烏頭內生細菌JY-3-1R的鑒定及其生防和促生能力研究

鄒蘭 王茜 李慕儀 葉坤浩 黃晶

（1. 西南科技大學生命科學與工程學院，綿陽 621010；2. 綿陽市農業科學研究院中藥材研究所，綿陽 621023）

烏頭（Aconitum carmichaelii Debx.）是毛茛科（Ranunculaceae）烏頭屬（Aconitum）多年生草本藥用植物，其主根（母根）稱烏頭，子根稱泥附子［1］。烏頭常用入藥部位為其子根加工品，又稱附子。附子具補火助陽、回陽救逆、散寒止痛等藥理作用，被譽為回陽救逆第一品［2］。四川江油是烏頭道地產區［3］，其產品除滿足國內需求，還遠銷英國、日本、韓國等國家，國際國內對烏頭產品需求量仍逐年增加［2］。生產上，烏頭采用塊根無性繁種，種植過程中受白絹病等土傳真菌病害的嚴重威脅。如在道地產區，白絹病可使烏頭減產30%-60%，嚴重時可達70%-80%，甚至絕產［4］。由于抗病品種缺乏，化學農藥施用是藥農防治烏頭白絹病的主要措施，由此帶來環境污染、農殘及重金屬超標以及病原菌耐藥性等系列問題。烏頭白絹病病原菌為齊整小核菌（Sclerotium rolfsii），有性態為羅氏阿太菌（Athelia rolfsii），但有性態在自然界極為少見［5］。S. rolfsii可以侵染超過600種植物，導致白絹病、枯萎病、腐爛病的發生，對作物生產造成嚴重經濟損失［6］。菌核是S. rolfsii存在和傳播的主要方式，可以在土壤中存活很長時間，且對極端環境耐受性極強，因而化學農藥對該菌的防治效果不佳［6］。因此，烏頭土傳病害亟需高效、安全、綠色可持續防治方法。

生物防治，利用有益微生物拮抗、捕食、競爭或激發植物系統性抗性等方式抑制病原菌生長或侵染植物，經濟、安全且高效，是土傳病害防治的研究熱點［7］。生防菌的篩選是生物防治的關鍵。植物內生菌因其生活周期的全部或部分定殖在植物體內，與植物協同進化，其可通過分泌酶類、抗菌素、揮發性氣體等次生代謝產物、與病原菌競爭營養物質和生態位點或者激發植物系統性抗性等方式保障植物健康，是生防菌的重要資源庫［8］。部分內生菌可隨植物縱向遺傳，這對抗病植物育種具有重要意義［9］。烏頭內生菌的研究集中在其多樣性［10］、分泌生物堿［11-12］等方面，以烏頭內生細菌為生防材料防治土傳病害的研究比較匱乏。因此本研究從健康烏頭植株分離內生細菌，篩選具有高效抑菌能力的菌株，結合室內試驗和大田試驗研究其生防和促生潛力，并探究其作用機制，旨在為烏頭土傳病害生物防治提供優良菌種資源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 烏頭植物：健康烏頭植株采自烏頭道地產區四川省江油市三合鎮（31°49′44′ N，104°47′04′ E，海拔550 m）。烏頭品種為綿附1號，由綿陽農業科學研究院選育和保存。用鐵鍬沿著植物根部方向挖出整株植物，注意不要造成物理性傷口，抖掉根部土壤。植株裝入無菌塑料袋，24 h內帶回實驗室進行處理。

供試病原真菌：烏頭白絹病病原菌Sclerotium rolfsii?1由西北農林科技大學分離鑒定和提供，S.rolfsii?2由云南農業大學提供。烏頭根腐病病原菌Fusarium oxysporum?1和F. oxysporum?2由云南農業大學提供。

1.1.2 培養基 LB（Luria?Bertani）瓊脂培養基（g/L）：蛋白胨10，酵母粉5，NaCl 10，瓊脂12，pH 7.0-7.2；LB液體培養基為LB瓊脂培養基不加瓊脂。PDA（potato dextrose agar）培養基（g/L）：馬鈴薯200，葡萄糖20，瓊脂12。羧甲基纖維素（carboxymcthyl cellulose, CMC）培養基（g/L）：羧甲基纖維素鈉10，蛋白胨10，NaCl 10，酵母粉5，瓊脂粉12，pH 7.0-7.2；蛋白質培養基（g/L）：胰蛋白胨5，酵母粉2.5，葡萄糖1，脫脂牛奶7%，瓊脂粉12，pH 7.0-7.2；葡聚糖培養基（g/L）：K2HPO41，酵母粉5，蛋白胨10，葡聚糖5，MgSO4·7H2O 0.1，剛果紅0.4，瓊脂粉12，pH 7.0-7.2。

