赤芍標準湯劑質量表征參數的探索性研究

摘 要：針對標準湯劑質量表征參數不完善的情況，對赤芍配方顆粒進行綜合性評價研究，以探索標準湯劑質量表征方法.在《中藥配方顆粒質量控制與標準制定技術要求》（以下簡稱《技術要求》）中規定的特征圖譜、出膏率及有效成分含量指標的基礎上，增加物理與紫外指紋圖譜及活化部分凝血活酶時間等指標對赤芍標準湯劑與配方顆粒進行研究比對，采用SPSS軟件進行統計分析.結果顯示，各批次赤芍配方顆粒出膏率及芍藥苷含量均在《技術要求》規定可允許范圍內，赤芍標準湯劑與配方顆粒的物理及紫外指紋圖譜相似度較高，但配方顆粒的流動性、防潮性、活性成分及活血藥效與標準湯劑有顯著性差異，配方顆粒優于標準湯劑.表明目前《技術要求》中規定的參數并不能完全表征標準湯劑與配方顆粒的質量屬性，有待進一步豐富.

關鍵詞：赤芍；標準湯劑；配方顆粒；表征參數

中圖分類號：R283.6

文獻標志碼：A

0 引 言

中藥配方顆粒是以中藥飲片為原料，通過提取、濃縮、干燥和制粒等現代制藥工藝而得，不僅解決了傳統中藥湯劑儲存與攜帶不便、煎煮耗時及患者順應性較差等缺陷 ［1-3］，還保留了傳統中醫藥可復方配伍、辨證論治及隨證加減等特色優勢.標準湯劑是以臨床實際應用為參考，采用現代中藥標準化工藝規程制備而成的單味中藥配方顆粒中間體［4］，在中藥配方顆粒研究過程中，標準湯劑可起到保證中藥配方顆粒藥物屬性橋梁和紐帶的作用，《中藥配方顆粒質量控制與標準制定技術要求》（以下簡稱《技術要求》）中規定應以標準湯劑為基準來衡量中藥配方顆粒與中藥飲片的安全性、有效性和可控性.

《技術要求》規定中藥配方顆粒的藥學研究均需與標準湯劑進行研究比對，但《技術要求》中標準湯劑的表征參數僅有出膏率、有效成分含量及特征圖譜，缺少活性考察等檢測指標，難以通過現有指標表征標準湯劑的質量.本研究主要通過出膏率、活性成分含量、物理與紫外（UV）指紋圖譜及活化部分凝血活酶時間（APTT）等指標參數對赤芍配方顆粒與赤芍標準湯劑進行綜合評價比對，用以探索并完善標準湯劑及配方顆粒的質量表征參數.

1 材 料

1.1 儀 器

FD-1A-50型冷凍干燥機（博醫康（北京）儀器有限公司），BS-6KH型電子分析天平（上海友聲衡器有限公司），101-1-S型電熱鼓風干燥箱（成都雅源科技有限公司），RE-501型數顯恒溫水浴鍋（成都康宇科技有限公司），PS-40型超聲波清洗器（深圳市得康洗凈電器有限公司）， TU-1810型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司），DSH-10A型電子水分測定儀（上海力辰邦西儀器科技有限公司），Eclassical 3200型高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司），CXN06-IV型半自動凝血儀（武漢景川診斷技術股份有限公司）.

1.2 試 藥

APTT測定試劑盒（批號，320113），包括APTT試劑和氯化鈣試劑，購自武漢中太生物技術有限公司； SPF級新西蘭家兔，購自成都達碩實驗動物有限公司，許可證號為SCXK（川）2019-031；芍藥苷對照品（批號，110736-201842），購自中國食品藥品檢定研究院；赤芍，購自成都市荷花池中藥材專業市場，經成都大學食品與生物工程學院劉濤教授鑒定為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，符合2020年版《中華人民共和國藥典》（一部）赤芍飲片項下規定.

2 方法與結果

2.1 出膏率

根據《技術要求》制備15批赤芍標準湯劑，并根據課題組前期赤芍配方顆粒制備工藝研究參數（提取溶媒倍數為8倍，提取時間為90 min，提取次數為3次；濃縮溫度為75 ℃；干燥方式為減壓干燥80 ℃；制粒選擇糊精作為輔料，藥輔比10∶8）制備15批赤芍配方顆粒，計算赤芍標準湯劑及配方顆粒的出膏率及均值，進行對比研究.

赤芍標準湯劑出膏率均值為24.87%，按照《技術要求》規定，赤芍標準湯劑出膏率范圍為標準湯劑出膏率均值的70%～130%，即17.41%～32.33%；制備的15批赤芍配方顆粒出膏率均值為33.88%，其允許范圍為23.72%～44.04%.兩者所測出膏率均在可允許范圍內.利用IBM SPSS Statistics 21.0軟件將赤芍配方顆粒與標準湯劑出膏率進行比對分析，通過T檢驗進行顯著性分析，置信區間為95%，分析結果顯示，兩者存在顯著性差異（Plt;0.05）.赤芍標準湯劑與配方顆粒出膏率具體結果見表1.

