miR-144-3p/SLC7A11軸通過調控鐵死亡增強卵巢癌細胞對順鉑的敏感性*

廖鳳兒， 陶瑩， 駱婕， 李筠， 郭琴

miR-144-3p/SLC7A11軸通過調控鐵死亡增強卵巢癌細胞對順鉑的敏感性*

廖鳳兒， 陶瑩， 駱婕， 李筠， 郭琴△

（廣東藥科大學附屬第一醫院婦產科，廣東 廣州 510062）

探討微小RNA-144-3p（microRNA-144-3p， miR-144-3p）在卵巢癌細胞對順鉑耐藥中的作用并分析其作用機制與溶質載體家族7成員11（solute carrier family 7 member 11， SLC7A11）和鐵死亡是否有關。將miR-144-3p mimic轉染入耐順鉑人卵巢癌細胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP后，RT-qPCR法檢測miR-144-3p的表達豐度；CCK-8法檢測細胞對順鉑的敏感性；集落形成實驗測定細胞增殖情況；試劑盒法評估細胞內丙二醛（malondialdehyde， MDA）和谷胱甘肽（glutathione， GSH）的水平；Fe2+探針及活性氧簇（reactive oxygen species， ROS）熒光探針檢測細胞內Fe2+含量及ROS水平；透射電子顯微鏡觀察線粒體形態；雙螢光素酶報告基因實驗驗證miR-144-3p與SLC7A11之間的靶向結合。建立耐藥細胞株A2780/DDP異種移植瘤模型，體內評估miR-144-3p對腫瘤生長的影響。耐藥細胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP中的miR-144-3p表達顯著低于親本細胞株A2780和SKOV3（<0.05）。轉染miR-144-3p mimic可抑制細胞增殖，增強耐藥細胞株對順鉑的敏感性（<0.01）。雙螢光素酶報告基因實驗結果顯示SLC7A11是miR-144-3p的作用靶點。過表達SLC7A11可通過鐵死亡途徑逆轉miR-144-3p對細胞增殖及化療敏感性的作用（<0.05）。異種移植瘤實驗結果表明miR-144-3p可顯著抑制瘤體生長，抑制SLC7A11及谷胱甘肽過氧化物酶4（glutathione peroxidase 4， GPX4）蛋白表達（<0.01），提高4-羥基壬烯醛（4-hydroxynonenal， 4-HNE）水平（<0.01）。miR-144-3p通過靶向SLC7A11而增強耐藥卵巢癌細胞對順鉑的敏感性，其作用機制可能涉及鐵死亡過程。

微小RNA-144-3p；卵巢癌；順鉑耐藥；鐵死亡；溶質載體家族7成員11

卵巢癌是高發于50歲以上女性的常見生殖系統惡性腫瘤之一；由于早期癥狀不顯著，多數患者在首診時已經處于中晚期［1］。鉑類藥物為主的基礎化療對于乳腺癌治療具有重要的臨床意義，但由于腫瘤的異質性和耐藥性，治療效果不盡如人意，預后不佳，且增加了患者的痛苦及治療成本［1-3］。關于化療耐藥的成因、機制以及尋找有效的化療耐藥逆轉方法一直是腫瘤基礎及臨床研究的重要課題。大量的研究表明，微小RNA（microRNA， miRNA， miR）可通過調節腫瘤細胞中相關基因的表達和復雜的信號通路，影響腫瘤細胞對多種化療藥物的敏感性［4-5］。miR-144-3p是miR-144/miR-451家族的成員之一，參與調控多種生物學過程［6］，且研究顯示其在肝癌［7］、結直腸癌［8］、宮頸癌［9］以及卵巢癌［10］等多種腫瘤中表達水平較低，可通過多種靶基因調控腫瘤的發展進程。且在卵巢癌細胞SKOV3中，長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA， lncRNA） HCG11 （HLA complex group 11）可與miR-144-3p/PBX3競爭性內源RNA（competitive endogenous RNA， ceRNA）網絡，調控癌細胞的增殖及遷移［10］。此外，淫羊藿苷可上調miR-144-3p的表達，進而靶向胰島素樣生長因子2受體（insulin-like growth factor 2 receptor， IGF2R）抑制卵巢癌細胞的增殖和遷移，抑制腫瘤的進展［11］。但miR-144-3p對卵巢癌細胞順鉑敏感性的影響及具體作用機制尚未有系統明確的闡釋。因此，本研究選取卵巢癌耐藥細胞系A2780/DDP和SKOV3/DDP（為人卵巢癌細胞系A2780和SKOV3經長期順鉑刺激誘導建立的耐順鉑卵巢癌細胞系），通過轉染miR-144-3p mimic探討其對卵巢癌細胞順鉑耐藥性的影響，同時從細胞鐵死亡的角度初步分析其可能的作用機制。