1.2 方法

1.2.1 烏頭內生細菌的分離 將烏頭植株用自來水沖洗掉沙土和塵埃，將植株不同組織（根、莖、葉）切成1 cm左右大小，并進行表面消毒。先用75%的酒精浸泡5 min，用無菌水清洗3次；接著用2%次氯酸鈉（有效氯含量）浸泡8 min，用無菌水清洗5次。吸取最后一次清洗液（100 μL）涂布于LB瓊脂培養基，28℃恒溫培養7 d，無菌落產生則表示表面消毒徹底，樣品用于內生菌的分離。將樣品在無菌粉碎機中粉碎，挑取樣品勻漿或粉末均勻接種在LB瓊脂培養基，28℃恒溫培養7 d，選取生長在樣品附近的菌落于新的LB瓊脂培養基進行純化（至少3次）直至獲得純菌株。

1.2.2 菌株拮抗病原菌能力測定

1.2.2.1 平板對峙試驗 候選細菌菌株接種在LB瓊脂培養基，28℃恒溫培養直至出現單菌落，挑取單菌落于無菌水中制成菌懸液。供試病原菌接種至PDA培養基，25℃恒溫培養至菌絲長滿培養基備用。將病原菌菌餅（直徑2 mm）接種至新的PDA培養基中央，在距菌餅2 cm處沿4個方向點接種候選細菌菌懸液（10 μL），于25℃恒溫培養7 d后測定病原菌菌落直徑大小。以病原菌同時接種無菌水為對照。

1.2.2.2 烏頭切片對峙試驗 選取新鮮健康無物理性傷口的烏頭或其子根，切成1 cm厚的薄片并進行表面消毒處理（同1.2.1）。將切片放置在無菌培養皿的無菌濕潤濾紙上，將供試細菌菌懸液（同1.2.2.1）接種至切片中間，干燥后接種病原菌菌餅。培養皿用parafilm封口，于25℃恒溫培養7 d后測定病原菌菌落直徑大小。以病原菌同時接種無菌水為對照。菌株對病原菌的抑制率采用以下公式進行計算: 抑菌率（%）=（對照組病原菌菌落直徑-處理組病原菌菌落直徑）/對照組病原菌菌落直徑 × 100%

1.2.3 菌株分類地位鑒定 挑取供試菌株單菌落接種至LB液體培養基，28℃恒溫培養至對數生長期。采用細菌DNA提取試劑盒（Rapid Bacterial Genomic DNA Isolation Kit）提取菌株總DNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測總DNA質量。對4個持家基因16S rRNA、atpD、gyrA和rpoB進行PCR擴增。PCR擴增體系為：2 × Mix 12.5 μL，10 μmol/mL的Primers F 1 μL，10 μmol/mL的Primers R 1 μL，模板DNA 1 μL，ddH2O 9.5 μL。擴增用引物和程序如表1所示。擴增PCR片段采用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，并用DNA回收試劑盒進行純化，純化后的DNA片段送至北京擎科生物公司進行測序。所得序列在NCBI數據庫進行序列比對并選取參比菌株（若參比菌株已知全基因組信息，則從中選擇目標基因序列用于后續建樹分析）。采用Mega X Cluster W對供試菌株序列和參比菌株序列進行單基因和多基因序列比對，采用Neighbor?Joining法構建單基因和多基因聯合系統發育樹。

表1 持家基因擴增用引物及反應程序Table 1 Primers and reaction procedure for housekeeping genes

1.2.4 菌株對病原菌的拮抗機理

1.2.4.1 菌株無細胞發酵濾液對病原菌菌絲生長、菌核形成和萌發的影響 將白絹病病原菌S. rolfsii?1接種至PDA培養基，25℃恒溫培養9 d直至獲得成熟菌核，搜集菌核備用。將供試菌株接種至LB固體培養基，28℃恒溫培養直至出現單菌落，挑取單菌落于100 mL LB液體培養基培養3 d。采用一次性微孔濾膜（直徑0.22 μm）將菌株發酵液進行過濾除菌獲得無細胞發酵濾液。將無細胞發酵濾液與溫熱的無菌PDA培養基混合（V∶V=1∶4）并制作平板，獲得含無細胞發酵濾液的PDA混合培養基。以含無菌LB液體培養的PDA混合培養基為對照。將病原菌菌餅或菌核（12個/皿）接種至混合培養基，28℃恒溫培養9 d，觀察病原菌菌絲生長、菌核形成數量以及菌核萌發數量。

