(jù)展示。如圖5B 所示，0.1%CDMNs 在1、3、6、12 和24 h 的釋放量均顯著低于1%的TDMNs（P<0.05），24 h 的累積滲透量為143.40 μg，只有TDMNs 的60%（241.64 μg）；0.2%CDMNs 在1、3、6、12 和24 h的釋放量均顯著低于2%的TDMNs（P<0.05），24 h的累積滲透量為236.08 μg，只有TDMNs 的50%（467.06 μg）。從圖5C 可以看出，TDMNs 的藥物遞送效率均顯著高于CDMNs（P<0.05），而同類型的微針之間沒有顯著性差異（P>0.05）。通過測試未進(jìn)入皮膚的殘留藥量，進(jìn)一步獲得1%TDMNs、2%TDMNs、0.1%CDMNs 和0.2%CDMNs 的藥物皮膚吸收率分別為（64.73±6.37）%、（63.83±5.92）%、（33.54±3.67）%和（27.26±2.42）%。一般透皮貼片的皮膚吸收率為3%～5%[20]，CDMNs 的吸收率是傳統(tǒng)的10 倍左右，而TDMNs 則高出了將近20 倍。

2.5 經(jīng)皮水分流失及皮膚愈合情況 TDMNs 作用于大鼠腹部皮膚后，測試TEWL 值并記錄皮膚的恢復(fù)情況，結(jié)果如圖6 所示。圖6A 表明，當(dāng)TDMNs 作用于大鼠皮膚后，皮膚的TEWL 值升高到（43.5±2.12）g/（m2·h），是空白對照組[（8.9±1.56）g/（m2·h）]的4.9 倍；從圖6B 可以明顯看出，微針作用后在皮膚表面形成了數(shù)百個微孔。隨著時間的延長，TEWL 值逐漸下降，但在4 h 之前，TDMNs 的TEWL 值仍然顯著高于空白對照組（P<0.05），表明皮膚在逐漸的愈合；從圖6B 也可以看出微針作用形成的微孔逐漸愈合。當(dāng)時間延長至5 h 后，TDMNs 的TEWL 值[（11.25±1.36）g/（m2·h）]與空白對照組[（10.25±1.27）g/（m2·h）]已經(jīng)沒有顯著性差異（P>0.05），表明皮膚的角質(zhì)層已基本恢復(fù)了屏障作用；6 h 時TDMNs 的TEWL 值已恢復(fù)正常水平。另外，在6 h 后，皮膚上的微孔也已肉眼不可見，而且沒有明顯的紅腫現(xiàn)象。

圖6 經(jīng)皮水分流失及皮膚愈合情況Fig 6 TEWL and skin healing

3 討論

本文成功制備了2 種類型的益母草堿可溶性微針，并對其基本理化性質(zhì)和經(jīng)皮給藥特性進(jìn)行了表征和研究。制備可溶性微針的材料可分為韌性材料和脆性材料2 類，研究表明韌性材料制得的微針平整度不理想，且產(chǎn)生皺縮現(xiàn)象，而脆性材料制備出來的微針有較大的硬度但容易斷裂，使用單一材料制備的微針都存在一定缺陷[21]，同時有研究證明皮膚穿透所需的力小于0.1 N/針[22]，而本文制得的兩種可溶性都采用了PVA（韌性材料）和PVP（脆性材料）混合材料作為基質(zhì)，使其具有足夠的韌性和強(qiáng)度，并且TDMNs 每根針體能承受至少0.14 N 的壓力，表明了本文所制備的微針有足夠的力學(xué)強(qiáng)度且能有效地刺入模擬皮膚和大鼠皮膚。微針中的益母草堿能有效地在不同媒介中釋放，而TDMNs 在大鼠皮膚中的吸收率高達(dá)63%左右，表明了TDMNs科研大大促進(jìn)了益母草堿的經(jīng)皮吸收，而益母草堿在高血脂小鼠模型改善實(shí)驗(yàn)中的高劑量為20 mg/（kg·d）[23]，小鼠按20 g 計算，每次給藥只需要益母草堿400 μg，因此一片TDMNs 即可滿足動物實(shí)驗(yàn)的劑量要求，該研究的結(jié)果為接下去的動物實(shí)驗(yàn)提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐。當(dāng)TDMNs 作用于大鼠皮膚后，皮膚的TEWL 值升高，表明微針打破了皮膚的角質(zhì)層的屏障作用，在5～6 h 后皮膚的TEWL 值即恢復(fù)到正常水平，且未發(fā)現(xiàn)明顯的紅腫現(xiàn)象，表明皮膚已恢復(fù)完整性，這些結(jié)果都與文獻(xiàn)報道的結(jié)果一致[24-25]，同時表明了TDMNs 對于皮膚是相對安全的。以上結(jié)果表明，本文制備的益母草堿可溶性微針是一種有潛力的新型經(jīng)皮給藥制劑，為益母草堿的臨床應(yīng)用提供了新的思路和途徑。接下來本課題組將研究益母草堿可溶性微針的藥動學(xué)，并構(gòu)建高血脂動物模型開展藥效學(xué)研究。