規模羊場與散養戶羊小反芻獸疫抗體水平檢測分析

楊先富　包濤濤　吳通奎　黃功明　袁曉娟　莫興虎　楊勝紅

摘 要 為了掌握貴州省黔東南州規模羊場和散養戶羊小反芻獸疫免疫抗體水平，從6個規模羊場和10個散養戶采集羊血清742份，用小反芻獸疫酶聯免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）法檢測抗體。結果表明，規模羊場、散養戶平均合格率分別為80.83%、68.06%，規模羊場表現優于散養戶；1個規模羊場和4個散養戶的抗體合格率低于農業農村部規定的合格標準（70%）。建議未達標的規模羊場開展免疫抗體檢測，根據抗體變化規律，制訂適合本場的小反芻獸疫疫苗免疫程序；對未達標散養戶加強宣傳和開展技術培訓，改善羊群飼養管理條件、提高羊群體質，按照免疫程序開展小反芻獸疫疫苗免疫。

關鍵詞 羊；小反芻獸疫；抗體水平；檢測分析；貴州省黔東南州

中圖分類號：S855.3 文獻標志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2023.17.069

小反芻獸疫通常又被稱為羊瘟，是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性病毒性傳染性疫病[1]。PPRV屬于副黏病毒科麻疹病毒，主要感染山羊、綿羊等小反芻動物[2]。感染PPRV后，羊會出現高熱稽留、眼鼻分泌物增多、口腔黏膜糜爛、腹瀉、肺炎等癥狀，還常常表現出離群獨處、臥地不起、體質虛弱、覓食困難、肛門周圍有黑色附著物等[3]。小反芻獸疫主要通過接觸和氣溶膠途徑傳播，一年四季都有可能發生[4]。該病于1942年在非洲科特迪瓦首次被發現，當前在我國周邊的阿富汗、印度、巴基斯坦等國家，小反芻獸疫呈流行性發生。2007年，小反芻獸疫首次在我國西藏自治區發生，2014年小反芻獸疫在我國新疆、西藏、甘肅、山西等20多個省市零星暴發，近５年來我國小反芻獸疫呈現出散發流行趨勢，如2018年黑龍江省佳木斯市，江蘇省如皋市、海安縣、如東縣，遼寧省調兵山市，湖南省耒陽市相繼發生小反芻獸疫疫情。2020年５月至2021年５月，全國共報道18起小反芻獸疫疫情，其中14起涉及地區包括新疆生產建設兵團、青海、西藏及內蒙古，其余4起疫情分別發生在遼寧省清原縣，青海省格爾木市，西藏自治區堆龍德慶區、尼木縣、當雄縣交界處及青海省都蘭縣國家自然保護區[5]。國內也有多起野生動物發生小反芻獸疫的報道，如青海省都蘭縣國家自然保護區的野生巖羊，西藏自治區堆龍德慶區、尼木縣、當雄縣交界處的野生巖羊，新疆維吾爾自治區烏魯木齊市和庫車市的鵝喉羚種群等，都曾發生過小反芻獸疫疫情[6]。

小反芻獸疫在我國被列為一類動物疫病，羊一旦感染PPRV，將很快在羊群中大面積傳播，給養羊業造成嚴重的經濟損失。因此，防治小反芻獸疫十分重要，而在小反芻獸疫的防控中，疫苗接種是最重要、最常見的防控措施之一[7]。到目前為止，已經研究成功的疫苗主要有減毒活疫苗、滅活疫苗、重組疫苗，因此開展小反芻獸疫疫苗免疫，加強對小反芻獸疫疫情的預防和監測，掌握規模場和散養戶羊小反芻獸疫疫苗的免疫效果，不僅能有效保障黔東南州羊及羊類產品質量安全，有效控制小反芻獸疫的發生，還能為小反芻獸疫的防控提供重要依據。基于此，2023年上半年本團隊在貴州省黔東南州的6個規模羊場和10個散養戶采集羊血清樣品共計742份，進行小反芻獸疫抗體檢測，并對檢測結果進行分析，現將情況報道如下。

