豬繁殖與呼吸綜合征病毒類NADC30 株感染的診斷與防控策略

官土根 福建省畜牧業協會 福州 350003

非洲豬瘟發生以來， 我國的生豬養殖環境尤其是生物安全環境得到了很大的改善， 間接助推了生豬產業的轉型升級。 但隨著原料、運輸、用工成本和疫病防控成本、 生物安全防控成本增加及生豬養殖利潤的減少， 不少養殖業主對豬的基礎疫病防控不到位，主觀上出現防控疏忽或防控缺陷，甚至有部分豬場為了減少免疫次數， 取消了常規疫苗的基礎免疫，給豬場造成非常大的經濟損失。

在當前環境下，在做好非洲豬瘟科學防控、常態化防控的同時，必須加強對豬基礎疫病的防控，尤其要重視豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）的防控工作。之前，豬繁殖與呼吸綜合征又稱為"豬藍耳病"，屬于我國二類動物疫病， 是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種急性高致死性傳染病，具有空氣傳播、 接觸感染、 精液傳播和胎盤垂直傳播等特點[1-3]。 郭寶清等1996 年首次在我國分離出經典藍耳病病毒株（CH-1R），2006 年先后在江西、安徽、浙江、湖南、廣東、福建等地發現高致病性藍耳病病毒株，2013 年在河南首次分離出我國第一株類NADC30 毒株[4-6]。 豬藍耳病在國內養豬企業中呈現感染率高、流行毒株多樣的特點，類NADC30 毒株成為當前我國豬藍耳病流行的優勢毒株[7]。

筆者結合某規模化豬場對一起類NADC30 毒株的血清學檢測、基因測序及臨床處理方案，總結出一些規模豬場豬繁殖與呼吸綜合征類NADC30 毒株感染的防控經驗和教訓， 為養豬業主和豬場獸醫團隊科學防控豬繁殖與呼吸綜合征提供參考與借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 發病豬只 福建省漳州地區2018 年投產運營的某規模化豬場，母豬存欄700 多頭，采用自繁自養飼養模式，執行常規的免疫程序，豬群總體健康狀態較好。 2019 年10 月初，該豬場仔豬25 日齡斷乳后發病， 發病高峰集中在40～60 日齡， 病死率達15%以上，使用抗菌藥物治療無效。

1.1.2 待檢血清與病料 待檢血清由閩南某規模化豬場采集提供，共165 份。 其中，公豬血清17 份，后備母豬血清48 份（12 周齡、14 周齡、20 周齡、24 周齡各12 份），懷孕母豬血清20 分（懷孕30 d、懷孕80 d 各10 份），產后7 d 哺乳母豬血清10 份，商品豬血清70 份（2 周齡、4 周齡、6 周齡、8 周齡、10 周齡、12 周齡、17 周齡各10 份），均為隨機采樣。

將165 份血清樣品送至北京某重點實驗室進行豬瘟抗體、 豬繁殖與呼吸綜合征抗體、 豬偽狂犬病gE 和gB 抗體檢測。同時，采集4 份肺等病料對豬繁殖與呼吸綜合征病毒進行PCR 檢測， 將PCR 產物送至生工生物工程(上海)股份有限公司進行基因測序 （測序編號為FJ15-1-1、FJ15-1-2、FJ15-1-3、FJ15-1-4）。

1.1.3 主要試劑 美國IDEXX 公司生產的豬偽狂犬病gE 抗體檢測試劑盒和豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒（ELISA）；韓國金諾公司生產的豬偽狂犬病gB 抗體檢測試劑盒和豬瘟抗體檢測試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 臨床診斷 觀察患豬的臨床癥狀并進行病理解剖，作出初步診斷，另將部分肺等病料凍存，用于PCR 診斷。

1.2.2 血清學檢測分析 血清樣品抗體檢測嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2.1 抗體檢測操作步驟 取出豬瘟 （或豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病）抗原包被板，按比例稀釋樣品及陰性對照血清（NC）、陽性對照血清（PC）；加入100 μL 稀釋后的樣品及NC、PC，室溫（25 ℃）下孵育30～60 min， 棄去孔中液體后用洗滌液洗滌3 次；每孔加入100 μL CSFV HRP（或PRRSV HRP、PRV gE/gB HRP）標記抗體，室溫（25 ℃）下孵育30 min，棄去孔中液體后用洗滌液洗滌3 次；每孔滴入100 μL TMB 底物液，25 ℃室溫下孵育15 min，每孔滴入50 μL 終止液， 終止酶促反應； 使用450 nm 波長測量吸光度值。

