兒童肺炎支原體感染現狀及其檢測方法對比

倪潔 陸定

(上海市第八人民醫院兒科,上海 200235)

雖然兒童肺炎支原體感染在發病之后存在一定特殊的臨床表現和影像學變化,但是與病毒、細菌等引發的感染之間存在相似性,需要通過更加科學的實驗室檢驗方法,對感染類型進行確定[1]。以往對于肺炎支原體的實驗室診斷主要依靠血清學檢測,但是兒童第2份血清標本本身難以獲得,抗體容易受到年齡、免疫情況的影響,因此肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM使用受到影響。而肺炎支原體咽拭子DNA檢測這種生物學檢驗措施樣本獲取更加便捷,實際使用過程中效果較好[2]。本文對比分析兒童肺炎支原體感染現狀及其檢測方法。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月至2020年12月我院收治的疑似兒童肺炎支原體感染患兒200例,其中男患兒102例,女患兒98例,年齡0～13歲,平均年齡(6.54±1.32)歲,病程2～12d,平均病程(6.13±1.34)d。其中≤3歲患兒58例、4～6歲患兒77例、7～11歲患兒65例。納入指標:符合實用兒科學對于呼吸道感染的診斷標準[3];臨床出現發熱、鼻塞、咳嗽等癥狀[4];經X等影像學檢查確定支氣管、肺部存在疾病征象;患兒家屬知情同意。排除指標:先天性血液疾病;先天性心臟、腎臟重大疾病;先天性免疫缺陷;中途退出實驗。

1.2方法 (1)血清學檢測包括肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM,均采集患兒靜脈血并進行血清分離,將血清在2～8℃環境中保存,24h內完成檢測。肺炎支原體抗體IgG滴度檢驗試劑為日本富士瑞必歐株式會社生產,操作流程需要嚴格按照說明書中步驟進行操作,共12孔,取25 μl進行倍比稀釋,之后加入第1孔中,將未致敏粒子25 μl加入第2孔中,將致敏粒子25 μl加入3～12孔中,充分震蕩混勻后在室溫下等待3h,如結果第3孔滴度1:40、第4孔滴度1:80、第5孔滴度1:160、第6孔滴度1:320、第7孔滴度1:640、第8孔滴度1:1 280、第9孔滴度1:2 560、第10孔滴度1:5 120、第11孔滴度1:10 240、第12孔滴度1:20 480則表示符合檢查指標,如抗體滴度高于1:40表示陽性;肺炎支原體IgM檢驗,按照SERODIA-MYCOⅡ試劑盒說明書的要求進行操作,自2 ml全血中分離出血清,加入血清稀釋液、感作粒子、未感作粒子,30 min時間內與血清稀釋液復溶,充分混合之后等待3 h,抗體稀釋自1:40開始至1:1 280,如高于1:160表示陽性。(2)生物學檢驗主要開展肺炎支原體咽拭子DNA檢測,在清晨未洗漱狀態下獲取咽部分泌物,接種到預溫的培養基中,使用PCR毛細管電泳片段分析試劑盒對逆轉錄-聚合酶聯反應進行檢測,之后使用GEXP自動化平臺進行檢測,并使用相關配套軟件對熒光數據進行分析,獲得閾值循環數,如數值高于40表示陰性,低于38為陽性,38～40之間進行復檢,而復檢之后數值在38～40之間為陰性。

1.3觀察指標 分析各年齡段兒童肺炎支原體感染感染率;分析各年齡段不同檢測方法檢出率;分析各年齡段聯合檢測結果。

2 結 果

2.1分析各年齡段兒童肺炎支原體感染感染率 ≤3歲兒童肺炎支原體感染感染率最高為82.12%,其次為4～6歲患兒感染率為74.14%,7～11歲患感染率最低為66.15%,總感染率為75.00%。

2.2分析各年齡段不同檢測方法檢出率 ≤3歲患兒生物學檢測檢出率更高,7～11歲患兒血清學檢測準確率更高(P<0.05);4～6歲患兒血清學檢測、生物學檢測準確率之間對比無差異(P>0.05)。見表1。

表1 分析各年齡段不同檢測方法檢出率n(%)

2.3分析各年齡段聯合檢測結果 聯合檢測在≤3歲、4～6歲、7～11歲年齡段檢出率均較高。見表2。

表2 分析各年齡段聯合檢測結果

3 討 論

肺炎支原體是一種介于病毒和細菌之間的無細胞壁型微生物,因自身的體積較小,可通過飛沫傳播,因此在兒童集體中的爆發率較高。但是對該病的臨床疾病特征進行分析,發現典型性不足,影像學檢查也無明顯的特異性,無法準確將其與細菌、病毒感染區分[5]。實驗室檢驗對于該病的診斷具有積極作用,常規使用血清學檢驗和分子生物學檢驗,需要對兩種檢測方法的使用價值進行分析,更好的對疾病急性診斷[6]。

實驗室對肺炎支原體感染的診斷金標準為培養法,但是需要耗費較長的時間,操作過程也非常復雜,陽性率低,不利于快速檢測,而血清學檢驗包括肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM檢驗[7],檢測試劑盒成熟,成本低,具有較好的應用價值。但是該檢測方法在0～3歲兒童中檢出率較低,這是因為該年齡段兒童自身的免疫應答水平較低,使IgM、IgG的檢出率不高,而7～11歲患兒自身免疫系統發育逐步完善,對于IgM、IgG的檢出率則顯著提升[8];從DNA檢測陽性率分析,7～11歲陽性率較高,這是因為該階段患兒自身的抵抗能力較好,對于疾病存在一定抗體,自身攜帶肺炎支原體抗體的概率較高[9],而肺炎支原體在呼吸道中分布,因此容易檢出。但是肺炎支原體DNA檢測雖然可以確定患兒攜帶和感染病原菌,沒有一個確切的區域確定患兒是否感染,因此該指標陽性意義不大;為了提升疾病的診斷質量,可將兩種方法進行結合[10],對比分析血清學檢驗、分子生物學檢驗的陽性檢出結果,結合不同年齡選擇適合的檢測措施,聯合應用2種方法進行早期檢測,提升疾病的診斷質量,規范漏檢的問題,減少假陽性的出現,提升檢驗的準確性[11]。

綜上,肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM、肺炎支原體咽拭子DNA檢測在兒童肺炎支原體感染中診斷率均較高,均可用于疾病診斷,為了提升檢驗質量,可以將3種檢測方法進行結合,提升診斷準確率。