材料和方法

1　材料與試劑

A2780、SKOV3及耐藥株A2780/DDP和SKOV3/DDP為本實驗室細胞庫留存；細胞培養用RPMI-1640培養液（Sigma-Aldrich）及胎牛血清（武漢三利生物技術有限公司）；注射用順鉑（山東齊魯制藥有限公司）；鐵死亡抑制劑Ferrostatin-1（Fer-1）和鐵螯合劑甲磺酸去鐵胺（desferrioxamine mesylate， DFO）購自MedChemExpress；Hiperfect相關轉染試劑（Qiagen）；溶質載體家族7成員11（solute carrier family 7 member 11， SLC7A11）、谷胱甘肽過氧化物酶4（glutathione peroxidase 4， GPX4）、4-羥基壬烯醛（4-hydroxynonenal， 4-HNE）和GAPDH抗體購于Abcam；CCK-8細胞計數、丙二醛（malondialdehyde， MDA）檢測及谷胱甘肽（glutathione， GSH）檢測試劑盒（廣州優寧維生物科技有限公司）；Fe2+探針檢測試劑購于DojinDo；miR-144-3p mimic及其陰性對照（negative control， NC）miRNA、SLC7A11-3'UTR螢光素酶表達載體［SLC7A11-野生型（wild-type， WT）-3'UTR和SLC7A11-突變型（mutant， MUT）-3'UTR］、SLC7A11過表達質粒（pcDNA-SLC7A11，圖3中標示分組時簡化為SLC7A11）及其對照質粒（pcDNA）由廣州金唯智生物科技有限公司提供。

2　實驗方法

2.1細胞培養及轉染卵巢癌A2780、SKOV3及A2780/DDP、SKOV3/DDP細胞株均培養于含10% FBS和1%青-鏈霉素的RPMI-1640細胞培養液中。為維持耐藥性，A2780/DDP的培養液中添加1 mg/L的順鉑。細胞培養箱環境均為37 ℃、5% CO2。培養過程中需定期換液，匯合至約80%時消化傳代。

在A2780/DDP或SKOV3/DDP細胞行轉染前1周，用正常培養基（不含順鉑）培養。參考說明書步驟，用Hiperfect轉染試劑將miR-144-3p mimic/NC和（或）pcDNA-SLC7A11/pcDNA轉入細胞中培養48 h。經鑒定轉染效率后，將轉染的細胞用于后續實驗。

2.2CCK-8實驗將生長良好的卵巢癌細胞接種至96孔板中，接種密度為1×108/L，各組細胞用或不用Fer-1（5 μmol/L）和DFO（5 μmol/L）處理30 min，再培養48 h，向每孔加入10 μL CCK-8試劑繼續在細胞培養箱中孵育2 h。用酶標儀在波長450 nm處測定各孔的吸光度（）值，參考標準曲線計算細胞的相對活力并評估其對順鉑的敏感性。

2.3集落形成實驗各組細胞經相應處理后，消化接種至6孔板中，接種密度為每孔500個，細胞繼續置于培養箱中培養14 d，期間定時更換培養液。取出培養板，加4%多聚甲醛固定后經結晶紫染液染色，沖洗后于倒置相差顯微鏡下觀察細胞克隆形成，并拍照進行定量分析。

