基層動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)樣品采集技術(shù)

黃玉燕 安溪縣參內(nèi)鎮(zhèn)社會(huì)事務(wù)服務(wù)中心 福建安溪 362400

動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)是通過采集相應(yīng)的動(dòng)物樣品，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)得出試驗(yàn)數(shù)據(jù)， 從而掌握當(dāng)前動(dòng)物疫病流行狀況，是基層動(dòng)物防疫機(jī)構(gòu)重要的工作內(nèi)容。而影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的重要因素在于采集合適的試驗(yàn)樣品，采集過程中動(dòng)物樣品的保存、運(yùn)輸?shù)榷紩?huì)影響到樣品質(zhì)量，因此，樣品采集更需規(guī)范化、科學(xué)化的流程。

1 基層常見的動(dòng)物疾病監(jiān)測(cè)樣品種類

根據(jù)每年流行病學(xué)調(diào)查、 動(dòng)物免疫效果評(píng)估等工作任務(wù)要求不同， 大體可將監(jiān)測(cè)樣品分為組織樣品、血液樣品、棉拭子樣品等三大類。 其中組織樣品根據(jù)病種的不同而采集的部位不同， 常采集的部位有淋巴結(jié)、脾、肝、腦、流產(chǎn)死胎等實(shí)質(zhì)性器官；血液樣品根據(jù)試驗(yàn)項(xiàng)目分為全血和血清； 棉拭子樣品因采集的部位或區(qū)域不同， 分為泄殖腔拭子、 咽喉拭子、環(huán)境拭子等。

2 采樣前準(zhǔn)備

采樣前需準(zhǔn)備好相應(yīng)的采樣工具和防護(hù)工具，其中包括但不限于一次性醫(yī)用手套（乳膠手套）、護(hù)目鏡、一次性口罩（N95 口罩）、防護(hù)服、膠靴等；采血器、抗凝采血管、真空采血管、一次性頭皮針；棉拭子，PBS 液（病毒保存液）；75%酒精棉球、剪刀、試管架、剃毛器，采樣單、簽字筆、記號(hào)筆，保溫箱或采樣箱，自封袋、冰袋等。

3 常規(guī)樣品的采集技術(shù)

3.1 組織樣品采集及保存 應(yīng)對(duì)死亡動(dòng)物及時(shí)解剖，避免組織腐敗。 采樣前要對(duì)解剖刀、剪刀等進(jìn)行滅菌消毒，確保采樣過程中無(wú)菌操作。摘取適合大小的組織器官并將采集到的樣品存放到自封袋或組織樣品采集容器中密封保存。 采樣單上填寫好動(dòng)物種類、組織名稱、采樣日期、編號(hào)等內(nèi)容，采樣單隨樣品一同存放。組織樣品采集完成后需要長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)，要及時(shí)進(jìn)行冷凍保存。

3.2 血液樣品采集及保存

3.2.1 全血樣品 將動(dòng)物保定后， 找到相應(yīng)的靜脈（禽類可以選擇翼下靜脈， 牛羊可以選擇頸靜脈、尾靜脈，豬可以選擇前腔靜脈），對(duì)采血部位用75%酒精棉球進(jìn)行局部消毒， 消毒的同時(shí)也可以充分暴露血管方便抽取血液，將血抽到抗凝采血管內(nèi)，然后緩慢上下?lián)u晃，讓血液與抗凝劑充分混合。在采血管上做好標(biāo)記，短期儲(chǔ)存時(shí)可低溫保存，若需長(zhǎng)期儲(chǔ)存可以放置在-4 ℃以下冰箱冰凍保存。

3.2.2 血清樣品 采集血清樣品可以直接使用一次性采血器進(jìn)行采集。 抽取2～5 mL 血液后，將采血器的針頭除去，要將活塞向后緩慢抽拉一段距離，讓針管中間留有一段空氣，這樣有利于血清析出。將針管豎直放置試管架上，20～30 ℃環(huán)境下存放至少半小時(shí)，待血液完全凝固后析出上層血清，或?qū)⑨樄芊湃腚x心機(jī)中離心出血清。將血清倒入離心管，若需保存較長(zhǎng)時(shí)間，可將血清冷凍保存。作為動(dòng)物抗體水平檢測(cè)用途時(shí)， 采樣單上要備注好動(dòng)物曾注射過的疫苗種類和名稱， 以便實(shí)驗(yàn)室人員選擇適合的檢測(cè)試劑和方法。

3.3 棉拭子樣品采集及保存

3.3.1 泄殖腔拭子、 咽喉拭子 開展高致病性禽流感病原學(xué)監(jiān)測(cè)時(shí)，常用棉拭子對(duì)禽類的咽喉、泄殖腔部位進(jìn)行采樣，將棉拭子分別在兩個(gè)部位擦拭、旋轉(zhuǎn)后取出，放置在有病毒保存液的管內(nèi)，每根管放同一羽禽類的棉拭子。若需要短途運(yùn)輸，可以放置在保溫箱內(nèi)低溫儲(chǔ)存；若需要長(zhǎng)時(shí)間保存，可放置在-20 ℃冰箱內(nèi)冷凍保存。

