牛感染布魯氏桿菌病的凈化措施

楊沛霖

隨著全國各地牛養殖業規模的不斷擴大，養牛數量越來越多，各種傳染性疾病發病率也呈現逐年上升的趨勢。布魯氏桿菌病是牛養殖業中較為常見的疫病之一，也是一種人畜共患病，具有較強的傳染性與危害性，已被我國列為二類動物性傳染病。該病一旦暴發流行，則會長期潛伏在養殖場內難以凈化，當前尚無特效藥可以治療，很容易給養殖戶造成不可挽回的經濟損失。因此，如何對牛布魯氏桿菌病進行有效凈化并做好預防控制工作顯得尤為重要。

一、牛布魯氏桿菌病原及流行特點

1、病原學特征

布魯氏桿菌病由布魯氏桿菌感染所致，其菌屬眾多，當前已知的就有19 個生物型、6 個種類，該病菌主要寄生在細胞內，侵襲力與傳播力均較強，主要侵害宿主淋巴系統及生殖系統。布魯氏桿菌外觀呈球桿、球型或短桿狀，其中牛屬菌多呈短桿狀，長度為0.5～1.3μm，寬度約為0.4μm，未長有鞭毛、莢膜和芽孢等結構，為革蘭式染色陰性菌，涂片鏡檢多呈單個排布。該病菌在外界環境中適應能力極強，陽光直射條件下可存活4h，但難耐濕熱環境，在60℃溫度條件下30min 即被滅活，70℃溫度條件下5min 即被滅活，100℃熱水中會被立即滅活，普通的消毒劑均可將其殺滅。

2、流行病學

人類與多種動物均易感染布魯氏桿菌病，其中，以牛、羊、豬等易感性最強，母畜比公畜更易感，成年動物比幼齡動物更易感，發病率也更高。布魯氏桿菌病在一年四季均可發生，尤以春、夏季高發。牛養殖場內患病牛與帶菌牛是該病主要的傳染源，公牛感染后期的精液、尿液、糞便中會攜帶大量病菌，患病的妊娠母牛生產或流產后，其乳汁、胎衣、胎盤羊水、惡露等分泌物中攜帶有大量致病菌，對產房周邊環境造成污染，健康牛接觸后染病。通常情況下，患有該病的妊娠母羊在流產后的3 年內，其陰道分泌物中仍帶有布魯氏桿菌。呼吸道、生殖道、消化道等是該病主要的感染途徑，也可通過破損的皮膚或黏膜等傳染該病。

二、臨床癥狀及病理變化

1、臨床癥狀

布魯氏桿菌病多呈地方性流行，牛只染病后通常會有15～180d 的潛伏期，大部分為隱性感染。不同年齡段牛感染該病后其臨床表現也有所不同，具有繁殖能力的成年牛是該病侵染的主要群體，患病后臨床表現較明顯，而未達到繁殖階段的犢牛感染該病后一般不會表現出明顯的臨床癥狀。新疫區的病牛多為急性經過，老疫區病牛呈慢性經過，但在妊娠牛群中多呈爆發性流行。種公牛染病后，陰莖紅腫、脹痛，常引發睪丸炎、附睪炎、睪丸壞死、滑膜囊炎、關節炎等癥狀。母牛染病后多在妊娠5～8 個月時突然流產，產出死胎、僵尸胎，部分產出弱胎，犢牛多在前期夭折。流產后出現胎衣不下、生殖道感染等癥狀，陰道持續流出氣味惡臭的紅褐色分泌物，后期多引發子宮炎癥。老疫區內妊娠母牛染病后通常不會流產，但會出現乳房炎、子宮內膜炎、關節炎等癥狀，且伴有屢配不孕、胎衣不下、局部腫脹等情況。

2、病理變化

解剖病死公牛與母牛，常見睪丸、附睪、前列腺、子宮等處存在膿腫，胎盤存在病變，呈淡黃色膠胨樣浸潤，表面粘連有大量膿性和絮狀分泌物，胎膜層厚度增加，且存在出血點。子宮粘膜、絨毛膜間積蓄大量濃塊和淡灰色污濁滲出物。少數胎兒皮下滲出血性液體，胸腔與腹腔中存在紅色積液，有自溶性變化。淋巴結腫大，呈彌漫性顆粒性淋巴結炎，顏色變黃且質地變硬，脾臟腫脹，存在壞死灶。