2.4雙螢光素酶報告基因實驗采用雙螢光素酶報告基因實驗分析miR-144-3p與SLC7A11間的靶向結合。利用HiPerFect轉染試劑將SLC7A11-3'UTR螢光素酶表達載體（SLC7A11-WT-3'UTR/SLC7A11-MUT-3'UTR）和（或）miR-144-3p mimic轉入卵巢癌細胞中。依據說明書，用發光檢測儀測定螢光素酶反應強度。報告基因活性以螢火蟲螢光素酶活性強度與內參照海腎螢光素酶活性強度的比值來表示。

2.5MDA及GSH檢測各組細胞經相應處理后，離心收集細胞，PBS洗滌后重懸，超聲破碎并收集細胞上清液，依據試劑盒操作說明加入相應的工作液孵育，酶標儀測定各孔的吸光度（）值。參考標準曲線計算MDA及GSH的含量。

2.6透射電子顯微鏡檢測通過透射電子顯微鏡觀察線粒體形態，各組細胞經相應處理后于2.5%戊二醛中4 ℃固定過夜，PBS洗滌，加1% OsO4進一步處理2 h，經過乙醇梯度脫水、滲透及包埋制成超薄切片，切片經尿酸乙酯和檸檬酸鉛雙重染色后，透射電子顯微鏡下觀察線粒體的結構并拍照。

2.7Fe2+含量及ROS檢測細胞經PBS洗滌，加FerroOrange工作液（檢測細胞內Fe2+含量）或ROS綠色熒光探針DCFH-DA（ROS活性檢測）孵育，熒光顯微鏡下觀察并拍照進行統計學定量分析。

2.8裸鼠異種移植瘤模型將攜帶miR-NC或miR-144-3p mimic的慢病毒轉染至A2780/DDP細胞，并用嘌呤霉素篩選穩定轉染的細胞。18只6周齡裸鼠［廣州賽業百沐生物科技有限公司SCXK（粵）2020-0055］隨機分為3組：對照（control，ctrl組（接種A2780/DDP細胞）、NC組（接種轉染miR-NC的A2780/DDP細胞）及mimic組（接種轉染miR-144-3p mimic的A2780/DDP細胞），每組6只。將經過相應處理的三組細胞分別注射至裸鼠頸背部皮下（每只接種3.5×106個細胞），所有裸鼠接受注射后于標準條件下繼續飼養30天，每天腹腔注射2 mg/kg順鉑。定期測量腫瘤大小，至第30天犧牲裸鼠，取出瘤體稱重，測量瘤體大小，同時提取腫瘤組織蛋白，以備后續分析使用。

2.9Western blot實驗用RIPA法提取細胞及瘤體組織中的蛋白，取等量蛋白上樣進行Western blot電泳并轉印至PVDF膜，加5%的脫脂奶粉-TBST封閉90 min。依據說明書，加入Ⅰ抗SLC7A11（1∶2 000）、GPX4（1∶1 000）、4-HNE（1∶4 000）和GAPDH（1∶10 000）4 ℃過夜，洗滌膜后，加HRP-標記的羊抗兔Ⅱ抗（1∶4 000）進行孵育（25 ℃，2 h）。TBST洗滌后，將PVDF膜轉移至暗室中經ECL化學發光顯影、定影并對所得結果進行蛋白表達的定量分析。

2.10RT-qPCR實驗各組細胞經相應處理后采用Trizol試劑提取細胞總RNA，取2 μg總RNA經逆轉錄生成cDNA。用以模板、引物和Taq PCR Master Mix試劑構成反應體系行RT-qPCR。反應程序為：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，40個循環。記錄Ct值，分別以U6和GAPDH為內參照，采用2-ΔΔCt法評估miR-144-3p和SLC7A11 mRNA的相對表達水平。miR-144-3p的正向引物序列為5'-GCAGAGTACAGTATAGATGATG-3'，反向引物序列為5'-TGCAGGGTCCGAGGT-3'；U6的正向引物序列為5'-CGCTTCGGCAGCACATATACTA-3'，反向引物序列為5'-GGAACGCTTCACGAATTTGC-3'；SLC7A11的正向引物序列為5'-TTGTTTTGCACCCTTTGACAAT-3'；反向引物序列為5'-GACGATGCATATCTGGGCATT-3'；GAPDH的正向引物序列為5'-CATGTTCGTCATGGGTGTGAA-3'，反向引物序列為5'-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3'。

