幾種檢測技術在禽蛋殘留檢測中的應用

王俊菊，閻 芳

（天津市農業生態環境監測與農產品質量檢測中心 300402）

目前，禽蛋中的獸藥殘留主要包括抗生素類、獸藥及其代謝物、激素類藥物等。其中，抗生素是目前使用最廣泛的藥物，同時也是造成禽蛋獸藥殘留的主要原因之一。由于抗生素對畜禽養殖的健康發展有重要作用，因此受到廣泛重視，但其在禽蛋中的殘留卻對人體健康造成了極大的危害。近年來，隨著人們食品安全意識的不斷提高，禽蛋產品中抗生素殘留、獸藥殘留、重金屬和有害物質等問題引起了人們的廣泛關注。因此，如何快速準確地檢測這些問題，成為檢驗檢疫工作人員所關心的問題。

1 禽蛋中殘留獸藥種類及殘留檢測方法

隨著人們對食品安全問題的高度重視和對藥物殘留限量標準的不斷提高，我國規定在禽蛋中限量使用抗菌藥物（如恩諾沙星、土霉素等）。而在實際生產中，由于養殖技術不到位、飼料中添加抗生素等因素，造成獸藥殘留超標現象較為普遍。此外，一些家禽疾病也容易導致禽蛋中存在獸藥殘留。如雞馬立克氏病是由雞馬立克氏病菌引起的一種以免疫抑制為主的傳染病，主要危害禽類健康，導致禽蛋中獸藥殘留超標。目前，檢測禽蛋中獸藥殘留常用的方法有氣相色譜法、酶聯免疫吸附試驗等方法。氣相色譜法是測定動物性食品中獸藥殘留的一種快速方法，但在實際應用中操作繁瑣、檢測速度較慢。液相色譜法是目前被廣泛采用的一種檢測方法，但其在分析測定時對樣品提取溶劑和提取方法要求較高。酶聯免疫吸附試驗是一種靈敏度高、選擇性好、簡便快速的定性定量檢測方法，但其檢測結果受樣品基質及樣品量影響較大。

1.1 毛細管電泳-高效液相色譜法

毛細管電泳-高效液相色譜法（簡稱CPC-HPLC）是一種應用于復雜樣品的高效液相色譜分析方法，在分析復雜的蛋白質、氨基酸、糖類、維生素以及一些金屬離子時有較好的效果，具有分離效率高、線性范圍寬、柱效高等優點。目前，CPC-HPLC 法已經被廣泛應用于水產品中藥物殘留的檢測。趙颯等[1]人通過研究發現：在鴨蛋中添加氯霉素可以降低鴨蛋中藥物的殘留量，如果添加量超過20 mg/kg 時，就會導致鴨蛋中藥物殘留量超標，造成食品安全隱患。在使用氯霉素后，有2%的鴨蛋被檢測出超標，而其他被檢測出超標的禽蛋中殘留藥物都在50 mg/kg 以下。李秋萍等人通過對蛋清和蛋黃中的藥物殘留進行測定，證明了蛋清和蛋黃中獸藥殘留在使用氯霉素后都有一定程度的升高。石志斌等[2]人通過對禽蛋中鹽酸環丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、諾氟沙星和氧氟沙星殘留檢測分析表明，該方法靈敏度高，能滿足日常檢測要求。但是，該方法不能完全替代國家相關標準。羅海強等[3]人通過測定蛋清和蛋黃中恩諾沙星、諾氟沙星和氧氟沙星殘留分析結果表明，該方法不能完全替代國家相關標準。因此，在實際檢測過程中應當根據實際情況對檢測方法進行適當的選擇。

1.2 液相色譜-串聯質譜聯用法

液相色譜- 串聯質譜聯用法（LC-MS/MS）是近年來發展起來的一種高靈敏度、高選擇性、快速的檢測方法，具有簡便、準確、快速等優點。通過液相色譜柱分離目標物，利用串聯質譜儀將目標物與質荷比完全一致的內標離子進行質譜定量，在串聯質譜儀上獲得質荷比不同的碎片離子信息。與傳統的氣相色譜-質譜聯用（GC-MS）相比，液相色譜-質譜聯用技術具有檢測靈敏度高、分析速度快、分離效能高、易于實現多殘留同時測定等優點，因而在獸藥殘留檢測中被廣泛應用。在禽蛋中常用的藥物包括抗生素類（如四環素類、磺胺類等）、喹諾酮類、抗寄生蟲藥等。該方法可實現對食品中微量甚至痕量的分析檢測，能同時測定多類化合物，適用于復雜樣品中獸藥殘留的定性和定量分析。田蘊等[4]采用LC-MS/MS 技術對禽蛋中硝基呋喃類和四環素類藥物殘留進行檢測，結果表明，該方法準確可靠，靈敏度高，線性范圍寬。目前已用于雞蛋、鴨蛋、鵝蛋等禽蛋產品中硝基呋喃類藥物及四環素類藥物殘留的檢測，其回收率均在80%以上。張崇威等[5]利用LC-MS/MS法檢測禽蛋中四環素類藥物殘留。結果表明：該方法靈敏度高，靈敏度比傳統的氣相色譜法提高10 倍以上；線性范圍寬（5～2000μg/L）；檢測限低至1μg/kg，最低檢出限可達0.5μg/kg；日內精密度和日間精密度均較低；可用于禽蛋中硝基呋喃類和四環素類藥物殘留的定性及定量檢測。

