奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑有關物質方法學驗證

【摘要】目的：對奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑有關物質方法進行驗證。方法：HPLC法，紫外檢測器，DAD檢測器，梯度洗脫。結果：各已知雜質與奧美拉唑分離度均大于1.5，空白輔料不干擾各雜質的檢測。結論：該方法各雜質的準確度良好，峰純度良好，適合奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑的測定。

【關鍵詞】奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑；有關物質；方法學驗證

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.04.008

Methodological Validation of Related Substances in Omeprazole Sodium Bicarbonate Dry Suspension

PAN Li， TANG Kuanxia

（Haikou Pharmaceutical Factory Co.， Ltd.， Haikou 570311， China）

Abstract： Objective： To verify the substance method of omeprazole sodium bicarbonate dry suspension. Method： HPLC， UV detector， DAD detector， gradient elution. Result： The separation degree between all known impurities and omeprazole was greater than 1.5， blank excipients do not interfere with the detection of various impurities. Conclusion： This method has good accuracy and peak purity for various impurities， and is suitable for the determination of omeprazole sodium bicarbonate dry suspension.

Keywords： omeprazole sodium bicarbonate dry suspension； related substances； methodology validation

奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑廣泛用于醫(yī)治胃潰瘍、食管反流病、十二指腸潰瘍以及有關的胃灼熱和其他癥狀，并且在糜爛性食管炎醫(yī)治與維持康復上效果明顯。該藥物中的碳酸氫鈉對于中和胃酸有明顯療效，可避免胃酸被奧美拉唑降解，將奧美拉唑治療消化性潰瘍的效果充分發(fā)揮。奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑能夠迅速起效，并且藥性持久。

1儀器與試藥

島津公司的LC-2010AHT高效液相色譜儀，紫外檢測器，DAD檢測器，色譜柱：辛烷基鍵合硅膠柱（250 mm×4.6 mm，5μm），色譜乙腈，磷酸氫二鈉，水，磷酸，自制品（201101批）。

2方法學驗證

2.1檢測波長的確定

在選擇奧美拉唑或奧美拉唑磺酰化物作為對照品時，應取適量的樣品，使用流動相將其溶解，同時將其制成質量濃度為20μg/mL的溶液，選擇紫外-可見分光光度法進行分析，掃描控制在200～400 nm。

結果：奧美拉唑磺酰化物在273.2 nm波長處有最大吸收，奧美拉唑在275 nm的波長處有最大吸收。兩者的最大吸收波長相近，都在280 nm附近。參照《中華人民共和國藥典》2020年版二部中奧美拉唑原料及腸溶片公示的標準及歐洲藥典原料的標準，選擇280 nm為本品的檢測波長。

2.2色譜條件的選擇及專屬性試驗

空白輔料溶液：參照處方配制無奧美拉唑的空白輔料，稱取空白輔料約1.8 g，置于50 mL量瓶中，加溶劑將其溶解后進行稀釋至刻度，搖勻，作為空白輔料溶液。

混合溶液：精密移取雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E、雜質H、雜質I定位溶液各1.0 mL，置于同一50 mL量瓶中；取本品適量（約相當于奧美拉唑10 mg），置于上述量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

精密量取上述溶液各20μL，注入液相色譜儀，按設計色譜條件進行試驗，記錄色譜圖。由試驗結果可知，空白輔料無干擾，各已知雜質與奧美拉唑主峰均能有效分離。在DAD條件下，各成分主峰處均無不純物檢出，各雜質均在280 nm處有較大吸收，證明該方法專屬性良好。

2.3強制降解試驗

空白輔料溶液的配制：按照處方配比，稱量不含奧美拉唑的空白輔料1.8 g放入50 mL容量瓶中，加入溶劑使其溶解，稀釋到刻度，搖勻，即得。

試驗樣品溶液的配制：取奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑1袋，精確稱量出相應的含量（約相當于奧美拉唑10 mg），放入50 mL容量瓶中，加入有機試劑使其溶出，稀釋到刻度，搖勻，即得。