3　統計學處理

以GraphPad Prism 8.3軟件行統計學分析和制圖。計量資料結果表示為均數±標準差（mean±SD）。兩組均數間比較用檢驗；多組間兩兩比較則用單因素方差分析事后Bonferroni檢驗。以<0.05為差異有統計學意義。

結果

1　miR-144-3p過表達可提高乳腺癌順鉑耐藥細胞化療敏感性

與親本細胞相比，CCK-8檢測結果顯示順鉑對A2780/DDP和SKOV3/DDP細胞活力的抑制作用顯著降低（<0.05）；同時，順鉑耐藥細胞中miR-144-3p表達顯著降低（<0.05），與NC組相比，轉染miR-144-3p mimic可顯著增強A2780/DDP和SKOV3/DDP細胞對順鉑的敏感性（<0.01），提高順鉑對細胞集落形成的抑制效果（<0.01），見圖1。

Figure 1.　miR-144-3p enhanced the sensitivity of cisplatin-resistant ovarian cancer cells to cisplatin. A： comparison of cisplatin sensitivity of A2780， A2780/DDP， SKOV3 and SKOV3/DDP cells； B： the expression of miR-144-3p in A2780， A2780/DDP， SKOV3 and SKOV3/DDP cells； C： transfection with miR-144-3p mimic increased the sensitivity of A2780/DDP and SKOV3/DDP cells to cisplatin； D： detection of transfection efficiency； E： transfection with miR-144-3p mimic inhibited colony formation of A2780/DDP and SKOV3/DDP cells. Mean±SD. n=3. #P<0.05 vs A2780 cells；△P<0.05 vs SKOV3 cells；**P<0.01 vs NC group.

2　miR-144-3p與SLC7A11的靶向結合

TargetScan及miRDB數據庫檢索顯示miR-144-3p與SLC7A11之間有潛在的結合位點，序列信息如圖2A所示。螢光素酶活性結果顯示，共轉染SLCTA11-WT-3'UTR和miR-144-3p mimic可顯著降低A2780/DDP細胞內螢光素酶的活性（<0.01），表明miR-144-3p可靶向結合SLC7A11，見圖2B。

為確證miR-144-3p與SLC7A11之間的調控關系，本實驗采用RT-qPCR及Western blot評估了A2780/DDP細胞中miR-144-3p對SLC7A11表達的影響。檢測結果表明，A2780/DDP細胞中轉入miR-144-3p mimic后，SLC7A11的mRNA和蛋白表達水平均顯著降低（<0.01），見圖2C、D。同時利用R語言分析TCGA數據庫中卵巢癌的mRNA表達譜信息，結果顯示卵巢癌組織中SLC7A11的表達較正常卵巢組織顯著升高（<0.01），圖2E。結果提示miR-144-3p可負調控SLC7A11的表達，影響卵巢癌的進展。

Figure 2.　miR-144-3p directly targeted SLC7A11 in A2780/DDP cells. A： predicted SLC7A11 3'UTR binding site for miR-144-3p； B： relative luciferase activity in transfected A2780/DDP cells； C and D： the mRNA （C） and protein （D） expression levels of SLC7A11 in A2780/DDP cells after transfected with miR-144-3p mimic； E： the SLC7A11 mRNA expression profile of ovarian cancer in TCGA database. Mean±SD. n=3. **P<0.01 vs NC group；△△P<0.01 vs normal tissue.

