玉米粉中戊唑醇基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制

李開瑞, 劉嘯林, 李奉杰, 慕建州, 涂曉慧, 程 婷, 賈明宏

(北京農(nóng)學(xué)院生物與資源環(huán)境學(xué)院1,北京 102206)

(江蘇衡譜分析檢測(cè)技術(shù)有限公司2,南京 210046)

(北京諾碼標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)有限公司3,北京 102206)

(天津檢通生物技術(shù)有限公司4,天津 300457)

農(nóng)藥是有效保障糧食高產(chǎn)的主要措施之一,在糧食生產(chǎn)中起著不可或缺的作用。但農(nóng)藥的盲目使用所帶來(lái)的農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題一直是民眾關(guān)注的重點(diǎn),如何更加準(zhǔn)確測(cè)定出農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留,是食品和農(nóng)產(chǎn)品安全質(zhì)量控制的研究熱點(diǎn)。因此,農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以及基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制,對(duì)于我國(guó)食品安全的質(zhì)量控制具有重要意義[1]。

戊唑醇屬于三唑類農(nóng)藥,以含氮五元雜環(huán)為活性基團(tuán),抑制真菌甾醇合成。主要用于防治小麥、玉米、花生、蔬菜、水果等作物上的多種真菌病害,一般對(duì)白粉菌屬、柄銹菌屬、喙孢屬、核腔菌屬和殼針孢屬引起的病害均能有效防治[2]。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(Reference Material,RM)是相對(duì)于一種或者幾種已經(jīng)得到確證并且適合用于測(cè)量測(cè)試中的預(yù)計(jì)功能的特性,穩(wěn)定性和均勻性均足夠的物質(zhì),經(jīng)常作為定性與定量的一種“標(biāo)桿和量具”[3],是分析檢測(cè)過程中質(zhì)量保證的基礎(chǔ)。基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是一種具有實(shí)際樣品特性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),即目標(biāo)物與基體結(jié)合,其理化性質(zhì)與真實(shí)檢測(cè)樣品一致,可用于食品分析方法確認(rèn)和質(zhì)量控制,并可有效避免基體效應(yīng)對(duì)物質(zhì)成分檢測(cè)的影響,進(jìn)而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度[4,5]。現(xiàn)階段我國(guó)對(duì)于農(nóng)殘基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制較少,截至2018 年,我國(guó)的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)僅有96 種,其中用于有機(jī)分析檢測(cè)的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)僅有24種[6,7]。顧小紅等[8]研制了玉米粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),牛欣寧等[9]研制了以玉米為基體的伏馬毒素 FB1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),孟佳佳等[10]研制了玉米粉中伏馬毒素B1和B2基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),王璐等[11]研制了芹菜中7種農(nóng)藥及其代謝物基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備,截至目前,鮮見玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制報(bào)道。

目前,國(guó)內(nèi)已登記的用于防治玉米大斑病、小斑病、灰斑病、絲黑穗病等病癥的戊唑醇農(nóng)藥種類已有97種,但國(guó)內(nèi)鮮有玉米中戊唑醇?xì)埩舻腗RL值,本實(shí)驗(yàn)選擇玉米粉中的戊唑醇作為研制目標(biāo),并以歐盟規(guī)定戊唑醇在玉米中的MRL值0.02 mg/kg為參考開發(fā)了殘留分析方法。本研究詳細(xì)介紹了一種以玉米粉為基體的戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制過程和檢測(cè)方法,適用于糧食中戊唑醇?xì)埩艉康臋z測(cè),并可用于檢測(cè)過程中的質(zhì)量控制、實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證等相關(guān)領(lǐng)域。玉米凍干粉具有復(fù)溶后理化性質(zhì)與鮮樣保持一致的性質(zhì),本研究采用冷凍干燥技術(shù)將新鮮玉米籽粒制備成凍干粉進(jìn)行基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制。通過粉碎、初次冷凍干燥、復(fù)溶加標(biāo)、一次混勻、二次冷凍干燥、粉碎、研磨、過篩、二次混勻、均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性考察和定值的方式建立了一套科學(xué)簡(jiǎn)便的玉米粉中農(nóng)藥殘留基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法,以期為玉米上戊唑醇的的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及MRL值的制定提供幫助。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇中戊唑醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[GBW(E)085255,標(biāo)準(zhǔn)值:100 mg/L,相對(duì)不確定度 2%];乙腈(色譜純);無(wú)水硫酸鎂(分析純);N-丙基乙二胺(PSA);GCB(石墨化碳黑)填料;氯化鈉(分析純)。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1260A-6410B液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀,SQP十萬(wàn)分之一電子天平,TDZ5-WS低速臺(tái)式大容量離心機(jī),DMT-2500多管渦旋振蕩儀,TG16-W微量高速離心機(jī),TJX-410行星式球磨機(jī),XH-C旋渦混合器,A8破壁機(jī),FJ200均質(zhì)機(jī),LGJ-50FG普通型冷凍干燥機(jī),V-10 V型實(shí)驗(yàn)混合機(jī),Milli-Q超純水儀。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備流程