1.3 氣相色譜-質譜聯用儀

氣相色譜-質譜聯用儀（GC-MS）是將氣相色譜（GC）和質譜儀進行有機結合的一種儀器，它在分離、分析和鑒定混合物中各組分時具有高效、快速、靈敏等特點，已廣泛應用于食品、藥品、環境等領域。在禽蛋中獸藥殘留的檢測方面，氣相色譜-質譜聯用儀的應用已經十分廣泛。目前，氣相色譜-質譜聯用儀在禽蛋中獸藥殘留檢測的應用主要包括：蛋品中有機氯農藥殘留檢測（包括有機磷和菊酯類）、蛋品中磺胺類藥物殘留檢測（包括磺胺甲惡唑等）、蛋品中硝基呋喃類藥物殘留檢測（包括呋喃妥因等）、蛋品中喹諾酮類藥物殘留檢測（包括恩諾沙星等）。另外，氣相色譜-質譜聯用儀還可用于禽蛋中多氯聯苯類污染物的檢測。在對禽蛋中獸藥殘留分析過程中，色譜柱的選擇及凈化方法對檢測結果的準確性有很大影響。因此，在選擇色譜柱時，應考慮色譜柱的分離效率和樣品前處理方法對獸藥殘留檢測結果的影響。另外，目前國內禽蛋產品中獸藥殘留的主要檢測方法有氣相色譜-質譜法和液相色譜-質譜法等，但由于其價格較高，一般企業無法接受，因此還需進一步研究完善。

1.4 酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是一種基于抗體和抗原特異性反應的免疫測定技術，已廣泛應用于動物性食品中獸藥殘留的檢測。該方法的原理是利用抗原與抗體特異性結合反應后形成免疫復合物，再通過加入酶標記的抗血清或抗血清與酶標物結合后產生顏色反應，最后利用分光光度計測定顏色變化值，通過計算顏色變化值間接計算獸藥殘留量。目前，ELISA 方法已成為禽蛋中獸藥殘留檢測的首選方法，其應用范圍也逐漸擴大。劉彥青等利用酶聯免疫吸附試驗對雞蛋中恩諾沙星和土霉素的殘留量進行測定，結果顯示，檢測限分別為20 ng/g 和5 ng/g。另外，朱麗娜等利用ELISA 方法對雞蛋中孔雀石綠殘留進行了檢測，結果顯示其檢測限為0.5μg/kg。

1.5 液相色譜法

液相色譜法是一種以高效液相色譜為分離手段，以固相萃取為前處理手段的分析檢測方法，其檢測結果準確性高、靈敏度強。目前，液相色譜法在禽蛋中獸藥殘留檢測中應用廣泛，被廣泛采用的是液相色譜法，如氣相色譜法和液相色譜法等。氣相色譜法主要有兩種類型：一是利用氣體為流動相，在分析儀器的檢測器中進行檢測；二是利用惰性氣體作為流動相，在分析儀器的檢測器中進行檢測。液相色譜法主要有三種類型：一是以氣相色譜儀為基礎的分析方法，主要包括液相色譜- 質譜法（LC-MS）、液相色譜- 串聯質譜（LC-MS/MS）、液相色譜- 電噴霧電離（LC-ESI-ESI）等；二是以紫外檢測器為基礎的分析方法，主要包括紫外-可見分光光度法（UV-Vis）、熒光檢測器（FID）等；三是以離子檢測為基礎的分析方法，主要包括離子對檢測器、熒光檢測器等。液相色譜法具有靈敏度高、選擇性好、專一性強等優點，目前在禽蛋中獸藥殘留檢測中應用最為廣泛。

1.6 免疫層析技術

免疫層析技術是一種快速、靈敏的獸藥殘留檢測方法，主要利用抗原和抗體之間特異性的結合反應來達到檢測目的。免疫層析技術是通過對試紙條上固定的抗體或抗原之間結合反應來實現對樣品中獸藥殘留的檢測，其檢測結果不受樣品基質的影響，可用于獸藥殘留的定性和定量分析。目前，免疫層析技術廣泛應用于獸藥殘留檢測中。宋貴方等[6]利用膠體金免疫層析技術對雞蛋中恩諾沙星和土霉素進行了快速檢測，結果表明該方法具有良好的敏感性和特異性。龔蕾等[7]建立了基于膠體金免疫層析技術對雞蛋中土霉素和恩諾沙星殘留進行快速檢測，該方法具有良好的特異性和靈敏度，適用于雞蛋中土霉素和恩諾沙星殘留的定性和定量分析。