2.2 芍藥苷含量測定

2.2.1 供試品溶液制備

精密稱取赤芍配方顆粒與標準湯劑各0.2 g，置于具塞錐形瓶后，加10 mL稀乙醇溶液超聲溶解（功率140 W，頻率40 kHz），高速離心5 min（10 000 r/min），取上清液過0.45 μL微孔濾膜后得到供試品溶液.

2.2.2 對照品溶液制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定后置于棕色容量瓶，加甲醇制成質量濃度為0.356 8 mg/mL的芍藥苷對照品溶液.

2.2.3 色譜條件

流動相為0.05 mol/L磷酸二氫鉀—甲醇溶液（60∶40）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為230 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μL［5］.

2.2.4 精密度

取“2.2.2”項下芍藥苷對照品溶液，按照“2.2.3”項下色譜條件進樣6次，根據其峰面積計算相對標準偏差（RSD）值，驗證儀器精密度.根據實驗結果可知，RSD值＜2%，表明該儀器的精密性良好.

2.2.5 重復性

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為SC4）各6份，按照“2.2.1”項下方法分別制備供試品溶液，分別進樣并測定其峰面積，根據取樣量和測定峰面積計算得到赤芍標準湯劑與配方顆粒RSD值均＜2%，表明兩者供試品溶液制備方法重現性良好.

2.2.6 穩定性

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為SC4）按照“2.2.1”項下方法分別制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、16和24 h時依次進樣，根據峰面積計算可知，赤芍標準湯劑與配方顆粒RSD值均＜2%，表明兩者供試品溶液在24 h內穩定性良好.

2.2.7 加樣回收

取已知含量的赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為SC4），平行精密稱定6份，置具塞錐形瓶中，分別按含量1∶1加入芍藥苷對照品，按照“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按照“2.2.3”項下色譜條件測定，兩者回收率RSD值＜2%，其回收率符合要求.

2.2.8 樣品測定

取15批赤芍標準湯劑與配方顆粒按照“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，并按照“2.2.3”項下色譜條件測定各批次樣品芍藥苷含量，并推算至飲片質量一致（飲片5 g），即計算其5 g赤芍飲片芍藥苷總量，赤芍標準湯劑與配方顆粒含量見表2.標準湯劑所測含量范圍為5.18%～6.72%，配方顆粒所測含量范圍為5.47%～7.50%.使用IBM SPSS Statistics 21.0軟件將赤芍標準湯劑與配方顆粒芍藥苷含量進行分析，采用T檢驗進行顯著性分析，實驗結果顯示兩者差異顯著（P＜0.05）.

2.3 物理指紋圖譜

2.3.1 考察指標

赤芍配方顆粒與標準湯劑物理指紋圖譜測定的一級指標為穩定性、堆積性、可壓性和流動性，二級指標為豪斯納比（IH）、松密度（Da）、振實密度（Dc）、顆粒間空隙率（Ie）、吸濕性（H）、卡爾系數（IC）和干燥失重（HR）.

2.3.2 標準化轉化

分析赤芍配方顆粒與標準湯劑各批次間差異時需將兩者實際測定值轉化至同一標準，各物理參數指標的數值范圍及標準化轉化方法參考相關文獻［6］，轉換值范圍及轉化方法見表3.

2.3.3 物理指紋圖譜構建

根據“2.3.1”項下各物理指標測定15批赤芍標準湯劑與配方顆粒的物理常數數值，并對數值轉化處理，以轉化后參數值為半徑繪制雷達圖，并以轉化后的參數平均值為半徑繪制物理對照指紋圖譜，赤芍標準湯劑與配方顆粒物理對照指紋圖譜比對詳情如圖1所示.

2.3.4 相似度分析

使用IBM SPSS Statistics 21.0軟件對赤芍標準湯劑與配方顆粒物理圖譜進行分析，根據雙變量相關Kendall’s Tau-b計算相似度，計算結果顯示，兩者相似度為0.810，說明兩者物理屬性較為相近.其中，IC和Ie反映粉體的可壓性，Da和Dc反映粉體的堆積性，IH反映粉體的流動性，H和HR反映粉體穩定性［7］.標準湯劑呈粉末狀，配方顆粒呈顆粒狀，兩者外觀形狀有所差異，由實驗結果可知，赤芍配方顆粒吸濕性及干燥失重均低于標準湯劑，說明赤芍配方顆粒穩定性較好，不易吸水變性.配方顆粒輔料的添加改善了配方顆粒的流動性和穩定性，使赤芍配方顆粒的外觀性狀、穩定性及防潮性均優于標準湯劑.