光降解試驗樣品溶液的配制：取奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑1袋，精確稱量出相應的含量（約相當于奧美拉唑10 mg），放入50 mL的大容量瓶中，加入30 mL的有機溶劑使其溶出，在4500 lx的熒光燈下放置24 h，加入有機化合物，直至刻度，搖動，過濾，收集續(xù)濾液，即得。

氧化破壞試驗溶液配制：取奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑1袋，精確稱量出相應的含量（約相當于奧美拉唑10 mg），放入50 mL的容量瓶中，加入30 mL的溶劑使其溶解，加30%過氧化氫0.5 mL，放置0.5 min，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾，收集續(xù)濾液，即得，配制完成后應迅速進樣。

高溫降解供試品溶液的配制：取奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑1袋，精確稱取內容物適量（約相當于奧美拉唑10 mg），置于50 mL容量瓶中，加30 mL溶劑溶解，水浴放置0.5 h，取出，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾，收集續(xù)濾液，即得。

酸分解供試品溶液的配制：取奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑1袋，精確稱量出相應的含量（約相當于奧美拉唑10 mg），置于50 mL的容量瓶中，用膠頭滴管加入48 mol/L的鹽酸，在常溫下放置5 min，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾，收集續(xù)濾液，即可得到該樣品。

堿性降解供試品溶液的配制：取奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑1袋，精確稱量出相應的含量（約相當于奧美拉唑10 mg），置于50 mL的容量瓶中，加入30 mL的溶劑使其溶解，再加入5.0 mol/L的氫氧化鈉溶液1 mL，放置4 h，再用5.0 mol/L的鹽酸調整pH值，后將其加入混合液中混合，稀釋至刻度線，搖勻，過濾，收集續(xù)濾液，即可得到堿性降解的樣品。

用DAD檢測器將以上各組分20μL加入HPLC并進行測定。結果表明，各降解試驗的物料平衡結果均在90%～110%；主峰純度良好；按奧美拉唑峰計算，理論塔板數(shù)均大于2000，主峰與相鄰雜質的分離度均達到要求，本色譜條件對降解產(chǎn)物專屬性良好。

2.4空白輔料干擾試驗

強制降解試驗項下記錄的未降解空白輔料及各強制降解試驗條件下的空白輔料圖譜表明，空白輔料有香蘭素峰，空白輔料經(jīng)強酸、強堿、氧化、光照、高溫降解后，均不干擾本品有關物質的測定，計算時扣除空白輔料香蘭素峰即可。

2.5線性關系試驗

雜質對照品線性關系溶液的配制：分別精密移取專屬性試驗項下雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質H及雜質I定位溶液各0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL，置于同一100 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。

雜質G對照品線性關系溶液的配制：精密移取專屬性試驗項下雜質G定位溶液各0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL，置同一100 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。

奧美拉唑線性關系溶液配制：精確稱量奧美拉唑工作標準品約10 mg，置于50 mL容量瓶內，加入各種有機試劑至刻度使其溶解混勻，然后精確吸取該溶液0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，1.0 mL，1.2 mL置于同一100 mL容量瓶內，加入各種溶劑，直至刻度，搖勻，即得。

量取以上各溶液20μL，于液相色譜儀注入，并對色譜圖進行記錄。由試驗結果可知，奧美拉唑在0.05～2.41μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質A在0.03～1.27μg/ mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質B在0.03～ 1.33μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質C在0.05～1.25μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質D在0.05～1.28μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質E在0.03～1.27μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質G在0.05～1.25μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質H在0.04～1.31μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好；雜質I在0.03～1.31μg/mL濃度范圍內峰面積與濃度線性關系良好。

2.6中間精密度試驗

選擇同一批號測試品，2名分析人員在2臺高效液相色譜儀上分別按有關物質分析方法進行檢測。供試品中各已知雜質、其他單個雜質及總雜質測定結果的RSD均小于10.0%，方法的中間精密度良好。

2.7溶液穩(wěn)定性試驗

溶液的配制：準確稱量被檢樣品10 mg（對應奧美拉唑10 mg）于50 mL容量瓶內，加入有機溶劑至刻度使其溶解，搖勻、過濾，即可得到該樣品。精確稱定1 mL，置于100 mL容量瓶中，加入各種有機溶劑直至刻度，搖勻，即得標準液。