3　miR-144-3p調控SLC7A11介導的鐵死亡增強A2780/DDP細胞對順鉑的敏感性

為研究miR-144-3p增強A2780/DDP細胞對順鉑的敏感性與SLC7A11之間的相關性及可能的作用機制，本實驗在A2780/DDP細胞中同時轉入miR-144-3p mimic和pcDNA-SLC7A11。轉染效率檢測顯示，與mimic+pcDNA組相比，mimic+SLC7A11組A2780/DDP細胞中SLC7A11的mRNA及蛋白表達水平均顯著升高（<0.05），見圖3A、I。與mimic+pcDNA組相比，mimic+SLC7A11組A2780/DDP細胞對順鉑的敏感性降低（<0.05），細胞集落形成顯著增多（<0.05），見圖3B、C。考慮到SLC7A11是調控鐵死亡的關鍵基因之一，用鐵死亡抑制劑Fer-1和鐵螯合劑DFO干預細胞，結果顯示，與mimic+pcDNA組相比，Fer-1和DFO的作用與過表達SLC7A11一致，其能增加A2780/DDP細胞在順鉑（32 μmol/L）條件下的細胞活力（<0.05），見圖3D。進一步檢測miR-144-3p對細胞鐵死亡相關指標的影響，結果顯示，相較于NC+pcNDA組，轉染miR-144-3p mimic可增加A2780/DDP細胞內Fe2+含量（<0.01）和ROS水平（<0.01），見圖3E、F；透射電鏡下可觀察到線粒體的皺縮伴隨膜密度增加，見圖3G。此外，miR-144-3p mimic轉染還參與下調胞內GSH的水平，上調MDA的水平（<0.01），促進4-HNE的表達，抑制GPX4的表達（<0.01），誘導A2780/DDP細胞鐵死亡；而共轉染miR-144-3p mimic和pcDNA-SLC7A11，可部分消除miR-144-3p mimic對鐵死亡相關指標的影響（<0.05），見圖3H、I。這些結果提示，miR-144-3p/SLC7A11軸可增強卵巢癌耐藥細胞A2780/DDP對順鉑的敏感性，該作用可能與鐵死亡有關。

Figure 3.　miR-144-3p/SLC7A11 axis enhanced the sensitivity of A2780/DDP cells to cisplatin by regulating ferroptosis. A： the mRNA expression level of SLC7A11 in various groups； B： cell sensitivity to cisplatin in various groups； C： cell colony formation in various groups； D： comparison of cell viability in the presence of 32 μmol/L cisplatin in various groups； E： Fe2+ content in various groups； F： ROS level in various groups； G： mitochondrial morphology in various groups； H： concentrations of GSH and MDA in various groups； I： the expression of ferroptosis-related proteins in various groups. Mean±SD. n=3. **P<0.01 vs NC+pcDNA group；#P<0.05 vs mimic+pcDNA group.

4　miR-144-3p抑制異種移植瘤生長

構建裸鼠A2780/DDP細胞異種移植瘤模型，評估miR-144-3p的體內抑瘤效果。結果如圖4A所示，mimic組移植瘤的瘤體大小及瘤重均顯著低于NC組（<0.01）；同時Western blot檢測結果顯示，與NC組相比，mimic組腫瘤組織中SLC7A11及GPX4的表達顯著降低（<0.01），4-HNE的表達顯著升高（<0.05），見圖4B。

Figure 4.　miR-144-3p inhibited the growth of xenograft tumors. A： tumor size and tumor weight； B： the expression of ferroptosis-related proteins. Mean±SD. n=6. *P<0.05，**P<0.01 vs NC group.

討論

目前卵巢癌細胞化療耐性的產生以及逆轉耐藥的方式仍是腫瘤治療領域的熱點話題之一；本實驗選取了卵巢癌耐藥細胞株A2780/DDP進行相關耐藥靶點的篩選及研究。CCK-8檢測順鉑敏感性的結果顯示A2780/DDP對順鉑的抵抗力增強，表明該細胞可用于耐藥相關實驗研究；此外，本研究的檢測結果提示A2780/DDP細胞中miR-144-3p的表達水平顯著降低，提示miR-144-3p可能與其順鉑耐藥之間存在一定的聯系。進一步通過miR-144-3p mimic模擬內源性miR-144-3p，結果提示轉染miR-144-3p mimic可顯著抑制A2780/DDP細胞集落形成，增強細胞對順鉑的敏感性。