2.4 UV指紋圖譜

2.4.1 供試品溶液制備

精密稱取赤芍標準湯劑與配方顆粒各0.5 g，置于錐形瓶中，加20 mL純化水，精密稱定質量，超聲30 min（功率140 W，頻率40 kHz），冷卻后再次稱定并補足質量，搖勻過濾，取續濾液1 mL置于100 mL容量瓶中，加純化水定容至刻度線，搖勻備用.

2.4.2 吸收波長范圍確定

取適量供試品溶液在200～400 nm波長范圍內測定吸光度.

2.4.3 精密度

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為AH4），按照“2.4.1”項下方法制備供試品溶液，在200～400 nm波長范圍內連續測定6次吸光度值，取226、256、270和282 nm波長下的吸光度值，并計算RSD值.結果表明，在226、256、 270和282 nm波長下，赤芍標準湯劑與配方顆粒吸光度RSD值均＜5%，表明儀器精密度良好.

2.4.4 重復性

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為AH4）各6份，按照“2.4.1”項下方法制備供試品溶液，依次測定各份供試品溶液，根據取樣量及吸光度值計算其RSD值.結果表明，在226、256、270和282 nm波長下，赤芍標準湯劑與配方顆粒吸光度RSD值均＜5%，表明兩者供試品溶液制備方法重現性良好.

2.4.5 穩定性

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為AH4），按照“2.4.1”項下方法制備供試品溶液，每隔1 h在200～400 nm波長范圍內測定1次，共測定6次，根據其吸光度值計算RSD值.結果顯示，在226、256、 270和282 nm波長下，赤芍標準湯劑與配方顆粒吸光度RSD值均＜5%，表明兩者供試品溶液在5 h內穩定性良好.

2.4.6 樣品測定

按照“2.4.1”項下方法制備赤芍配方顆粒與標準湯劑供試品溶液，在200～400 nm波長范圍內測定吸光度值，所測UV指紋圖譜（以AH4為例）如圖2所示.

2.4.7 相似度分析

使用IBM SPSS Statistics 21.0軟件將15批赤芍標準湯劑與配方顆粒UV指紋圖譜進行相似度分析，根據雙變量相關Kendall’s Tau-b計算相似度，兩者相似度高達0.995，置信度（雙側）為 0.01 時，相關性顯著，說明兩者的有機化合物分子結構與化學組分相似，有效成分相似，赤芍配方顆粒制備過程中未使其有效成分出現大規模損失或轉換，在臨床應用中藥理作用一致.

2.5 APTT測定

2.5.1 血漿制備

取雄兔耳朵靜脈血液適量，置于一次性負壓采用管（裝有0.2 mL的0.109 mol/L枸櫞酸鈉做抗凝劑防止血液凝固）中，充分混勻后轉移至10 mL離心管中，在高速離心機（3 000 r/min）中離心15 min，取上清液，即得［8］.

2.5.2 供試品溶液制備

取赤芍標準湯劑與配方顆粒適量（推算至赤芍飲片為5g），置于具塞錐形瓶中，加入10 mL純化水，精密稱定質量，超聲（功率140 W，頻率40 kHz）20 min，冷卻后再次稱定補足質量，搖勻濾過，取續濾液，備用.

2.5.3 APTT測定方法

取兔血血漿與APTT試劑各50 μL混勻，在37 ℃溫育3 min后按順序加入待測赤芍標準湯劑和配方顆粒供試品溶液與氯化鈣溶液各50 μL，加入氯化鈣溶液的同時立即混勻計時，記錄血液凝固時間.

2.5.4 精密度

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為AH5），按照“2.5.2”項下方法制備供試品溶液，按照“2.5.3”項下測定方法連續測定6次，根據所測APTT值可知，赤芍標準湯劑與配方顆粒RSD值＜5%，表明半自動凝血儀精密性良好.

2.5.5 重復性

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為AH5）各6份，按照“2.5.2”項下方法制備供試品溶液，按照“2.5.3”項下方法測定各份供試品溶液，根據APTT值及取樣量可知，赤芍標準湯劑與配方顆粒RSD值均＜5%，表明兩者供試品溶液制備方法重現性良好.

2.5.6 穩定性

取赤芍標準湯劑與配方顆粒（批號為AH5），按照“2.5.2”項下方法制備供試品溶液，按照“2.5.3”項下方法每隔1 h測定1次樣品，共測定6次，根據APTT值可知，赤芍標準湯劑與配方顆粒RSD值均＜5%，表明兩者供試品溶液在5 h內穩定性良好.