1.2.2.2 結果判斷 豬瘟抗體檢測判定標準： 阻斷率≥40%，判定為陽性；阻斷率＜40%，判定為陰性。豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測判定標準：S/P≥0.4，判定為陽性；S/P＜0.4，判定為陰性。 豬偽狂犬病gE抗體檢測判定標準：S/N≤0.6， 判定為陽性；S/N＞0.7，判定為陰性；0.6＜S/N≤0.7 判定為可疑。豬偽狂犬病gB 抗體檢測判定標準：S/N≤0.6，判定為陽性；S/N＞0.6，判定為陰性。

1.2.3 病原學檢測分析 按照豬瘟病毒、 豬繁殖與呼吸綜合征病毒、 豬偽狂犬病病毒病原學檢測方法進行。

1.2.4 測序分析 按照生工生物工程（上海）股份有限公司高通量測序技術進行。

1.3 結果判定 結果計算和結果判定嚴格按照各檢測試劑盒說明書或廠家說明書。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀觀察結果 患豬體溫升高、 食欲下降，出現被毛粗亂、毛長、扎堆、喘氣等現象，多數仔豬呈漸進性消瘦，有的發展成為僵豬。

2.2 剖檢病變 隨機剖檢4 頭患豬，均見肺間質增寬、水腫、出血，肺門淋巴結出血（見圖1），脾臟邊緣出血、壞死（見圖2），其中2 頭患豬繼發感染副豬嗜血桿菌，可見心包炎、腹膜炎等。

圖1 肺間質增寬、水腫

圖2 脾臟出血、壞死

2.3 血清學檢測結果與分析

2.3.1 豬偽狂犬病gE 抗體檢測 結果顯示，該規模化豬場偽狂犬病野毒抗體陽性率為0%，所有樣品偽狂犬病野毒均為陰性。

2.3.2 豬偽狂犬病gB 抗體檢測 該規模化豬場偽狂犬病gB 抗體總體陽性率為96.19%（101/105）。其中，12 周齡后備母豬的抗體陽性率為83.33%（10/12）、14 周齡后備母豬的抗體陽性率為91.67%（11/12）、公豬血清抗體陽性率為94.12%（16/17），其它階段豬gB 抗體陽性率100%（見圖3）。

圖3 豬偽狂犬病gB 抗體陽性率

2.3.3 豬瘟抗體檢測 該規模化豬場豬瘟抗體陽性率為84.24%（139/165）。 其中，公豬、后備母豬、經產母豬血清樣品的豬瘟抗體合格率為100%；2 周齡及10～17 周齡商品豬的豬瘟抗體陽性率在70%以上，為免疫合格群；4～8 周齡商品豬的豬瘟抗體陽性率為20%～50%，為常見的免疫窗口期（見圖4）。

圖4 豬瘟抗體陽性率

2.3.4 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測 該規模化豬場豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽性率為92.73%（153/165）。公豬、12 周齡后備母豬、（懷孕30 d、懷孕80 d及產后7 d） 母豬、2～6 周齡商品豬的豬繁殖與呼吸綜合征抗體離散度較低、不整齊且處于不穩定狀態；8 周齡以上商品豬的抗體離散度水平逐步穩定 （見圖5）。

圖5 豬繁殖與呼吸綜合征抗體S/P 平均值及離散度

2.4 病原學檢測分析 將待檢病料組織進行豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒的病原學檢測。 由表1 可知，4 份樣品中豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒均為陰性， 但豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢出率高達100%（4/4）。

表1 病原檢測結果

2.5 測序分析 為進一步明確該規模化豬場豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的毒株類型，將PCR 產物進行PRRSV ORF5 及Nsp2 基因序列與PRRSV 各參考毒株的相關序列進行比對分析。

與GM2、QYYZ、R98、NADC30、GD、TJM-F92 等毒株的ORF5 序列進行比較， 結果表明，FJ15-1-1、FJ15-1-2、FJ15-1-3、FJ15-1-4 等4 個疑似毒株的ORF5 序列均與NADC30 毒株的氨基酸序列同源性最高（達92%～93%）， 且與NADC30 毒株屬于同一遺傳進化分支（見圖6-圖7）。