本研究研制了一種玉米粉中戊唑醇的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),流程圖見圖1。

圖1 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備工藝流程圖

本實(shí)驗(yàn)選擇市場(chǎng)上購(gòu)買的無(wú)戊唑醇?xì)埩趱r食玉米為基體樣品。稱取0.7 kg新鮮的空白玉米籽粒樣品,用破壁機(jī)將其制成糊狀。將制備好的玉米糊倒入冷凍干燥機(jī)的托盤內(nèi)進(jìn)行干燥處理。冷凍干燥機(jī)的預(yù)凍條件為:溫度-40 ℃,真空壓力0.08 MPa,冷凍干燥程序見表1,整個(gè)程序時(shí)間為46 h。將凍干后的玉米樣品轉(zhuǎn)移至行星式球磨機(jī)中,對(duì)其進(jìn)行研磨備用。行星式球磨機(jī)的設(shè)定條件為:正轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速1 800 r/min,持續(xù)10 min;反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速1 800 r/min,持續(xù)10 min;循環(huán)2次。將研磨好的玉米粉末過60目網(wǎng)篩[8-10],得到500 g玉米干粉空白基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)并檢測(cè)到鮮食玉米籽粒中水質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%。

表1 冷凍干燥機(jī)凍干程序

將3 L超純水加入燒杯中,加入1.080 mL質(zhì)量濃度為100 mg/L的甲醇中戊唑醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用均質(zhì)機(jī)混勻。將研磨好的空白玉米粉100 g緩慢加入至燒杯中,攪拌15 min使其完全溶解,重復(fù)上述操作,至全部玉米粉溶解在燒杯中。繼續(xù)使用均質(zhì)機(jī)對(duì)玉米漿持續(xù)攪拌2 h,使其充分混合均勻。將混合均勻后的玉米樣品裝入冷凍干燥機(jī)的托盤內(nèi),進(jìn)行二次凍干處理。冷凍干燥程序根據(jù)表1進(jìn)行設(shè)置。預(yù)凍條件為:溫度為-40 ℃,真空壓力0.08 MPa,整個(gè)程序時(shí)間為46 h。再次使用行星式球磨機(jī)對(duì)凍干后的基體樣品進(jìn)行研磨,行星式球磨機(jī)的設(shè)定條件為:正轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速1 800 r/min,持續(xù)10 min;反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速1 800r/min,持續(xù)10 min,循環(huán)2次。將研磨好的基體樣品過60目網(wǎng)篩,使用混合機(jī)進(jìn)行二次混勻,混勻時(shí)間為2 h,轉(zhuǎn)速為24 r/min。

將制備好的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在不同部位抽取10個(gè)樣品,采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)樣品中戊唑醇的含量進(jìn)行檢測(cè),每個(gè)樣品平行測(cè)定3次,采用JJF1343—2012標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的均勻性評(píng)估方法—單因素方差分析法進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,確定樣品是否均勻[12]。

確定樣品均勻性良好后,采用棕色西林瓶進(jìn)行分裝,每瓶7 g,-15 ℃條件下進(jìn)行保存。

1.3.2 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中戊唑醇含量的測(cè)定

1.3.2.1 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的前處理

稱取5 g玉米粉基體樣品(精確至0.000 1 g)于50 mL塑料離心管中,加入5 mL 超純水和10 mL乙腈,使用多管渦旋振蕩儀3 000 r/min,渦旋10 min。加入5 g氯化鈉,3 000 r/min渦旋5 min;使用低速臺(tái)式大容量離心機(jī)3 500 r/min離心5 min。準(zhǔn)確吸取1.2 mL上層清液,加入至內(nèi)含50 mg無(wú)水硫酸鎂、30 mg GCB及30 mg PSA的2 mL塑料離心管中。3 000 r/min渦旋2 min;使用高速離心機(jī)離心10 000 r/min離心2 min。吸取1 mL上層清液,過0.22 μm有機(jī)相濾膜后,注入進(jìn)樣小瓶中,用于液相色譜-質(zhì)譜分析使用。

