高效液相色譜法測定嬰幼兒輔食（米粉）中維生素B2的不確定度評(píng)定

◎ 鐘 雪，鄒 璐，孟春楊，周貽兵，劉利亞

（貴州省疾病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550004）

維生素B2是一種水溶性維生素，若人體內(nèi)缺乏可導(dǎo)致代謝受阻。由于嬰幼兒輔食米粉中維生素B2含量少，往往需要添加維生素B2成品[1]。

目前，測定維生素B2的方法包括HPLC-熒光檢測法[2]、HPLC-紫外檢測法[3]、HPLC-MS/MS法[4-5]，通過不確定度的評(píng)定，可以明確對(duì)測試結(jié)果有重要影響的分量，提高測定數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。本文采用高效液相色譜-熒光檢測法，對(duì)嬰幼兒輔食米粉中維生素B2的含量進(jìn)行了測定，對(duì)結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)估。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

維生素B2標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.3%）；高效液相色譜儀（美國Waters公司）；BP211D型電子天平（德國Satorius公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素B2的測定》（GB 5009.85—2016）中第一法：高效液相色譜法測定。

1.3 不確定度來源分析

①測量重復(fù)性。②標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。③標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合。④樣品稱量和定容。⑤前處理過程。

2 結(jié)果討論

2.1 不確定度評(píng)定

2.1.1 重復(fù)測量引入的不確定度

樣品重復(fù)稱量6次進(jìn)行測定，維生素B2含量分別為0.510、0.522、0.470、0.531、0.521、0.476 mg/100 g，平均含量為0.505 mg/100 g，單次測量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為重復(fù)測量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品引入的不確定度

（1）稱量引入的不確定度。稱量10.1 mg維生素B2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，根據(jù)天平檢定證書，最大允許誤差為0.05 mg不確定度，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.002 48。

（2）定容儲(chǔ)備液引入的不確定度。該過程的不確定度主要來源于容量瓶（V=100 mL）的允差和溫度變化。采用100 mL容量瓶（A級(jí)），20 ℃時(shí)容量允差為±0.10 mL，定容引入的不確定度溫度校正引入的不確定為0.0606mL。標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.07307。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.0007307。

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入不確定度。玻璃量器的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度如表1所示。容量器具引入的不確定度=0.006 48；溫度校正引入的不確定度=0.001 5；配制過程引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.006 65。

表1 各玻璃量器的容量允差表

（4）標(biāo)準(zhǔn)品純度引入的不確定度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品證書，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度為99.3%，U=1.0%，k=2，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。標(biāo)準(zhǔn)品引入的相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)工作液重復(fù)測定3次，對(duì)應(yīng)峰面積見表2。

表2 維生素B2標(biāo)準(zhǔn)曲線表

標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)偏差用貝塞爾公式進(jìn)行計(jì)算：

將表2數(shù)據(jù)代入式（1），計(jì)算得SR≈109 108。

標(biāo)準(zhǔn)工作曲線用線性最小二乘法擬合，不確定度計(jì)算如下：

式中：

p ——重復(fù)測定次數(shù)；

——維生素B2含量的算術(shù)平均值；

xi——標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)的質(zhì)量濃度；

——系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度的平均值。

上述各值代入式（2）可得u2=0.004 652，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.1.4 樣品稱量和定容引入的不確定度

準(zhǔn)確稱量3g平行樣，平均稱樣量：

天平檢定證書給出的最大允許誤差為0.000 5 g，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

試樣酶解后，將酶解液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，其中溫度校正引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

100 mL容量瓶（A級(jí)）的容量允差為±0.10 mL，則：

不確定度為：

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.1.5 前處理過程引入的不確定度

采用加標(biāo)回收評(píng)估前處理過程引入的不確定度，回收率分別為84.4%、82.8%、79.6%、80.2%、84.1%、81.5%，平均值為82.1%，SW=0.02，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.2 合成不確定度

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3 擴(kuò)展不確定度

取置信概率p=95%，置信因子k=2，則擴(kuò)展不確定度為U=u×k=0.019 3×2=0.038 6 mg/100 g，嬰幼兒輔食（米粉）中維生素B2結(jié)果為（0.505±0.038 6）mg/100 g。

3 結(jié)語

通過高效液相色譜法，本文對(duì)嬰幼兒輔食（米粉）中所含維生素B2的檢測不確定度進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合對(duì)結(jié)果的影響最為顯著，其次是標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，樣品的稱量和定容對(duì)結(jié)果影響最小。