三、檢測方法

1、虎紅平板凝集試驗（RBPT）

虎紅平板凝集試驗是最常用的布魯氏桿菌病實驗室檢測方法之一。無菌采集病牛或疑似感染牛的血液，待凝固后分離出血清作為被檢材料。使用蠟筆在事先準備好的一塊玻璃板上均勻劃出邊長4cm 的方形小格，使用規格為0.2mL 的吸管在每1 方格內加入0.03mL 被檢血清，然后滴入0.03mL 的虎紅平板抗原，使用無菌細竹簽將其攪拌混勻。若4min 內觀察到凝集現象則判斷為陽性，未出現凝集則判斷為陰性。

2、全乳環狀試驗（MRT）

用溫水將患病母牛乳房清洗干凈，并用潔凈紗布擦干，將乳汁擠在無菌器皿中，取1mL 乳樣放入滅菌凝集試驗管內，滴入50μL 四氮唑抗原后搖晃均勻，放置于38℃溫水中培養60min，若觀察到乳柱上層乳脂存在紅色環帶，則可判斷為布魯氏桿菌。該方法是當前檢測牛布魯氏桿菌病的主要方法之一，操作簡便，出結果迅速，但易受隱性乳房炎影響出現假陽性反應，可配合其他檢測技術，確保檢測結果的準確性。

3、PCR 檢測技術

PCR 檢測技術即為生物鏈聚合酶鏈反應，是在現代生物分子學理論基礎上準確檢測致病原的核酸物質，陽性結果即可確診為布魯氏桿菌感染。該檢測技術僅需采集病牛分泌物等樣品即可完成檢測，具有較高的靈敏度與準確性，是當前實驗室診斷中較為先進且使用頻率最高的檢測技術，但該檢測技術成本較高，對儀器設備、操作人員技術的要求較高，基層部門需根據自身條件選擇性采用。

4、試管凝集試驗（SAT）

無菌采集病牛血液并制取血清，按照1∶100（含1000IU/mL）的比例進行稀釋，若出現“+ +”凝集現象，則可確診為陽性；若將牛血清按照1∶50（含50IU/mL）的比例稀釋，出現“+ +”凝集現象，可判定為可疑反應。結果為可疑反應的牛只，需經3～4 周重新采血檢測，若檢測結果仍為可疑反應，則可判定為陽性病牛。

四、凈化措施

1、采血檢測

整個養殖場的牛均需進行無菌采血，并按要求保存。樣品由樣品管理員統一接收，填寫《接收樣品登記表》和《檢測業務委托協議》，并檢查樣品符合性，之后將血液樣本按照順序進行唯一性編號記錄，送入實驗室進行血清分離。接樣人員、實驗室工作人員均需穿著工作服，帶好口罩與手套，做好個人防護工作，同時也可避免樣品被污染。實驗前后要對實驗室進行全面消毒，采集的血清樣本可用RBPT 檢測進行初篩，采用SAT 復檢，整個實驗過程應在生物安全柜內進行，操作流程嚴格按照《動物布魯氏桿菌病診斷技術》（GB/T18646-2018）進行，盡量減少氣溶膠產生量。檢測結束后，工作人員應脫掉1 次性防護服、手套、口罩、鞋套等裝入高壓滅菌袋中，用75%酒精或0.5%新潔爾滅徹底消毒雙手，最后用流動水沖洗干凈，面部可用消毒巾擦拭。將用過的血清管、檢測玻璃板、移液器吸頭、防護用品等進行高壓消毒后進行焚燒或深埋等無害化處理，并做好廢棄物處理或移交記錄。

2、分區凈化

根據實驗室檢測結果，將牛場合理劃分為控制區牛群、未控制牛群和凈化群，將健康牛、疑似牛與陽性牛分離開來，便于對牛群進行科學管理，提高牛養殖場布魯氏桿菌病的凈化效率。