3.3.2 環(huán)境樣品 常規(guī)采樣方法是用生理鹽水浸濕無(wú)菌棉拭子后，在環(huán)境（物品）表面按“Z”字形軌跡畫線，邊畫邊旋轉(zhuǎn)棉拭子接觸面，連續(xù)數(shù)次，畫線區(qū)域盡可能覆蓋環(huán)境（物品）界面[1]。 采樣位置按照采樣要求常在辦公、生活區(qū)，養(yǎng)殖場(chǎng)區(qū)內(nèi)的圈舍過道、飼槽、圈舍壁、排糞污口（溝）、飼料推車等區(qū)域。采樣后將棉拭子放入保存管內(nèi)，做好標(biāo)記后冷凍保存。

4 采樣的注意事項(xiàng)

采集病死動(dòng)物組織樣品時(shí)， 一是要在動(dòng)物死亡6 h 內(nèi)盡快取樣； 二是取樣要選取具有代表性的病變組織，同時(shí)取材應(yīng)包括病灶和周邊正常組織，以便作為對(duì)照；三是在運(yùn)輸過程中要低溫保存，避免樣品腐壞。

采集血液樣品時(shí)， 首先若樣品作為動(dòng)物抗體水平檢測(cè)用途時(shí)， 采樣單上要備注好動(dòng)物曾注射的疫苗種類和名稱， 以便實(shí)驗(yàn)室人員選擇適合的檢測(cè)試劑和方法；其次血液采集的量要足夠，采樣量太少，血清析出少，不夠檢測(cè)用量，且樣品反復(fù)凍融會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，因此，血液采樣量應(yīng)不少于2 mL；最后對(duì)于死亡動(dòng)物出現(xiàn)血液凝固不良、天然孔出血的情況，在排除炭疽情況之后可以采用耳尖處采血。

采樣時(shí)人員要做好個(gè)人防護(hù)， 采樣前應(yīng)戴好醫(yī)用口罩。 如遇人畜共患病時(shí)應(yīng)佩戴好N95 防護(hù)口罩，穿戴好防護(hù)手套、防護(hù)服、護(hù)目鏡等。人員在進(jìn)出場(chǎng)舍時(shí)要進(jìn)行消毒， 避免將其它病原微生物帶入養(yǎng)殖欄舍內(nèi)。

5 采樣中存在的常見問題及應(yīng)對(duì)方法

5.1 血液樣品溶血 血液樣品溶血是采樣工作中常見的問題，血液因受劇烈振蕩影響，損傷血細(xì)胞的完整性，引起溶血[2]，溶血的樣品對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果有一定的影響。 產(chǎn)生溶血的原因通常為采血管被污染、抽排血時(shí)速度過快、在運(yùn)輸過程中樣品被劇烈晃動(dòng)。 因此， 在血液樣品采樣時(shí)抽血?jiǎng)幼魉俣炔灰诉^快，采集到的樣品豎直放置在試管架或者罐內(nèi)。

5.2 樣品保存運(yùn)輸不當(dāng) 采樣完成后，為避免樣品失效，樣品需妥善保存和運(yùn)輸。一般情況下一個(gè)容器內(nèi)只放置一種樣品并做好密封，防止樣品漏出。采樣和運(yùn)輸過程中，如氣溫較高，冷藏設(shè)備也要備好。 應(yīng)該根據(jù)運(yùn)輸距離的遠(yuǎn)近及室外溫度， 選擇適當(dāng)?shù)谋４娲胧?，避免樣品腐敗或凍壞?/p>

5.3 樣品采集工作中細(xì)節(jié)處理不到位 采集到不符合的樣品，不僅浪費(fèi)人力、物力，而且無(wú)法從試驗(yàn)結(jié)果中了解所需要的真實(shí)、準(zhǔn)確信息?；鶎硬蓸舆^程中常見的細(xì)節(jié)問題有：選擇了不免疫備案的養(yǎng)殖場(chǎng)；選擇了剛免疫不久、抗體尚未完全產(chǎn)生的動(dòng)物；采樣單與編號(hào)不對(duì)應(yīng)， 采樣單上信息填寫不完全等細(xì)節(jié)問題。 因此， 在采樣工作開展過程中要做好工作規(guī)劃，如挑選具有代表性的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶），并根據(jù)養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫程序選擇已免疫并產(chǎn)生了免疫應(yīng)答的動(dòng)物。認(rèn)真填寫好采樣單， 采樣單上信息與樣品的標(biāo)簽要一一對(duì)應(yīng)。

6 小 結(jié)

動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)是動(dòng)物防疫工作中重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。如果樣品采集過程中操作不當(dāng)，采集的樣品被污染或者腐壞，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果不具有代表性，不利于后期工作計(jì)劃的制定和開展。因此，在樣品采集過程要做好合理規(guī)劃，注意采樣要求和個(gè)人防護(hù)。要不斷鉆研學(xué)習(xí)監(jiān)測(cè)采樣技術(shù)，完成好上級(jí)布置的任務(wù)，才能更好地促進(jìn)當(dāng)?shù)匦竽翗I(yè)的健康發(fā)展。