空白基體標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取2份5 g空白玉米粉基體樣品(精確至0.000 1 g)分別于50 mL塑料離心管中,其余步驟同基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的前處理。

1.3.2.2 儀器參考條件

色譜條件:

色譜柱:Eclipse XDB-C18 (3.0 mm×150 mm,3.5 μm);進(jìn)樣體積:10 μL;流速:0.4 mL/min;柱溫:30 ℃;流動(dòng)相:A相:水溶液(0.1%甲酸);B相:乙腈,采用梯度洗脫程序,具體條件見表2。

質(zhì)譜條件:

離子源:電噴霧離子源(ESI源);掃描方式:正離子掃描(Positive);毛細(xì)管電壓:4 000 V;干燥器溫度:300 ℃;干燥器溫度:300 ℃;干燥氣流量:10L/min;鞘氣壓力:30 psi;檢測(cè)方式:多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(Multiple Reaction Monitoring,MRM)。MRM離子條件見表3。

表3 MRM離子采集信息

1.3.3 方法學(xué)驗(yàn)證

稱取5 g空白玉米粉基體樣品(精確至0.000 1 g)于50 mL塑料離心管中,準(zhǔn)確加入適量的戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液,使玉米粉基體中的戊唑醇含量水平約為0.2 mg/kg,混勻、浸泡30 min后進(jìn)行基體樣品的前處理。按上述復(fù)原、前處理方法處理加標(biāo)樣品,制得加標(biāo)回收測(cè)定溶液,用于液相色譜-質(zhì)譜分析。

1.3.4 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性與穩(wěn)定性檢驗(yàn)

1.3.4.1 均勻性檢驗(yàn)

采用液相色譜-質(zhì)譜法對(duì)玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)。根據(jù)JJF 1343—2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計(jì)學(xué)原理》,對(duì)于均勻性好的樣品N≤500,抽取單元數(shù)≥10。本次研制的玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)共分裝約70瓶,按分裝前后順序,抽取前面部分3瓶、中間部分4瓶、后面部分3瓶共計(jì)10瓶樣品,將抽取樣品進(jìn)行編號(hào)1～10,隨機(jī)次序進(jìn)行測(cè)定,每瓶樣品獨(dú)立取樣,用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)樣品進(jìn)行分析測(cè)試,每瓶樣品平行測(cè)試3次,采用單因素方差分析法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估。

1.3.4.2 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

穩(wěn)定性檢驗(yàn)分為短期穩(wěn)定性和長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn),因采用棕色西林瓶分裝,所以只考慮溫度在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中的影響,目的是明確合適的保存和運(yùn)輸條件。

長(zhǎng)期穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)的時(shí)間間隔為0、1、2、3、6個(gè)月,將短期穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)的時(shí)間間隔設(shè)置為0、1、3、6 d和10 d,每次送檢3支樣品進(jìn)行分析測(cè)試。為了模擬運(yùn)輸過程中環(huán)境溫度變化對(duì)樣品的特性量值產(chǎn)生的影響,故將短期穩(wěn)定性樣品放置在恒溫箱中,溫度設(shè)置為20 ℃與50 ℃。檢測(cè)結(jié)果采用JJF 1343—2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計(jì)學(xué)原理》中規(guī)定的直線擬合法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,判斷基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

1.3.5 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值

根據(jù)JJF 1343—2012《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計(jì)學(xué)原理》中的規(guī)定,本次基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用8家應(yīng)用型實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合定值的方式。8家實(shí)驗(yàn)室均采用1.3.2確定的前處理方法和檢測(cè)方法進(jìn)行樣品測(cè)定。每家實(shí)驗(yàn)室平行測(cè)定5次,所有檢測(cè)數(shù)據(jù)通過正態(tài)分布檢驗(yàn)、格拉布斯(Grubbs)法以及科克倫(Cochran)法檢驗(yàn)后,取總平均值作為研制的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量值[13,14]。

1.3.5.1 正態(tài)分布檢驗(yàn)