微小RNA通常是與靶基因的3'UTR結合，調節靶基因的轉錄和翻譯，進而影響細胞的相關生物學功能［4-5］，本研究通過生物信息學手段預測并驗證了miR-144-3p與SLC7A11之間存在靶向結合，且miR-144-3p可抑制A2780/DDP細胞中SLC7A11的表達，同時SLC7A11在卵巢癌組織中的表達顯著升高。進一步采用SLC7A11過表達質粒驗證SLC7A11在miR-144-3p增強A2780/DDP細胞順鉑敏感性中的作用，結果顯示，SLC7A11過表達可逆轉miR-144-3p mimic的作用效果。基因編碼的蛋白質屬于一種膜轉運蛋白，可參與細胞內外GSH的轉運，影響細胞鐵離子的穩態，進而影響細胞的鐵死亡進程［12-14］。研究提示，卵巢癌組織中SLC7A11和GPX4的聯合高表達可作為預測患者鉑類化療藥物耐藥及不良預后的指標［15］。此外，circSnx12/miR-194-5p調控軸最終可靶向SLC7A11，激活細胞鐵死亡，增強卵巢癌細胞SKOV3/DDP和A2780/DDP的化療敏感性［16］。因此，本研究進一步評價了miR-144-3p對SLC7A11介導的鐵死亡的作用，結果顯示在A2780/DDP細胞中，miR-144-3p mimic可抑制SLC7A11的表達，導致細胞內Fe2+積累，促進鐵死亡，這一作用對解釋miR-144-3p增強A2780/DDP細胞順鉑敏感性具有重要的價值。此外，在體異種移植瘤實驗也驗證了miR-144-3p的抑瘤效果。考慮到miR與靶基因之間的結合方式，一個微小RNA可同時調控多個靶基因的表達，miR-144-3p是否還可通過其他靶基因發揮作用仍需要進一步深入的研究。

綜上所述，miR-144-3p可增加卵巢癌耐藥細胞對順鉑敏感性，其機制可能與負向調控SLC7A11的表達并促進細胞鐵死亡有關。

［1］ Penny SM. Ovarian cancer： an overview［J］. Radiol Technol， 2020， 91（6）：561-575.

［2］ Morand S， Devanaboyina M， Staats H， et al. Ovarian cancer immunotherapy and personalized medicine［J］. Int J Mol Sci， 2021， 22（12）：6532.

［3］ Kim SI， Kim JW. Role of surgery and hyperthermic intraperitoneal chemotherapy in ovarian cancer［J］. ESMO Open， 2021， 6（3）：100149.

［4］廖鳳兒，陶瑩，駱婕，等. miR-409-3p通過抑制PIK3CA介導的自噬增強耐藥卵巢癌細胞對順鉑的敏感性［J］. 中國病理生理雜志， 2022， 38（12）：2154-2163.

Liao FE， Tao J， Luo J， et al. miR-409-3p sensitizes drug-resistant ovarian cancer cells to cisplatin by inhibiting PIK3CA-mediated autophagy［J］. Chin J Pathophysiol， 2022， 38（12）： 2154-2163.

［5］ Saburi A， Kahrizi MS， Naghsh N， et al. A comprehensive survey into the role of microRNAs in ovarian cancer chemoresistance； an updated overview［J］. J Ovarian Res， 2022， 15（1）：81.

［6］ Ghafouri-Fard S， Azimi T， Hussen BM， et al. Non-coding RNA activated by DNA damage： review of its roles in the carcinogenesis［J］. Front Cell Dev Biol， 2021， 9：714787.

［7］ Li H， Wang M， Zhou H， et al. Long noncoding RNA EBLN3P promotes the progression of liver cancer via alteration of microRNA-144-3p/DOCK4 signal［J］. Cancer Manag Res， 2020， 12：9339-9349.

［8］ Sharma B， Randhawa V， Vaiphei K， et al. Expression of miR-18a-5p， miR-144-3p， and miR-663b in colorectal cancer and their association with cholesterol homeostasis［J］. J Steroid Biochem Mol Biol， 2021， 208：105822.

［9］ Wu J， Zhao Y， Li F， et al. MiR-144-3p： a novel tumor suppressor targeting MAPK6 in cervical cancer［J］. J Physiol Biochem， 2019， 75（2）：143-152.

［10］ Li XF， Hu DM， Zhao YX， et al. Knockdown of lncRNA HCG11 suppresses cell progression in ovarian cancer by modulating miR-144-3p/PBX3［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2020， 24（21）：11032-11040.