圖6 依據ORF5 基因推導編碼的氨基酸序列的同源性

圖7 依據ORF5 基因推導編碼的氨基酸序列構建的進化樹

與GM2、VR-2332、NADC30、MN184A、GD、HUN4-F112 等毒株的Nsp2 （高變區） 序列進行比較，結果表明，FJ15-1-4 疑似毒株的Nsp2 區存在3處共393 個氨基酸的不連續缺失， 其缺失的位置及長度與NADC30 毒株的基因特征相吻合， 且與NADC30 屬于同一遺傳進化分支（見圖8-圖9）。

圖8 依據Nsp2 高變區基因推導編碼的氨基酸序列的同源性

圖9 依據Nsp2 高變區基因推導編碼的氨基酸序列構建的進化樹

綜上， 該場商品豬群發病為感染豬繁殖與呼吸綜合征類NADC30 毒株所致，應及時采取措施做好該病的綜合防控。

3 綜合防控策略

3.1 及時調整免疫程序 綜合實驗室檢測及基因測序分析，建議結合該場的實際情況，及時調整免疫程序。調整豬繁殖與呼吸綜合征的免疫程序，使用瑞蘭安疫苗對全場母豬進行普免 （1 頭份/頭），1 個月后再加強免疫1 次； 商品豬PRRSV 感染日齡早且抗體水平參差不齊， 發病后近1 個月內對新生仔豬（滴鼻免疫）及14 日齡仔豬（肌注）使用瑞蘭安進行免疫，待豬群穩定后再調整為7 日齡免疫（肌注瑞蘭安）。保育豬階段，發病期間（25～60 日齡），暫時取消該階段的疫苗免疫，以降低機體對免疫系統的刺激。商品豬階段，豬偽狂犬病疫苗免疫時間從50 日齡調整為60 日齡， 豬瘟疫苗免疫時間從60 日齡調整為65 日齡。

3.2 做好對癥治療 在公豬、母豬全價配合飼料中添加20%替米考星粉劑 （1 500 g/t） 及復合多維（1 000 g/t），連用21 d，減少繼發感染。 仔豬初生當天及實施閹割手術后， 肌注長效頭孢噻呋晶體游離酸注射液（0.2 mL/頭）；仔豬斷乳當日，肌注長效泰拉霉素 （0.3 mL/頭）； 斷乳后1 周于保育料中添加20%替米考星（1 500 g/t）及復合多維（1 000 g/t），連用14 d。 對瘦弱、厭食、體況不佳的發病豬只，可集中在一個欄舍，肌注瑞可新進行治療（0.3～0.5 mL/頭）。

3.3 重視豬場生物安全工作 在當代養豬生產管理中， 豬場生物安全措施對豬群疫病防控尤其是豬繁殖與呼吸綜合征和非洲豬瘟的防控起著重要的作用。全進全出、批次化生產及加強豬場人流、車流、豬流、物流的管理等措施有利于豬場疫病的防控。

3.4 提高豬場健康管理水平 秉承 “管重于養，養重于防，防重于治”的宗旨，建立豬場內部的健康保障團隊，做好豬場的健康管理。 改善豬的生活環境，保持豬舍良好的溫濕度、 通風及衛生條件， 定期消毒；提供高效、營養、安全的飼料，完善免疫程序、保障疫苗接種效率，制定生物安全管理制度，定期做好生物安全審計，并做好豬群健康的動態監測。

3.5 加強PRRSV 類NADC30 株的動態監測 非洲豬瘟防控常態化背景下， 要做好豬繁殖與呼吸綜合征尤其是PRRSV 類NADC30 株感染的綜合防控。 類NADC30 株是PRRSV 譜系中較復雜的毒株，也是目前我國豬繁殖與呼吸綜合征病毒的流行毒株，不僅要從豬群臨床癥狀、剖檢病變、實驗室檢測等方面進行綜合評估， 做好該病的動態監測和鑒別診斷，還應結合疫苗免疫、藥物保健、飼養管理、改善環境衛士等方面做好類NADC30 株感染的科學防控。

3.6 積極主動做好豬場的疫病凈化工作 根據疫病防控需要，做好豬舍的升級改造，嚴格按照生物安全防控要求，做好人員、物資、車輛、飼料和豬只的規范管理，完善消毒制度，做好病死豬的無害化處理，通過檢測、 監測等技術手段和提高生物安全風險防控能力， 積極開展本場豬繁殖與呼吸綜合征非免疫凈化的創建、評估和認證工作，立足源頭，加快推動種豬場動物疫病凈化工作，促進養豬業高質量發展。