1? 材料與方法

1.1? 羊血清樣品與檢測試劑

羊血清采集于黔東南州6個規模羊場、10個散養戶，共計742份（其中規模羊場360份、散養戶382份）。小反芻獸疫酶聯免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）抗體檢測試劑盒（批號：20221116），由深圳市萊孚生物科技有限公司生產。

1.2? 免疫抗體檢測與結果判定

1.2.1? 抗體檢測

1）洗滌液配制。用蒸餾水將洗滌液10×（2號液）按1∶10體積稀釋為工作濃度洗滌液。

2）樣品稀釋及加樣。用樣品稀釋液（5號液）將待檢血清按1∶100體積稀釋，每個樣品孔加100 μL。

3）加陰、陽性對照品。陰性對照2孔，每個孔陰性對照品（試劑盒內提供）加入100 μL；陽性對照2孔，每個孔加陽性對照品（試劑盒內提供）100 μL，蓋好封板膜，37 ℃避光反應30 min。

4）洗板。甩去孔內液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1 min，最后1次甩凈，拍干。

5）加酶反應。每孔加酶標結合物（1號液）100 μL，蓋好封板膜，37 ℃避光反應30 min。后面操作同前述洗板方法。

6）顯色反應。按所需用量，臨用前取等體積底物溶液（3號液）和顯色液（4號液）充分混勻，每孔加100 μL，蓋好封板膜，37 ℃避光反應15 min。

7）終止反應。加終止液（6號液）50 μL，用酶標儀于450 nm波長讀取OD值。

1.2.2? 有效性判定

陰性對照孔OD450值不應大于0.20，否則小反芻獸疫抗體檢測試驗無效；陽性對照孔OD450值不應小于0.50，否則小反芻獸疫抗體檢測試驗無效。

1.2.3? 檢測結果判定

S/P值為樣品OD值與陽性對照平均OD值的比值。S/P≥0.20，判斷為小反芻獸疫抗體陽性；S/P＜0.20，判斷為小反芻獸疫抗體陰性。

2? 結果與分析

經測定，陰性對照OD450平均值為0.05，小于0.20；陽性對照OD450平均值為0.89，大于0.50。說明此次小反芻獸疫抗體檢測試驗有效。

2.1? 規模羊場羊小反芻獸疫免疫抗體合格率

規模羊場小反芻獸疫免疫抗體檢測結果如表1所示，檢測6個規模羊場羊血清360份，合格數為291份，平均合格率為80.83%，合格率較高，超過農業農村部規定的合格標準（70%）；但是不同的規模羊場抗體水平存在差別，抗體合格率最高的是1號場，合格率為90.00%；其次是2號場、3號場，合格率分別是85.71%、85.24%；再次是5號場、4號場，抗體合格率分別是78.18%、77.78%；6號場抗體合格率最低，僅為67.24%，低于農業農村部規定的合格標準。

2.2? 散養戶羊小反芻獸疫免疫抗體合格率

散養戶羊小反芻獸疫免疫抗體檢測結果如表2所示，檢測10個散養戶羊血清382份，合格數為260份，平均合格率為68.06%，低于農業農村部規定的合格標準（70%）。但是不同散養戶之間羊小反芻獸疫抗體合格率存在差異，抗體合格率較高的有10號、8號、3號，其次是1號、4號、6號，抗體合格率低于農業農村部規定合格標準的有5號、7號、2號、9號。

2.3? 規模羊場與散養戶羊小反芻獸疫免疫抗體水平比較

規模羊場與散養戶羊小反芻獸疫免疫抗體水平存在明顯差別。從平均合格率來看，規模羊場抗體平均合格率（80.83%）高于散養戶抗體平均合格率（68.06%）；從抗體合格場（戶）來看，6個規模羊場有5個規模羊場達到農業農村部規定的合格標準，占比83.33%，10戶散養戶只有6戶達到農業農村部規定的合格標準，占比60.00%。可見，規模羊場羊小反芻獸疫免疫抗體水平明顯高于散養戶羊小反芻獸疫免疫抗體水平。