將各實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)按有小到大的順序排列,并依據(jù)偏態(tài)系數(shù)和峰態(tài)系數(shù)法檢驗(yàn)數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。計(jì)算其偏態(tài)系數(shù)A和峰態(tài)系數(shù)B,用于檢驗(yàn)不對(duì)稱性和峰態(tài)。

1.3.5.2 格拉布斯(Grubbs)法檢驗(yàn)

采用格拉布斯(Grubbs)法檢驗(yàn)8家實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果的平均值是否存在顯著性差異。首先計(jì)算各家實(shí)驗(yàn)的平均值xi-、總平均值x-和各家實(shí)驗(yàn)室平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差s,再計(jì)算平均值最大的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的殘差vi=xi--x-。再按式(1)進(jìn)行分析:

λ=|xi--x-|s

(1)

檢驗(yàn)結(jié)果判定原則為,若λ>λ(α,n)時(shí),則此實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)應(yīng)被剔除。剔除后重新進(jìn)行格拉布斯(Grubbs)檢驗(yàn)。λ(α,n)是與測(cè)量次數(shù)以及給定的顯著性水平α有關(guān)的數(shù)值。

1.3.5.3 科克倫(Cochran)法檢驗(yàn)

采用科克倫(Cochran)法檢驗(yàn)8家實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果平均值間是否等精度。先計(jì)算各家實(shí)驗(yàn)室各組數(shù)據(jù)的方差s2i,再計(jì)算其中最大方差與所有實(shí)驗(yàn)室方差和之比,計(jì)算見式(2):

C=S2max∑mi=1s2i

(2)

檢驗(yàn)結(jié)果判定原則為:若C≤C(5%,8,5),表明各組數(shù)據(jù)平均值等精度;反之則表明被檢驗(yàn)的最大方差為離群值,需剔除后重新進(jìn)行科克倫(Cochran)檢驗(yàn)。

1.3.6 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度評(píng)估

定值結(jié)果的不確定度由3部分組成,分別為:定值過程引入的不確定度、穩(wěn)定性引入的不確定度、均勻性引入的不確定度。

1.3.6.1 定值過程引入的不確定度uchar

由8家應(yīng)用型實(shí)驗(yàn)室采用同一種方法對(duì)基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值。按式(3)進(jìn)行計(jì)算:

uchar=sn=∑ni=1(Xi-)2n(n-1)

(3)

1.3.6.2 均勻性引入的不確定度ubb

采用單因素方差分析法對(duì)基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性評(píng)估,并按式(4)進(jìn)行計(jì)算:

ubb=Sbb=S21-S22n

(4)

1.3.6.3 穩(wěn)定性引入的不確定度us

采用回歸曲線法對(duì)均勻性良好的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定性考察,并按式(5)進(jìn)行計(jì)算:

us=s(β1)·X

(5)

1.3.6.4 合成擴(kuò)展不確定度UCRM

將上述的不確定度分量合成為標(biāo)準(zhǔn)不確定度uCRM,再乘以擴(kuò)展因子k后,得到基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的擴(kuò)展不確定度。

UCRM=K·uCRM=ku2char+u2bb+u2s

(6)

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)驗(yàn)證

2.1.1 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液,待儀器穩(wěn)定后進(jìn)行檢測(cè),每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)2 次,記錄峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),以濃度值為橫坐標(biāo),確定標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程,如表4所示。

表4 玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線

由表4中可以得出,R2值在0.999以上,表明該農(nóng)藥基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有良好的線性關(guān)系。

2.1.2 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)回收率的測(cè)定

通過添加適量水平的戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定其加標(biāo)回收率,經(jīng)測(cè)定分析,玉米粉中戊唑醇?xì)埩舴治鰳?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的平均回收率為102%,相對(duì)偏差為2.08%,滿足本次的定值要求,具體結(jié)果見表5。

表5 回收率測(cè)定結(jié)果

2.2 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性檢驗(yàn)

隨機(jī)抽取10 瓶樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn),每個(gè)樣品測(cè)定3個(gè)獨(dú)立平行,采用單因素方差分析法進(jìn)行評(píng)估,均勻性檢驗(yàn)結(jié)果表明F實(shí)驗(yàn)值(1.26)

表6 玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性檢驗(yàn)結(jié)果

2.3 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性檢驗(yàn)