1.2.4.2 菌株功能基因PCR擴增 選取脂態（lipopeptides）、二肽類（dipeptide）和聚酮類化合物（polyketides）相關功能基因進行PCR擴增，包括ituC、fenB、fenD、srfAA、bmyB、bacA、baeA和mnlA。PCR擴增用體系、引物和程序參照Ben Khedher等［13］方法。PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。

1.2.5 菌株促生能力測定

1.2.5.1 菌株產IAA能力測定 采用Salkowski比色法測定菌株產吲哚乙酸（indoleacetic acid, IAA）的能力［14］。挑取菌株單菌落接種至含1 mL L?色氨酸（2.5 mg/mL）的LB液體培養基（5 mL），28℃恒溫培養2 d，離心取上清液（2 mL）加入4 mL Salkowski比色液［1 mL 0.5 mol/L FeCl3, 49 mL HClO4（35%, V∶V）］，室溫暗處理30 min后在530 nm波長下測定吸光值。配置不同濃度的IAA標準樣品（0，5，10，20，40，60 mg/L），遵照上述方法測定吸光度值并繪制標準曲線，計算候選菌株產IAA的含量。

1.2.5.2 菌株分泌鐵載體能力測定 CAS染色液配置：將溶于10 mL雙蒸水中的0.012 g鉻天青與FeCl3·6H2O溶液（2 mL 1 mmol/L）混合均勻獲得溶液a；0.015 g十六烷基三甲基溴化銨溶于8 mL雙蒸水，獲得溶液b；在不停攪拌的情況下將a液緩慢加到b液中，混合均勻，115℃滅菌20 min，即獲得CAS染色液。配置10 × MM9溶液：Na2HPO430 g，KH2PO41.5 g，NaCl 2.5 g，NH4Cl 5 g，雙蒸水補足500 mL。CAS培養基：100 mL 10 × MM9溶液,1 mL CaCl2（1 mmol/L）, 20 mL MgSO4（1 mmol/L），10 mL葡萄糖（20%），30 mL酪蛋白氨基酸溶液（10%），100 mL CAS染色液，瓊脂粉12 g，去離子雙蒸水補足1 000 mL，pH 6.8-7.0。挑取供試菌株單菌落于1 mL無菌水制成菌懸液，點接種（10 μL）在CAS培養基，28℃恒溫培養3 d，每個處理3次重復，觀察是否產生橙色透明圈。

1.2.5.3 菌株產酶能力測定 挑取供試菌株單菌落于1 mL無菌水制成菌懸液，分別點接種（10 μL）在CMC培養基、蛋白質培養基和葡聚糖培養基，每個處理3次重復，28℃恒溫培養3 d，觀察是否有透明圈存在。CMC培養基用剛果紅（1%）溶液染色，觀察是否有透明圈存在。

1.2.6 大田試驗 大田試驗在西南科技大學試驗基地進行（31°32′01′ N，104°41′43′ E，海拔470 m），該基地已經連續3年種植烏頭，土壤類型為水稻土，烏頭品種為綿附1號。采用隨機區組試驗，每個小區（2.0 m × 3.7 m=3.7 m2）種植200株植物，株距15 cm, 行距25 cm。挑取供試菌株單菌落接種于1 L LB液體培養基，28℃，150 r/min培養至對數生長期獲得發酵液。烏頭修根時（4月下旬），采用無菌注射器接種發酵液（10 mL, 1 × 109CFU/mL）于烏頭根部傷口處，并覆土。無菌LB液體培養基作為陰性對照，接種時間、接種量和方法同菌株發酵液處理。每個處理接種100株，3次重復。接種菌株發酵液后每7 d調查統計白絹病發病植株數量。發病烏頭植株表現為地上部萎焉、枯萎甚至死亡，地下部及其周圍土壤存在白色病原菌菌絲、白色或黑色菌核。烏頭收獲時（6月初），每個小區每個處理隨機選取5株健康植株，測定烏頭、子根、莖鮮重和干重。烏頭白絹病田間發病率和菌株生防效率采用以下公式進行計算：

