全血和血清降鈣素原檢測方法的臨床研究

卓惠燕,鐘朋軒,李有強

(廣州市番禺區婦幼保健院檢驗科,廣東 廣州 511400)

降鈣素原(PCT)是由116個無激素活性氨基酸糖蛋白組成的降鈣素前肽物質,其半衰期為25～30 h[1]。健康人體血漿PCT水平低于0.05 ng/mL。在受到嚴重寄生蟲、細菌、真菌感染時,PCT水平可明顯升高,若PCT>0.5 ng/mL則提示嚴重細菌感染[2]。PCT作為一種新的炎癥指標已被廣泛應用于感染性疾病的診斷、鑒別診斷、療效監測等,并被國際膿毒癥協會推薦為膿毒癥的診斷和療效評價指標[3]。

臨床上主要用化學發光法、酶聯免疫熒光法檢測血清或血漿PCT水平[4]。檢測血清PCT具有用血量大、需離心分離標本、檢驗周期較長等缺點,且嬰幼兒患者靜脈血采集難度較大。全血PCT檢測可克服上述局限性。本研究探討了采用酶聯免疫熒光法檢測血清PCT與采用免疫層析法檢查全血PCT的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 采集2022年1-3月本院住院患者的乙二胺四乙酸二鉀抗凝全血(96份)及促凝血標本(96份)。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2方法 血液標本的采集參考美國臨床實驗室標準協會《診斷性靜脈血液標本采集》[5],由專業抽血護士執行。將收集的促凝血標本以3 500 r/min離心5 min,獲得血清標本。排除明顯溶血、脂血和黃疸標本。血清PCT檢測采用Biomerieux VIDAS30熒光免疫分析儀(酶聯免疫熒光法),全血PCT檢測采用i-ReaderS干式免疫分析儀(免疫層析法),i-ReaderS干式免疫分析儀由上海艾瑞德生物科技有限公司提供,試劑為儀器配套試劑,所有儀器在檢測標本前均進行了儀器的校準和性能驗證。

2 結 果

2.1血清和全血PCT檢測結果比較 192份標本的檢測結果覆蓋了低值、中值、高值的范圍。血清PCT水平為(5.88±0.89)ng/mL,全血PCT水平為(5.56±0.84)ng/mL,二者比較,差異無統計學意義(t=0.25,P>0.05)。

2.2血清和全血PCT檢測結果的線性回歸分析 以血清PCT檢測數據作X軸,全血PCT檢測數據作Y軸,構造的回歸方程為Y=0.921X+0.163,二者具有良好的線性關系(r=0.974,P<0.05)。見圖1。

圖1 線性回歸分析

2.3血清和全血PCT檢測結果的一致性分析 血清與全血PCT檢測結果平均差值為0.302,偏差處于臨床可接受范圍之內。差值95%置信區間(95%CI)為-3.589～4.193,4.16%的點落在95%一致性的界限之外,即數據基本落在95%CI內,提示二者一致性較好。見圖2。

圖2 Bland-Altman圖

3 討 論

當機體存在細菌感染時,肝臟巨噬細胞、甲狀腺C細胞會合成與分泌PCT,使血液中PCT水平迅速升高,其水平可隨感染程度的不同而相應升高或降低[6]。魏鋒等[7]通過對76例膿毒血癥和嚴重膿毒血癥患者的病情和預后情況進行分析時發現,嚴重膿毒血癥患者PCT水平遠高于膿毒血癥患者,提示隨著病情嚴重程度的增加,膿毒血癥患者血清PCT水平可逐漸升高。李龍珠等[8]研究表明,膿毒血癥患者血清PCT水平高低與患者進一步發生心肌損傷的關系密切。因此,PCT可作為區別膿毒血癥與非感染性原因引起的全身炎性反應的重要標志物,其在膿毒血癥診斷、降低死亡率、緩解抗生素濫用等方面具有舉足輕重的作用[9]。

目前,PCT的檢測主要采用血漿和血清標本,這2種標本制備耗時較長,在標本量大時不利于降低檢驗科工作負荷,而且血清PCT檢測費用相對于全血PCT檢測費用高,在復查可疑結果時所帶來的成本也會更高。隨著臨床檢測技術的不斷發展,全血PCT檢測逐漸應用于臨床,并且全血PCT相關檢測儀器的精密度、準確度、線性范圍、攜帶污染率等性能,以及與血清、血漿標本檢測結果的相關性、一致性分析等研究顯示,大部分全血PCT檢測儀器均能達到實驗室質量要求,同時滿足臨床需求[10-11]。張盼等[12]通過采集40例疑似感染患兒血清及末梢血標本,分別采用TZ-310型干式熒光免疫分析儀和量子點免疫熒光層析儀對標本PCT水平進行檢測,結果顯示,血清與末梢血PCT檢測結果一致性、相關性良好。末梢血標本采血量少,檢測簡便,出結果快速,更適用于采血困難的嬰幼兒患者。

本研究使用的i-ReaderS干式免疫分析儀,主要用于檢測靜脈血和末梢血C反應蛋白,也可用于檢測靜脈血和末梢血PCT。全血PCT檢測耗時短,用量少,分析時間在15 min以內,可大大降低臨床周轉時間,提高報告發送速度,從而更快地發布危急值,提醒臨床進行干預[13]。因此,全血PCT檢測在婦幼?？漆t院中具有更好的應用前景。全血PCT的應用使聯合檢測PCT、C反應蛋白、血清淀粉樣蛋白等炎癥指標成為可能。聯合檢測炎癥指標有利于指導臨床抗生素的使用,能極大地提高細菌感染診斷的敏感性和特異性。賈文婷等[14]通過對51例細菌性感染新生兒及60例非細菌性感染新生兒進行全血PCT、超敏C反應蛋白水平檢測時發現,PCT聯合超敏C反應蛋白檢測可進一步提高診斷細菌感染性疾病的準確性和特異性。

本研究結果顯示,血清PCT水平略高于全血PCT水平,提示采用不同檢測方法可使結果存在一定偏差,但偏差處于臨床允許誤差內。PCT主要存在于血清或血漿中,血液紅細胞比容的大小影響了全血標本中血清或血漿PCT水平。血細胞比容大,則單位體積中參與反應的血清或血漿PCT相對減少,反之亦然[15-16],這也是導致全血PCT檢測結果略低于血清PCT檢測結果的原因之一。本研究結果顯示,血清與全血PCT檢測結果無顯著差異,二者具有良好的線性關系(r=0.974,P<0.05)。提示血清PCT檢測與全血PCT檢測具有較好的相關性。在進行一致性檢驗時,本研究采用了Bland-Altman分析法。該方法綜合了檢測過程中的隨機誤差和系統誤差,是評價一致性檢驗的較好方法。本研究結果顯示,血清與全血PCT檢測結果的絕大多數差值位于95%一致性界限內,偏差均值為0.302,處于臨床上可接受范圍,提示這2種檢測結果具有一致性。這與SHENG等[17]研究結果相似,該研究指出全血PCT檢測與常規血清和血漿PCT相比,未見顯著不同結果,而且前者在兒科和其他臨床科應用具有一定優勢。

綜上所述,采用免疫層析法檢測全血PCT與采用酶聯免疫熒光法檢測血清PCT具有較好的一致性。對懷疑有血液感染且采血困難的嬰幼兒患者、貧血患者等,采用全血PCT檢測方法能更快、更好地判斷病情。