3、陽性牛的處理措施

養殖場不可采用抽檢方式，應確保100%的檢測率，檢測結果連續2 次均為陰性的為凈化牛群。若檢測結果為陽性，應立即上報給畜牧獸醫主管部門，并對病牛進行撲殺與無害化處理，禁止消毒處理后流入市場危害人類健康。主管部門按照規定劃分出疫區與疫病威脅區，及時封鎖疫區，并禁止一切外來動物入內，進出疫區、疫點的車輛需經過嚴格的消毒。病牛圈舍、運動場等區域，可交替使用1%消毒靈、10%石灰乳、20%漂白粉全面消毒，2 次/d。料槽、飲水器等可用0.01%新潔爾滅或1‰高錳酸鉀溶液消毒，1 次/d，并用清水沖洗干凈、晾干后使用，牛群皮毛可用0.3%過氧乙酸或0.1%新潔爾滅消毒，1 次/3d。被病牛污染的飼料、飲水、排泄物，以及陽性妊娠牛流產后產出的胎兒、胎衣、惡露污染物等均需進行焚燒或深埋等無害化處理。深埋污染物時，挖坑深度盡量高出地下水位1.5cm 以上，坑的底部做好防滲、防漏處理，坑底部撒鋪1 層厚約5cm 的生石灰消毒，避免布魯氏桿菌的擴散蔓延。發病牛場在徹底消毒后需要經過3 個月的空場自然凈化期才能引進牛只飼養。

4、可疑牛群處理措施

對于檢測結果呈可疑反應的牛群，應立即進行隔離飼養，限制其活動范圍，并利用實驗室診斷方法進行復測，若仍判定為可疑牛群，則可將其歸類為陽性病牛，并給予對應措施處理。若經復檢，結果轉為陰性，則可將其隔離飼養30d 后再次復檢，結果仍為陰性的可放入健康牛群飼養。對于出現流產情況的母牛，應立即隔離飼養，并將母牛胎兒、羊水送檢，篩查布魯氏桿菌病。確診陽性的母牛，應將其與犢牛隔離飼養，并于犢牛5～9 月齡時進行布魯氏桿菌病檢測，結果呈陰性的方可進行疫苗接種。

5、常規檢測

養殖場需要制定符合本場的生物安全體系，尤其是規模化養牛場，不要過度依賴優良品種母牛群，堅持自繁自育，盡量避免從外場引進種牛。本場自繁自養牛群應在每年春秋兩季分別進行1 次全面布魯氏桿菌病檢測，并按照檢測結果實施分區管理。一旦本場內檢出陽性病牛，則需增加檢測頻率，堅持每1 個月檢測1 次，連檢3 個月，直至剩余牛只檢測結果均為陰性方可恢復每年2 次檢測制度。確需從外引種的，要按照規定做好檢驗檢疫工作，確保引種地無布魯氏桿菌病發生，引進的牛只需在距離本場100m 以外的地方隔離飼養45d 左右，期間進行2 次布氏桿菌病檢測篩查，結果全部為陰性且無其他異常后進行帶體消毒、常規疫苗接種后才能放入本場飼養。飼養滿1 年后按照自繁自養牛群的檢測方法進行常規檢測。

五、綜合防控

1、加大檢疫力度

目前，我國相關部門多次修改動物傳染性疾病防治技術規范，重新規定了牛布魯氏桿菌病相關防控流程及防治技術要求，尤其是養殖場引進外來種牛時，必須開具相關證明以確保該種牛來自非疫區，并要在裝卸過程中對其進行嚴格的檢驗，各方面合格后方能開展運輸工作。調運方面，需嚴格遵守疫病低風險區向高風險區調運，同等風險區相互調運的放入原則及相關要求。調運過程中，各區域動物防疫監督機構要及時對種牛運輸途中的檢疫合格證進行查詢，避免病牛或帶菌牛在運輸過程中進行疫病傳播。對于規模相對較大的牛養殖場，當地檢疫部門要做好每個季節的檢疫工作，并加強檢驗檢疫工作人員的專業技術培訓力度，提高檢疫隊伍整體素質水平及檢疫工作的規范性。在牛布魯氏桿菌病高發期，或周邊區域發生布魯氏桿菌病傳染情況的，需適當增加檢疫頻率，對傳染風險較大的養殖場進行多次疫病檢測，及時調查、記錄、分析養殖場牛群的來源、數量、規模以及飼養結構等，全面掌握該疾病的地方流行情況，為疫病防控奠定基礎。