白絹病發病率（%）=發病植株數量/調查總植株數 × 100%

生防率（%）=（對照組發病率-處理組發病率）/對照組發病率 × 100%

1.2.7 數據處理 數據采用單因素方差分析，應用t檢驗法進行差異顯著性檢驗，P＜0.05時表示差異顯著。采用Excel 2016和SPSS 25.0進行數據統計和分析，采用Origin 2022制圖。16S rRNA、atpD、rpoB和gyrA基因序列已上傳至GenBank數據庫，序列號分別為：OQ940466, OQ954435, OQ954437和OQ954430。

2 結果

2.1 拮抗菌株的分離篩選

從健康烏頭植株分離獲得內生細菌111株。采用平板對峙和烏頭切片對峙篩選到1株顯著抑制白絹病病原菌和根腐病病原菌的烏頭內生細菌JY?3?1R（圖1）。如表2所示，在PDA平板上，JY?3?1R對S.rolfsii的抑制率高達53.13%，對F. oxysporum的抑制率高達52.07%。在烏頭切片上，JY?3?1R對S. rolfsii的抑制率高達49.68%，對F. oxysporum的抑制率高達46.30%（表2）。因此，JY?3?1R作為后續試驗供試材料，探究其分類地位、促生和生防潛力。

圖1 JY-3-1R對病原真菌的抑制效果Fig. 1 Inhibition effects of JY-3-1R against pathogenic fungi

表2 JY-3-1R對病原真菌的抑制效果Table 2 Inhibition effects of JY-3-1R against pathogenic fungi

2.2 JY?3?1R分類地位鑒定

對JY?3?1R 16S rRNA、atpD、gyrA和rpoB基因進行PCR擴增，分別獲得一條1 500 bp、600 bp、750 bp、560 bp的目標條帶。基于16S rRNA基因的系統發育結果表明，JY?3?1R與芽孢桿菌聚為一個分支（圖2?A），相似度為99.72%。基于atpD?gyrA?rpoB的聯合系統發育樹結果表明，JY?3?1R與解淀粉芽孢桿菌聚為一個分支（圖2?B），相似度達98.05%。因此，JY?3?1R鑒定為解淀粉芽孢桿菌。

圖2 JY-3-1R基于16S rRNA（A）和gyrA-rpoB-atpD多位點持家基因（B）的系統發育研究Fig. 2 Phylogenetic analysis of JY-3-1R based on 16S rRNA gene（A）and multi-locus sequence analysis of gyrA, rpoB and atpD genes（B）

2.3 JY?3?1R對S. rolfsii的拮抗機理

2.3.1 JY?3?1R無細胞發酵濾液對S. rolfsii生長、菌核形成和萌發的影響 如圖3?A所示，對照處理的S. rolfsii菌絲在72 h時幾乎長滿整個培養基，在120 h左右開始出現白色菌絲球，在192 h左右形成褐色成熟菌核。JY?3?1R無細胞發酵濾液在216 h內均完全抑制S. rolfsii的生長（抑制率100%）。對照處理的S.rolfsii菌核在48 h內開始萌發，72 h菌核萌發形成肉眼可見菌絲體。而JY?3?1R無細胞發酵濾液處理的S. rolfsii菌核在120 h仍不萌發，對菌核萌發抑制率為100%（圖3?B）。

圖3 JY-3-1R無細胞發酵濾液對齊整小核菌菌絲生長和菌核萌發的影響Fig. 3 Effects of cell-free culture filtrate of JY-3-1R on the hyphal growth and sclerotia germination of S. rolfsii

2.3.2 JY?3?1R抑病相關功能基因擴增 以JY?3?1R基因組DNA為模板，成功擴增到8個功能基因包括ituC（594 bp）、fenB（670 bp）、fenD（269 bp）、srfAA（201 bp）、bmyB（370 bp）、bacA（500 bp）、baeA（688 bp）、mnlA（668 bp）（圖4）。

圖4 JY-3-1R功能基因PCR產物凝膠電泳Fig. 4 Gel electrophoresis of JY-3-1R functional genes by PCR amplification

2.4 JY?3?1R產IAA、鐵載體和分泌酶能力

Salkowski比色檢測結果表明，JY?3?1R能分泌IAA，其分泌量為2.86 mg/L。接種JY?3?1R菌懸液至CAS培養基后在菌落附近檢測到橙黃色透明圈，說明JY?3?1R具分泌鐵載體的能力。利用底物降解平板培養法，JY?3?1R具分泌蛋白酶、纖維素酶和葡聚糖酶的能力（圖5）。

圖5 JY-3-1R產IAA、鐵載體和分泌酶類能力Fig. 5 Abilities of JY-3-1R producing IAA, siderophore,and secretases