2.3.1 長(zhǎng)期穩(wěn)定性

根據(jù)穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)原則,對(duì)研制的玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行為期6 個(gè)月的穩(wěn)定性監(jiān)測(cè),每次送檢3瓶樣品進(jìn)行分析測(cè)試。檢測(cè)結(jié)果使用直線擬合法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果中|β1|

玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果見表7。

表7 玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)長(zhǎng)期穩(wěn)定性檢驗(yàn)

2.3.2 短期穩(wěn)定性

為了模擬運(yùn)輸過程中環(huán)境溫度變化對(duì)樣品的特性量值產(chǎn)生的影響,故將樣品放置在恒溫箱中,溫度設(shè)置為20 ℃與50 ℃,監(jiān)測(cè)10 d內(nèi)樣品在該模擬條件下的特性量值變化。采用液相色譜-質(zhì)譜法對(duì)模擬實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行測(cè)試,測(cè)試結(jié)果使用直線擬合法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。短期穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果:在20 ℃和50 ℃環(huán)境下,|β1|

玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的短期穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果見表8。

表8 玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)短期穩(wěn)定性檢驗(yàn)

2.4 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值

玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)8家實(shí)驗(yàn)室的定值檢測(cè)數(shù)據(jù)見表9。將各實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的平均值按從小到大排列,進(jìn)行偏態(tài)系數(shù)和峰態(tài)系數(shù)法進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)。當(dāng)n=8時(shí),經(jīng)計(jì)算偏態(tài)系數(shù)A=0.337;峰態(tài)系數(shù)B=2.360,對(duì)置信概率p=0.95,n=8,查表得偏態(tài)系數(shù)A1=0.99;峰態(tài)檢驗(yàn)的臨界值區(qū)間B1～B′1=1.46～3.70。表明在顯著性水平α=0.05上符合正態(tài)分布。

表9 8家實(shí)驗(yàn)室定值結(jié)果

再對(duì)各家實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的平均值進(jìn)行格拉布斯(Grubbs)法檢驗(yàn)。經(jīng)計(jì)算,平均值最大的實(shí)驗(yàn)室λ=1.44,臨界值λ(5%,5)=1.715,λ<λ(5%,5),表明各實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果間無(wú)顯著性差異。

最后對(duì)各家實(shí)驗(yàn)室的平均值進(jìn)行科克倫(Cochran)法檢驗(yàn)。經(jīng)計(jì)算,Cmax=0.343,臨界值C(0.05,8,5)=0.359 5,Cmax

故可判斷8家實(shí)驗(yàn)室的定值檢測(cè)數(shù)據(jù)全部通過正態(tài)分布檢驗(yàn)、格拉布斯(Grubbs)法檢驗(yàn)和科克倫(Cochran)法檢驗(yàn)。所以選用8家定值單位的總平均值作為該玉米粉中戊唑醇?xì)埩舴治龌w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量值,為0.216 mg/kg。

2.5 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度評(píng)估

基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果的不確定度由3部分組成,分別為:定值過程引入的不確定度、均勻性引入的不確定度和穩(wěn)定性引入的不確定度。在95%的置信水平下,取擴(kuò)展因子k=2,與合成不確定度相乘,得到擴(kuò)展不確定度[15]。

經(jīng)計(jì)算,玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度評(píng)估結(jié)果見表10。

表10 玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不確定度匯總

2.6 結(jié)果表達(dá)

玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量值由定值的總平均值和合成擴(kuò)展不確定組成見表11。

表11 基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果(mg/kg)

3 結(jié)論

研制了玉米粉中戊唑醇基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),建立了玉米粉中戊唑醇基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法和殘留檢測(cè)方法,簡(jiǎn)化了制備過程,且使得玉米基質(zhì)便于長(zhǎng)期儲(chǔ)存和運(yùn)輸。通過對(duì)玉米樣品進(jìn)行一次冷凍干燥、加標(biāo)混勻、二次冷凍干燥、二次混勻等工藝,采用液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定,經(jīng)均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)后及8家應(yīng)用型實(shí)驗(yàn)室對(duì)玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量值以及不確定度進(jìn)行了準(zhǔn)確的評(píng)估,制備了一批均勻性和穩(wěn)定性良好的玉米粉中戊唑醇?xì)埩艋w標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),其特性量值(以玉米粉計(jì))為(0.432 0±0.030 2)mg/kg(k=2)。為玉米粉中戊唑醇檢測(cè)的方法開發(fā)、質(zhì)量控制和實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證以及玉米中戊唑醇最大殘留限量的制定提供參考。