2.4? 規模羊場與散養戶羊小反芻獸免疫抗體S/P值比較

從表1來看，1號場小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P值最高，6號場小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P值最低；從表2來看，10號養殖戶小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P值最高，9號養殖戶小反芻獸疫免疫抗體合格率和S/P值最低。由此推斷，小反芻獸疫免疫抗體S/P值與合格率呈正相關，即小反芻獸疫免疫抗體合格率越高，S/P值越高，疫情風險越低，反之疫情風險就越高；6個規模羊場羊小反芻獸疫免疫抗體S/P值平均為0.49，10戶散養戶羊小反芻獸疫抗體S/P值平均為0.32，規模羊場S/P值明顯高于散養戶。

3? 小結

在正常情況下，小反芻獸疫疫苗免疫1次，抗體保護期限為3年[8]。這次檢測結果顯示，在黔東南州6個規模羊場中，僅有1個規模羊場小反芻獸疫免疫抗體不合格，占比16.67%；在10戶散養戶中，有4戶小反芻獸疫免疫抗體不合格，占比達40%。對于羊群小反芻獸疫免疫合格率未達標的情況，經過仔細調查與分析，歸納出3方面的原因：1）最后一次小反芻獸疫疫苗免疫時間接近或超過3年，導致羊群抗體水平降低。2）飼養管理不當，致使羊群體質變弱，導致羊群免疫應答能力下降。3）部分養殖戶不按照小反芻獸疫疫苗免疫程序進行免疫接種。

為了做好羊群的小反芻獸疫免疫工作，提高小反芻獸疫免疫抗體合格率，杜絕小反芻獸疫的發生，提出以下建議。1）對于小反芻獸疫免疫抗體未達標的規模羊場，建議定期開展小反芻獸疫免疫抗體檢測，根據免疫抗體變化規律，制訂適合本場的小反芻獸疫疫苗免疫程序。2）對于小反芻獸疫免疫抗體未達標的散養戶，動物防疫部門應加強宣傳，或對養殖戶進行培訓，使養殖戶掌握動物疫病防治的基本知識，增強他們的防疫意識，提高養殖戶防疫技術水平；改善羊群飼養管理條件，提高羊群體質；嚴格按照免疫程序開展小反芻獸疫疫苗免疫，提高羊群免疫力。

參考文獻：

[1] 楊先富，莫興虎，楊勝紅，等.黔東南州規模羊場小反芻獸疫免疫抗體水平調查[J].農技服務，2021，38（2）：52-53.

[2] 耿懷洋.小反芻獸疫的診斷與防控[J].養殖與飼料，2020（3）：116-117.

[3] 闞威，李雷斌，趙旭陽，等.青海巖羊源小反芻獸疫病毒N、F基因的遺傳進化分析[J].獸類學報，2023，43（2）：171-181.

[4] 王睿，王巍.小反芻獸疫的防控[J].北方牧業，2023（5）：30-31.

[5] 宋煥堂，江萍，丁劍，等.新疆小反芻獸疫流行現狀及防控措施[J].現代畜牧獸醫，2021（6）：84-87.

[6] 高睿，羅艷，莊向婷，等.以小反芻獸疫防控為例淺談規模化羊場生物安全體系建設[J].吉林畜牧獸醫，2022，43（6）：121-124.

[7] 趙川.小反芻獸疫疫苗研究進展[J].中國動物保健，2023，25（4）：125-126.

[8] 楊先富，廖飛，袁曉娟，等.從一例小反芻獸疫的發生到撲滅給我們的啟示[J].中國獸醫雜志，2017，35（5）：119-120.

（責任編輯：張春雨? 丁志祥）

收稿日期：2023-07-17

作者簡介：楊先富（1965—），男，貴州天柱人，碩士，正高級獸醫師，從事動物疫病防控技術研究。E-mail：fxy6666yeah.net@163.com。