［11］ Yuan D， Guo T， Qian H， et al. Icariside II suppresses the tumorigenesis and development of ovarian cancer by regulating miR-144-3p/IGF2R axis［J］. Drug Dev Res， 2022， 83（6）：1383-1393.

［12］ Koppula P， Zhuang L， Gan B. Cystine transporter SLC7A11/xCT in cancer： ferroptosis， nutrient dependency， and cancer therapy［J］. Protein Cell， 2021， 12（8）：599-620.

［13］ Chen X， Li J， Kang R， et al. Ferroptosis： machinery and regulation［J］. Autophagy， 2021， 17（9）：2054-2081.

［14］ 牛爽，何忠時，曾煉，等. p53介導的鐵死亡在調控人結直腸癌順鉑耐藥中的作用及機制［J］. 中國病理生理雜志， 2023， 39（1）：9-19.

Niu S， He ZS， Zeng L， et al. Role and mechanism of p53-mediated ferroptosis in regulating cisplatin resistance in human colorectal cancer［J］. Chin J Pathophysiol， 2023， 39（1）：9-19.

［15］ Wu X， Shen S， Qin J， et al. High co-expression of SLC7A11 and GPX4 as a predictor of platinum resistance and poor prognosis in patients with epithelial ovarian cancer［J］. BJOG， 2022， 129（Suppl 2）：40-49.

［16］ Qin K， Zhang F， Wang H， et al. circRNA circSnx12 confers cisplatin chemoresistance to ovarian cancer by inhibiting ferroptosis through a miR-194-5p/SLC7A11 axis［J］. BMB Rep， 2023， 56（2）：184-189.

miR-144-3p/SLC7A11 axis enhances cisplatin sensitivity in ovarian cancer cells through ferroptosis

LIAO Fenger， TAO Ying， LUO Jie， LI Yun， GUO Qin△

（，，510062，）

To explore the effect of microRNA-144-3p （miR-144-3p） on cisplatin resistance in ovarian cancer cells and determine whether its mechanism is related to solute carrier family 7 member 11 （SLC7A11） and ferroptosis.After transfecting miR-144-3p mimic into cisplatin-resistant ovarian cancer cell lines， the abundance of miR-144-3p was measured by RT-qPCR. Sensitivity to cisplatin and cell proliferation were determined by CCK-8 and colony-forming assays， respectively. The levels of malondialdehyde （MDA） and glutathione （GSH） were assessed by kit assays. Fe2+content and reactive oxygen species （ROS） level were detected using Fe2+probe and ROS fluorescent probe， respectively. Mitochondrial morpghology was observed under transmission electron microscope. Dual-luciferase reporter assay was used to identify and verify the binding between miR-144-3p and SLC7A11. Furthermore， A2780/DDP cancer cell xenograft model was established to evaluate the effect of miR-144-3p on tumor growth in.The expression of miR-144-3p in drug-resistant cell lines A2780/DDP and SKOV3/DDP was significantly lower than that in parent cell lines A2780 and SKOV3 （<0.05）. Transfection with miR-144-3p mimic inhibited cell proliferation and enhance the sensitivity of drug-resistant ovarian cancer cells to cisplatin （<0.01）. Dual-luciferase reporter assay demonstrated thatwas a target gene of miR-144-3p， and SLC7A11 overexpression reversed the effect of miR-144-3p on the cell proliferation and cisplatin sensitivity through ferroptosis （<0.05）. Additionally，xenograft experiments showed that miR-144-3p inhibited tumor growth， and down-regulated SLC7A11 and glutathione peroxidase 4 （GPX4） expression （<0.01）， along with the up-regulation of 4-hydroxynonenal （4-HNE） level （<0.01）.miR-144-3p can target SLC7A11 to enhance the sensitivity of drug-resistant ovarian cancer cells to cisplatin， and its mechanism may involve ferroptosis.

microRNA-144-3p； ovarian cancer； cisplatin resistance； ferroptosis； solute carrier family 7 member 11

R737.31； R363.2

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2023.09.003

1000-4718（2023）09-1555-08

2023-05-19

2023-07-22

廣東省醫學科學技術研究基金項目（No. A2019364； No. A2021477）

Tel： 020-61321847； E-mail： guoqin5241@sina.com

（責任編輯：余小慧，羅森）