2、定期接種疫苗

養殖場要在基層獸醫及防疫人員的指導下，科學制定適合本場的免疫接種計劃，每年定期為牛群接種布魯氏桿菌病疫苗。疫苗免疫雖不能徹底消除牛布魯氏桿菌病，但能有效減少該疾病的暴發與流行，相關研究表明，牛群接種布魯氏桿菌活疫苗后能起到75%的保護作用。現階段，市場上用于預防牛布魯氏桿菌病的疫苗包括羊型布魯氏菌M5 和豬型布魯氏菌S2 兩種。用法用量上，M5 為皮下注射250 億活菌/頭，S2 為肌肉注射500 億活菌/頭。免疫接種時間盡量安排在配種前30～60d，妊娠母牛禁止接種，同時避免與口蹄疫疫苗同時接種，防止產生免疫抑制現象。獸醫防疫人員要熟練掌握疫苗保存、運輸及使用方法，規范免疫接種手法，確保免疫成功。同時，管理人員應做好接種牛標記與免疫接種記錄工作，避免重復接種。

3、加強飼養管理

加強日常飼養管理，保持圈舍干凈衛生，可有效提高牛群生存質量，降低布魯氏桿菌病發生概率。養殖人員要定期清理圈舍內的糞便、尿液等污物，避免其堆積發酵滋生病菌與寄生蟲。將清理出來的糞便運往特定處理區堆積發酵，并噴灑廣譜滅蟲劑與消毒劑，滅殺糞便中的寄生蟲卵及各種病原微生物。合理安排養殖密度，避免活動空間過小惡化牛群生存環境。高溫季節注意防暑降溫，寒冷季節注意防寒保暖，并根據牛生長發育的各個階段對營養的需求規律科學配比飼料營養，確保飼料中蛋白質、維生素、礦物質等營養成分均衡，提高牛群體質，增強抗病能力。禁止飼喂發霉變質的飼料，控制飲用水質量，確保飲食、飲水安全。另外，犬、鼠、蚊、蠅、蜱蟲等均是牛布魯氏桿菌病的傳播媒介，會導致該疾病的傳播擴散，因此，養殖場內禁止養犬，并需定期開展滅鼠、滅蚊蠅、滅蜱蟲工作，切斷布魯氏桿菌病的傳播途徑。

4、做好消毒管理

做好養殖場消毒管理是防控牛布魯氏桿菌病傳播蔓延的重要措施之一。因此，養殖場要構建完善的消毒制度。定期使用84消毒液稀釋劑或2%～4%氫氧化鈉溶液對圈舍、運動場進行全面消殺，1 次/7d，確保消毒密度。金屬設施可用熏蒸、火焰等方式消毒。養殖場出入口處可設立氫氧化鈉消毒池，來往車輛、周邊環境等可采用2%燒堿進行消毒。對于硬化地面要確保完全浸濕消毒，而非硬化地面、土地浸透程度應不少于3cm。嚴格按照診療基礎操作規范對醫療器械進行徹底消毒，避免發生交叉感染，降低牛布魯氏桿菌病的傳染幾率。

5、人員防護與管理

對于經常接觸牛群及管理設施的工作人員，必須嚴格按照疫病防控要求做好個人防護。在診斷、治療、助產等特殊工作場景下，工作人員要穿戴好防護服，佩戴好1 次性橡膠手套、醫療口罩和防護眼鏡等。在參與疫病診療與防控過程中，工作人員不可中途飲水、吃東西，待工作完畢徹底消毒后再進食。若工作人員存在皮膚破損情況，應盡量避免與病牛直接接觸，以防經皮膚與黏膜感染布魯氏桿菌病。對于經常接觸病牛的工作人員，必須定期進行個人健康體檢，一旦檢查出布魯氏桿菌感染，要及時調離崗位接受治療，完全康復后再返回崗位。

總之，牛布魯氏桿菌病是一種危害性極強的傳染病，該病的傳播與流行不僅會給牛養殖業造成較大的經濟損失，且會給人類的生命安全造成威脅。因此，做好該疾病的凈化與防控工作對提高牛養殖場的經濟效益、保障人類生命安全具有重要意義。相關部門與牛養殖戶應深入了解布魯氏桿菌病基礎知識點，掌握該疾病的凈化程序，采取綜合性防控措施，促進牛養殖業的健康發展。