2.5 JY?3?1R對烏頭白絹病的田間防治效果評價

隨著時間增加，不接菌處理（對照組）烏頭植株白絹病發病率持續增加，在第7天、14天、21天和30天的白絹病發病率分別為10.83%、25.83%、32.50%和54.17%。JY?3?1R發酵液接種后第7天、14天、21天和30天后的烏頭植株的白絹病發病率分別為1.67%、5.00%、12.50%和15.83%。從第14天開始，JY?3?1R接種處理的烏頭白絹病發病率顯著低于對照組處理（圖6）。JY?3?1R對烏頭白絹病的生防效率為61.53%-84.61%。

圖6 JY-3-1R對烏頭白絹病的田間防病效果Fig. 6 Biocontrol potential of JY-3-1R against southern blight by field experiment

2.6 JY?3?1R對烏頭生長的影響

烏頭收獲后，測定烏頭植株莖、主根（烏頭）及子根鮮重和干重，比較分析JY?3?1R對烏頭生長的影響。結果表明，JY?3?1R接種處理的植株莖和烏頭的鮮重和干重分別為37.68、9.35、28.43和5.77 g/株，顯著高于對照組烏頭（表3），分別比對照組增加34.67%、34.34%、46.24%、82.59%。JY?3?1R接種處理子根鮮重為77.17 g/株，比對照組處理（48.54 g/株）增加58.98%。JY?3?1R處理子根干重為20.01 g/株，比對照組（12.82 g/株）高出56.08%。

表3 JY-3-1R對烏頭生長的影響Table 3 Plant growth promoting effect of JY-3-1R on A.carmichaelii

3 討論

利用有益微生物防治作物土傳病害已成為農業綠色可持續發展的重要手段。常用來防治土傳白絹病的有益微生物包括木霉菌、假單胞菌、芽孢桿菌等，已在大豆、花生、甜菜等經濟作物相繼報道［15-17］。分離自草莓根際土的灰黃青霉菌（Penici?llium griseofulvum）、密旋鏈霉菌（Streptomyces pact?um）和婁徹氏鏈霉菌（S. rochei）對陜西地區烏頭根腐病和白絹病有一定的抑制作用［5,18］。然而利用烏頭內生菌防治土傳白絹病的研究仍比較匱乏。因此，本研究從烏頭道地產區采集健康植株，分離烏頭內生細菌，篩選到一株顯著抑制白絹病病原菌S.rolfsii和根腐病病原菌F. oxysporum的菌株JY?3?1R。基于16S rRNA和多位點持家基因（atpD、rpoB和gyrA）聯合系統發育樹的結果表明JY?3?1R為解淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefaciens）。研究指出，解淀粉芽孢桿菌在植物病害防治方面有著巨大潛力，如分離自人參根際土的B. amyloiuquefaciens FG14 對人參銹蝕根腐病病原菌Ilyonectria robusta的抑制率高達90%［19］；B. amyloliquefaciens YZU?SG146對棉花黃萎病病原菌Verticillium dahliae具有顯著抑制效果，盆栽試驗中對該病的生防效率達84.2%，同時對Sclerotium、Alternaria、Rhizoctonia、Fusarium等多種病原菌具有抑制作用［20］。

菌核是S. rolfsii傳播和侵染植物的主要形式，菌核在適宜條件下萌發成菌絲并侵染植物，因而高效生防菌的篩選應考慮其對S. rolfsii菌核萌發的抑制作用。灰黃青霉菌P. griseofulvum CF?3無細胞發酵濾液在48 h 內對S. rolfsii菌核萌發的抑制率為44.2%，但在96 h時，該抑制率下降至8.3%［5］。分離自棗椰樹的B. velezensis NC318對S. rolfsii有顯著抑制作用，其細胞發酵濾液對S. rolfsii菌絲生長抑制率高達97%，對S. rolfsii菌核萌發的抑制率為46.78%，該抑制效果可持續10 d［21］。B.amyloliquefaciens JY?3?1R及其無細胞發酵濾液對S.rolfsii菌絲生長和菌核萌發菌有顯著的抑制作用，特別是該菌的無細胞發酵濾液對病原菌菌絲和菌核萌發的抑制作用達到100%，該抑制作用可持續至少120 h。對比結果表明JY?3?1R對S. rolfsii表現出較強的抑制作用，具有較好的生防潛力。