2.5.7 樣品測定及分析

取15批赤芍標準湯劑與配方顆粒按照“2.5.2”項下方法制備供試品溶液，并按照“2.5.3”項下方法測定各批次樣品APTT值，結果見表4.使用IBM SPSS Statistics 21.0軟件將赤芍標準湯劑與配方顆粒APTT值進行分析，采用T檢驗進行顯著性分析，結果顯示兩者存在顯著性差異（Plt;0.05）.

3 討 論

標準湯劑理念的引入是中藥配方顆粒研發質量提升的一項重要舉措，可作為中藥配方顆粒和傳統中藥飲片的橋梁和紐帶.標準湯劑的質量是衡量中藥配方顆粒及傳統中藥湯劑藥效一致性的重要指標，也可用于臨床用藥比對標準，保證臨床用藥劑量一致性與準確性.中藥配方顆粒的所有藥學研究均須與標準湯劑進行對比，但目前表征參數僅有出膏率、有效成分含量及特征圖譜，不能充分表征標準湯劑及配方顆粒的質量屬性，在質量標準的完善上尚有缺口.因此，在標準湯劑與配方顆粒研究過程中，除《技術要求》規定的表征參數外，還應增加其物理性質及生物活性的對比研究.

標準湯劑物理屬性水平可為配方顆粒研制及質量控制提供一定理論指導，可直觀反映標準湯劑不同批次間各物理指標的相似及差異程度，同時可對標準湯劑的綜合屬性進行完善，用于標準湯劑的質量評價［9-10］.UV指紋圖譜主要用于化合物的結構鑒定［11］，可反映標準湯劑與配方顆粒間的化學結構差異；APTT可反映凝血功能，是內源凝血系統較敏感和最為常用的測定指標，通過APTT測定可研究赤芍標準湯劑與配方顆粒的活血活性差異.

本研究結果表明，經過工藝優化研究，在相同生藥量條件下，赤芍配方顆粒在出膏率、芍藥苷總量及APTT等指標均優于標準湯劑，且配方顆粒因添加輔料，其流動性、防潮性和穩定性優于標準湯劑，但兩者總體上的相似度較高，標準湯劑與配方顆粒UV指紋圖譜相似度較高，說明兩者有機化合物分子結構及化學組分相似.本研究結果表明，赤芍配方顆?？稍谝欢ǔ潭壬洗娉嗌诛嬈谂R床上的使用，故在中藥配方顆粒研究過程中，應基于該配方顆粒的理化性質和臨床應用，在《技術要求》基礎上，探索更多指標去表征標準湯劑及中藥配方顆粒的質量.

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（責任編輯：伍利華）

Exploratory Study on Quality Characterization Parameters of Red Peony Standard Decoction

LEI Yang1，YANG Min1 ，TIAN Peiling1，XU Yang1，

ZENG Shan1，TANG Hanyan1，SHEN Peng2，GUO Xiaoheng3

（1.School of Pharmacy，Chengdu University，Chengdu 610106，China;

2.Chengdu Tianxing Zhiyuan Biotechnology Co.，Ltd.，Chengdu 610040，China;

3.School of Preclinical Medicine，Chengdu University，Chengdu 610106，China）

Abstract：

In response to the incomplete quality characterization parameters of standard decoction，a comprehensive evaluation study was conducted on red peony formula granules to explore the quality characterization methods of standard decoction.On the basis of the HPLC fingerprint，extract rate and active ingredient content index stipulated in the Technical Requirements for Quality Control and Standard Formulation of Traditional Chinese Medicine Formula Granules （ hereinafter referred to as" Technical Requirements），the physical and ultraviolet fingerprint，APTT（activated partial thromboplastin time） in vitro blood circulation activity simulation and other indicators were added to study and compare the standard decoction and formula granules of red peony，and SPSS software was used for statistical analysis.The result showed that the extraction rate and paeoniflorin content of each batch of red peony formula granules were within the allowable range specified in the Technical Requirements.The physical and UV fingerprint similarity between the red peony standard decoction and the formula granules was high，but there were significant differences in the fluidity，moisture resistance，active ingredients，and blood activating effect between the formula granules and the standard decoction.The formula granules were superior to the standard decoction.It can be concluded that the parameters specified in the current Technical Requirements cannot fully characterize the quality attributes of standard decoction and formula granules，and further enrichment is needed.

Key words：

red peony;standard decoction;formula granules;characterization parameters

收稿日期：2023-11-20

基金項目：四川省科技成果轉移轉化示范項目（2023ZHCG0071）；成都大學2021—2023年研究生人才培養質量和教學改革立項項目（cdjgy2022004）

作者簡介：雷 陽（2000—），女，碩士研究生，從事新藥研發及中成藥質量再評價研究.E-mail：1260048178@qq.com

通信作者：沈 芃（1977—），女，碩士，高級工程師，從事藥物開發及再評價研究.E-mail：shenxinag@163.com郭曉恒（1979—），男，博士，副教授，從事中藥品質研究.E-mail：guohengcd@163.com