2 禽蛋殘留檢測的步驟

2.1 樣品制備

雞蛋、鴨蛋和鵪鶉蛋是禽蛋產品的三大類，也是禽蛋檢測中最常見的樣品。樣品制備是檢驗檢疫工作的重要組成部分，其目的是將禽蛋中的殘留獸藥和污染物進行檢測，并根據檢測結果判定其是否合格，同時為下一步進行后續處理提供依據。色譜法操作簡單、快速、準確，但檢測成本高。質譜法靈敏度高，但儀器昂貴。

2.2 樣品前處理

由于禽蛋中殘留獸藥種類繁多，殘留濃度低，且樣品基質復雜多樣，因此前處理是影響檢測結果的重要因素之一。樣品前處理方法主要有：固相萃取法（SPE）、薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）、液相-質譜聯用法（LC-MS）。SPE 是一種將樣品溶液進行凈化的方法，具有操作簡單、快速、靈敏度高等特點；TLC 和HPLC 是目前使用最廣泛的前處理方法；LC-MS 可以同時測定多個目標物質，具有檢測速度快、靈敏度高等特點。

2.3 檢測方法

目前用于檢測禽蛋中殘留獸藥的主要方法有薄層色譜法、固相萃取技術（SPE）、固相萃取凈化技術（SPE）和液相色譜-質譜聯用技術（LC-MS）。其中薄層色譜法操作簡單，成本低；SPE 具有操作簡便，耗時短的特點；液相色譜-質譜聯用技術具有分析速度快，靈敏度高等特點。但該方法存在的問題是檢測成本高；薄層色譜法操作復雜，耗時較長。

2.4 檢測結果

在禽蛋中殘留獸藥的檢測中，有不少文獻報道了檢測結果與真實值不符的情況。例如，在一批從越南進口的鮮雞蛋中檢出孔雀石綠殘留，經檢測這批雞蛋中含有孔雀石綠和氯霉素兩種獸藥殘留。對于這一問題，筆者認為主要原因是：首先是由于樣品前處理不規范導致。在對鮮蛋進行前處理時，樣品沒有完全去除蛋殼上的附著物；其次是由于樣品稀釋不規范導致。在樣品稀釋時沒有將不同濃度的樣品混合均勻；最后是由于儀器檢測條件不匹配導致。

2.5 質量控制

對檢測結果的分析和判定是檢驗檢疫工作的重要組成部分。在檢測過程中，檢驗檢疫人員需要根據檢測結果判定產品是否合格，并對不合格產品采取相應的措施進行處理。

3 獸藥殘留的控制措施

首先要加強源頭管理，建立健全獸藥生產、銷售、使用的市場準入制度，嚴格執行休藥期制度。獸藥生產企業應當建立并執行獸藥產品的進貨查驗和記錄制度，嚴格按照產品使用范圍、用法和用量使用。從事養殖的單位或個人，應嚴格遵守國家有關法律法規，禁止在飼料和動物飲用水中添加任何藥物。其次需要加強對飼料、動物飲用水、獸藥等相關產品的監督檢查，規范生產經營行為。對獸藥的使用及原料進行嚴格的監管，尤其是飼料中抗生素等藥物的添加比例應嚴格控制在國家規定范圍內。嚴厲打擊非法添加和濫用獸藥及其他添加劑的行為，確保禽蛋產品質量安全。再者還應該加強監測預警。國家相關部門應加大對禽蛋產品中獸藥殘留超標的監管力度，對于不符合檢驗檢疫要求的禽蛋產品進行及時查處，防止不合格產品流入市場。同時加強對出口企業和出口禽蛋產品的監管，督促企業加強管理，嚴把質量關。最后要大力開展獸藥殘留檢測技術研究和培訓工作。一方面要加強對獸藥殘留檢測技術方面的研究，另一方面要加強對檢驗檢疫人員專業知識的培訓，使檢驗檢疫人員具備更高水平的檢測能力和對獸藥殘留檢測工作更全面深入地理解與認識。只有這樣才能確保禽蛋產品質量安全、保障人民群眾身體健康和生命安全。

4 結語

我國禽蛋產業發展迅速，生產規模和產量逐年增加，但同時也存在著許多問題，如產業集中度低、集約化程度低、加工落后等，致使禽蛋產品質量難以保障。為了解決這些問題，確保禽蛋產品質量安全，需要從以下幾個方面努力：一是制定統一的禽蛋產品生產和加工技術標準，完善生產流通過程中的質量監管體系；二是提高飼料等原材料的質量，加強飼料、獸藥、添加劑等產品的市場準入制度建設；三是加強對生產加工過程中技術工藝的研究；四是加強對禽蛋產品質量安全標準體系建設，使檢驗檢疫部門能夠更加及時有效地對禽蛋產品質量安全問題進行監管。