在常溫下，分別于0、2、4、6、8 h，精確吸取20μL，并將其加入液相層析器中，用面積歸一化法對色譜圖進行記錄。由試驗結果可知，供試品溶液在室溫條件下放置8 h，在2 h時開始有降解雜質1出現(xiàn)，在6 h時又有降解雜質2（雜質E）出現(xiàn)，這表明奧美拉唑溶液穩(wěn)定性差，應現(xiàn)配現(xiàn)用。對照溶液在室溫條件放置8 h，主峰峰面積的RSD%小于2.0%，這表明對照溶液的溶液穩(wěn)定性良好。

2.8準確度試驗

供試品溶液配制：選擇本品，對其進行精確稱取（對應奧美拉唑10 mg），然后置于50 mL容量瓶中，加溶劑將其溶解稀釋到刻度，搖勻后濾過，即得。

80%準確度溶液的配制：將精密度試驗項下雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E、雜質H、雜質I貯備溶液各0.8 mL，雜質G貯備溶液1.6 mL，置于同一100 mL容量瓶中。

100%準確度溶液的配制：將精密度試驗項下雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E、雜質H、雜質I貯備溶液各1.0 mL，雜質G貯備溶液2.0 mL，置于同一100 mL容量瓶中。

120%準確度溶液的配制：將精密度試驗項下雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E、雜質H、雜質I貯備溶液各1.2 mL，雜質G貯備溶液2.4 mL，置于同一100 mL容量瓶中。

各取供試品一袋（對應奧美拉唑20 mg）置于上述容量瓶中，加溶劑溶解稀釋到刻度，并搖勻后濾過，即得。每個濃度同法配制3份，現(xiàn)配現(xiàn)進。

以上溶液精確吸取20μL，并將其加入液相層析器中，用面積歸一化法對色譜圖進行記錄。由試驗結果可知，奧美拉唑有關物質檢查雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E、雜質G、雜質H及雜質I的回收率均在80%～120%內，表明方法準確度良好。

2.9耐用性試驗

分別在調節(jié)流動相中有機相比值改變±5%、檢測波長改變±5 nm、流動相pH數(shù)值改變±0.4、柱溫改變±5℃的條件下，考察變化前后系統(tǒng)適用性及供試品雜質檢出情況。

由試驗結果可知，在柱溫、流動相比例20%、檢測波長275 nm、流動相pH=7.2的條件下，對本品有關物質檢查結果幾乎無影響；在流動相比例30%條件下，雜質A和雜質I與樣品中輔料香蘭素出峰位置重合，輔料干擾雜質的檢驗；在流動相pH=8.0條件下，雜質A與雜質I重合，無法有效檢驗；在檢驗波長285 nm條件下，雜質A峰面積變化較大。以上結果說明，本方法色譜條件耐用性較差，在流動相配制過程中，應嚴格把控流動相A的pH值，并確保在正確的色譜條件下對樣品進行檢測。

3確定的方法

精確稱量本品（對應奧美拉唑10 mg）于50 mL容量瓶中，加入有機溶劑，用超聲波將其溶出，并將其稀釋到刻度，然后搖動，過濾，取出續(xù)濾后，即得。在供試品溶液色譜圖上出現(xiàn)雜質峰時，用修正后的方法求出雜質C，奧美拉唑磺酰基和雜質E的峰面積，使其不超過控制液的主峰面積0.5倍（0.5%）。結果表明：H峰面積不能超過控制液的最大峰的0.5倍（0.5%）；其他各雜質元素的峰面積均不能超過標準溶液的0.2倍（0.2%）；各種雜質的總和也不能超過1.0%。

4結束語

根據(jù)數(shù)據(jù)，通過方法學驗證結果得知，該測定方法專屬性、精密度、準確度、耐用性良好，能有效檢測出奧美拉唑相關雜質。各峰之間分離度大于1.5，理論塔板數(shù)高于5000，系統(tǒng)適用性符合要求。該方法可用于奧美拉唑碳酸氫鈉干混懸劑的有關物質測定。

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【作者簡介】

潘麗，女，1984年出生，高級工程師，學士，研究方向為藥物分析。

（編輯：侯睿琪）