不同地區黃柏小檗堿的含量研究

王 錦，程昆木

（安康學院化學化工學院，陜西 安康 725000）

0 引言

黃柏為蕓香科植物黃皮樹（Phel odendron chinense Schneid）或黃檗（Phel odendron amurense Rupr）的干燥樹皮。前者習稱“川黃柏”，后者習稱“關黃柏”[1]，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效。在臨床應用中其所含的生物堿成分具有多種生物活性，如抗腫瘤、抗炎、降血糖、降血脂、抗阿爾茨海默病、抗心律失常等[2]。川黃柏主產于四川、貴州等地，關黃柏主產于遼寧、吉林等地，黃柏皮中的小檗堿、藥根堿、黃柏堿等成分在臨床中具有許多全新發展，在傳統應用基礎上小檗堿發現具有抗血管性癡呆[3]、腦保護作用[4]、抗隱球菌[5]等全新藥用價值。

小檗堿起初是指從中藥黃連中分離的一種季銨生物堿，可隨著醫學研究的發展和化學研究的深入，小檗堿顯現出越來越多的藥用效果，被廣泛地應用于臨床上。研究發現在臟器損傷[6]、心血管疾病[7]以及代謝性疾病如老年癡呆癥、糖尿病[8]及相關并發癥、炎癥[9]等疾病的保護作用及其相關機制具有較好療效。隨著需求量日益增加，市場對小檗堿供不應求，使得從其他藥材中獲取小檗堿變得更具意義和緊迫。

1 材料與儀器

1.1 材料

遼寧、吉林、湖北、安康、四川廣安、貴州畢節、湖南懷化7 個產地的黃柏皮，均采購于當地；甲醇、無水乙醇，天津市天力化學試劑有限公司；色譜磷酸、色譜乙腈，山東禹王和天下新材料有限公司；鹽酸小檗堿標準品，南京源植生物科技有限公司；三重蒸餾水，實驗室自制。

1.2 儀器

FW177 型中草藥粉碎機，天津泰斯特儀器有限公司；LC-10ATvp 型高效液相色譜儀，日本島津公司；YP5002 型電子天平，北京賽多利斯儀器系統有限公司；KQ2200E 型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司；FA2014 型精密分析天平，上海良平儀器儀表有限公司；Molbiochem 520 型超純制水機，重慶摩爾水處理設備有限公司。

1.3 樣品前處理

將不同產地的黃柏皮在烘箱65 ℃后，粉碎，過20 目（0.8 mm）篩。

2 實驗方法與結果

2.1 實驗條件

2.1.1 色譜條件

用Kromasil-C18（4.6 mm×200 mm，5 mm）色譜柱，流動相為0.1%磷酸水－乙腈（70∶30，體積比），等度洗脫；進液量為5 μL；流速為1.0 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測波長為345 nm 時可以得到較好生物堿譜圖。

2.1.2 對照品溶液配制

精密稱取鹽酸小檗堿對照品（≥98%）10 mg，在50 mL 容量瓶中加入甲醇溶解，配置成質量濃度為0.196 mg/mL 的標準溶液。將對照品吸取1 mL 于離心管，過0.45 μm 濾膜。

2.1.3 供試品溶液的制備

精確稱取干燥黃柏樣品粉末約0.4 g，每組樣品都保留平行樣。置于50 mL 容量瓶中，加入45 mL90%乙醇，超聲處理45 min，冷卻，90%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置，過濾，取續濾液過0.45 μm 微孔濾膜。

2.2 標準曲線的制備

分別精確量取鹽酸小檗堿對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 至5 mL 量瓶中，加95%乙醇定容，搖勻，稀釋成從高到低的濃度溶液，分別取制得的系列濃度溶液各5 μL 注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進行分析，記錄標準品色譜峰面積，見圖1。以峰面積為縱坐標，進樣濃度為橫坐標，繪制標準曲線，見表1。結果表明，鹽酸小檗堿在0.054～0.270 mg/mL 質量濃度范圍內，對照品色譜峰面積（Y）與濃度（X）呈良好線性，回歸方程式為y=1.109×107x+1.303×104，R2=0.999 2。

圖1 標準曲線圖

表1 對照品色譜峰面積表

2.3 精密度實驗

精確吸取同一濃度安康地區對照品溶液5 μL，在上述色譜條件下重復進樣5 次，鹽酸小檗堿峰面積的RSD=1.51%，表明儀器精密度良好。

2.4 重復性實驗

稱取5 份湖北黃柏樣品粉末1 g，超聲提取法制備供試品溶液，精密吸取5 μL 各供試品溶液，在上述色譜條件下進樣，結果可得，鹽酸小檗堿含量的RSD=1.63%。

2.5 穩定性實驗

取四川地區黃柏溶液分別在0、2、6、12、18、24 h精密吸取5 μL，在上述色譜條件下進樣，鹽酸小檗堿峰面積的RSD=1.57%，表明供試品溶液在24 h 內穩定。

2.6 樣品測定

7 個產地的黃柏物質在“2.1.1”的條件下所得到的色譜圖，見圖2。

圖2 小檗堿標準物和七個地區黃柏小檗堿HPLC 譜圖

3 分析與小結

綜上所述，由上述譜圖相關信息根據標準曲線計算小檗堿含量平均值可得，各地區黃柏皮所含小檗堿含量分別為：吉林1.114 5 mg/g；遼寧2.778 8 mg/g；湖北4.167 6 mg/g；安康4.340 0 mg/g；四川3.943 4 mg/g；貴州4.811 8 mg/g；湖南2.618 9 mg/g。由此可知，貴州地區黃柏具有較多的小檗堿含量，其次為安康黃柏。從黃柏分類看，關黃柏中以湖北黃柏為代表有較好的含量，吉林地區的含量較少；川黃柏中較多含量以貴州地區黃柏為代表，較少含量則為湖南地區。此結論可為從以上地區的黃柏對比選擇中提供參考，以便后續對小檗堿的研究與發展。