B. amyloliquefaciens對病原菌的拮抗機制包括分泌具抑菌活性的次生代謝產物、與病原菌競爭營養物質或生態位點以及激發植物系統性抗性［22］。其中，分泌抑菌代謝物質拮抗病原菌是生防菌防治土傳病害的重要作用機制，該機制常作為室內生防菌初步篩選的重要指標，抑菌產物的分離和鑒定對生防菌肥的研制和使用也具有重要意義［23-25］。JY?3?1R無細胞發酵濾液完全抑制S. rolfsii菌絲生長和菌核萌發（抑制率100%），說明該菌分泌了具較強抑菌活性的代謝產物。為進一步挖掘JY?3?1R可能分泌的抑菌代謝產物，本研究對其抑菌相關功能基因進行了擴增。結果表明，JY?3?1R基因組包含ituC、fenB、fenD、srfAA、bmyB、bacA、baeA和mnlA相關功能基因。其中ituC基因參與伊枯草菌素（iturin）的合成，fenB和fenD基因參與豐原素（fengyin）的合成，srfAA參與表面活性素（surfactin）的合成，bmyB參與芽孢菌霉素（bacillomycin）的合成，以上物質歸屬于環狀脂態（cyclic lipopeptides），對病原真菌和細菌具有很強的拮抗作用［13,22］。bacA基因參與桿菌溶素（bacilysin）的合成，baeA參與桿菌烯（bacillaene）的合成，而mnlA參與大環內酯（macrolactin）的合成，這些物質歸屬于聚酮類化合物，對病原真菌和細菌具有較強的抑制作用［13,22］。因而我們推測JY?3?1R不僅能抑制真菌性病原菌，對病原細菌也具有一定的抑制作用。此外，本研究證實JY?3?1R可以分泌蛋白酶、葡聚糖酶和纖維素酶，這些酶類可以直接作用于病原真菌的細胞壁，破壞細胞壁結構，使細胞內含物流失，進而殺死病原菌［26-27］。研究指出生防菌可通過分泌鐵載體與病原菌競爭土壤中的鐵元素，進而抑制病原菌生長［28］。本研究發現，JY?3?1R具分泌鐵載體的能力，其也可能通過分泌鐵載體在土壤環境抑制病原菌的生長，但其分泌鐵載體的種類及其作用機制有待進一步研究。綜上所述，JY?3?1R對S. rolfsii的拮抗機理主要為其分泌了具抑菌活性的次生代謝產物，包括環狀脂態和聚酮類化合物、酶類、鐵載體等物質，以上代謝產物的鑒定和作用機制的解析將有利于探究JY?3?1R對S. rolfsii的抑制機理和新型生防材料的挖掘。

由于JY?3?1R對病原菌表現出較強的抑制作用，本研究進一步探究了JY?3?1R在大田條件下對烏頭白絹病的生防和促生效果。大田條件往往比室內和溫室環境更為復雜，特別是環境中數量和種類繁多的土著微生物往往會抑制生防菌生長，因而有些在室內具有抑菌作用的菌株在田間往往效果不理想［7,29］。然而JY?3?1R在大田條件下對白絹病具有顯著的防治效果，生防率為61.53%-84.61%，生防能力可以持續30 d，相對于對照處理，JY?3?1R接菌處理可降低白絹病發病率近40%。研究指出，在陜西地區，P. griseofulvum CF3和放線菌菌絲粉末施用土壤后，降低約20%的烏頭白絹病發病率［5,18］。雖然陜西和四川江油生態環境可能存在差異，但JY?3?1R在烏頭道地產區表現出較好的生防潛力。此外，該菌還顯著提高了烏頭植株莖、主根和子根的生物量，表現出較強的促生能力。其促生能力可能由于該菌可以分泌IAA和鐵載體。IAA為植物生長激素，促進細胞分裂和擴增，是植物生長的重要調控因子［30］。鐵元素是植物生長的重要元素，但土壤中有效鐵的含量往往較低［28,31］。微生物可以通過分泌鐵載體吸收土壤中的鐵元素，進而促進植物生長［31］。

4 結論

本研究從健康烏頭植株分離到1株內生細菌JY?3?1R，該菌對白絹病和根腐病病原菌具有顯著抑制作用，大田試驗證實該菌可以顯著降低烏頭白絹病發病率并提高烏頭植株生物量，表現出較好的生防和促生潛能，其潛在作用機制包括分泌酶類、環酯類化合物、聚酮類化合物、鐵載體及IAA。JY?3?1R被鑒定為解淀粉芽孢桿菌，具有開發為促進烏頭生長和防治烏頭白絹病的生物肥料和生防材料的潛力。