活動性肺結核患者血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及單核細胞P糖蛋白水平及其臨床意義

張會玲, 高海彥

武威市涼州醫院檢驗科,甘肅武威 733000

活動性肺結核(active pulmonary tuberculosis,APTB)是以結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)繁殖活躍且毒性極高為主要特征的肺結核,易造成傳播和感染,采用有效的監測指標早期評估對控制結核病的傳播具有重要意義[1]。隨著近年分子免疫和細胞學的發展,細胞因子和免疫細胞在APTB免疫機制中的作用已成為APTB臨床研究的熱點[2]。Fad D9重組蛋白是以脂肪酸-CoA連接酶形式參與結核桿菌脂質降解過程的脂質代謝相關基因,可誘導Th1細胞因子,對結核桿菌在體內擴散具有抑制作用[3]?？扇苄园准毎只乖?4亞型(sCD14-ST)是細菌表面脂多糖與單核巨噬細胞結合形成的可溶性糖蛋白片段,常作為急性時相反應標志物應用于感染性疾病的臨床診斷[4]。單核細胞P糖蛋白(monocyte P-glycoprotein,Pgp)是ATP結合盒轉運體家族中最具代表性的蛋白,可上調細胞外排轉運體的表達,有利于維持細胞內環境穩態[5]。目前臨床關于血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及Pgp與結核病病情的相關報道較少,因此本研究分析APTB患者血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp水平及其臨床意義,旨在為APTB的臨床診斷提供新的監測指標。

1 資料和方法

1.1 研究對象

選取本院2019年1月—2021年1月收治的96例APTB患者納入APTB組,年齡(39.17±5.12)歲,男57例,女39例,血沉(37.13±7.49)mm/h。納入標準:符合APTB診斷標準[6];接受2HRZE/4HR治療方案;臨床資料完整。排除標準:合并乙肝病毒、丙肝病毒或人類免疫缺陷病毒感染;合并慢性腎臟疾病、惡性腫瘤;3個月內使用免疫抑制劑;未規律服用抗結核藥物;合并骨關節炎、風濕病等自身免疫疾病。所有患者均行胸部CT檢查,按照肺部病灶有無空洞和病灶肺葉數(病灶肺葉≥3個或病灶肺葉<3個)分亞組。另選擇同期體檢健康且經γ干擾素釋放試驗(interferon-gamma release assay,IGRA)檢測陰性或者陽性各48例分別納入健康對照(health control,HC)組和結核潛伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)組。HC組年齡(38.74±5.26)歲,男26例,女22例。LTBI組年齡(38.05±5.11)歲,男25例,女23例。各組一般資料比較差異無顯著性(P>0.05)。本研究經本院倫理委員會審批通過,所有受試者均知情同意。

1.2 Fad D9重組蛋白的檢測

以MTB H37Rv為模板基因組,使用Fad D9基因(序列號888574)的上下游引物進行聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR),產物經擴大培養、裂解和純化后獲得Fad D9重組蛋白,并進行電泳鑒定純度。采集各組空腹靜脈血3 mL,離心后按1∶100稀釋為一抗,以過氧化物酶標記的山羊抗人IgG按1∶3 000稀釋為二抗,將Fad D9重組蛋白作為抗原包被96孔板,檢測Fad D9重組蛋白抗體特異性反應水平。以Fad D9重組蛋白為抗原與全血樣本37 ℃共孵育20～24 h,離心分離血漿,并進行IGRA,ELISA試劑盒購自北京萬泰生物藥業股份有限公司。將檢測結果與試劑盒中的標準管進行比對,檢測Fad D9重組蛋白在臨床血漿樣本中激起的細胞免疫水平,以血清Fad D9重組蛋白水平表示Fad D9重組蛋白表達水平。

1.3 血清sCD14-ST和Pgp水平的檢測

采用酶聯免疫法檢測各組血清sCD14-ST和Pgp水平,試劑盒由上海機純實業有限公司和陜西伊諾納爾生物科技有限公司生產,所有檢驗操作均嚴格按試劑說明書執行。

1.4 統計學處理

2 結 果

2.1 各組Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp水平的比較

Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp水平APTB組>LTBI組>HC組;且有空洞組高于無空洞組,病灶肺葉≥3個組高于<3個組(P<0.05;表1)。

2.2 Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp的診斷效能

血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp對APTB診斷和APTB、LTBI鑒別有良好效能(P<0.001;圖1和圖2)。

圖1 血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp對APTB診斷的ROC曲線

圖2 血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp對LTBI鑒別診斷的ROC曲線

3 討 論

APTB患者肺組織內MTB持續增殖且傳播活躍,影像學檢查可見肺部斑片狀滲出或形成空洞和播散性病變[7]。有研究顯示,APTB臨床表現具有明顯的異質性,檢測相關因子水平變化情況,對判斷結核的活動性及監測評估病情具有重要的意義[8]。

本研究結果顯示,APTB組血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp水平均高于LTBI組和HC組,與張君麗等[3]研究結果類似,說明上述指標在APTB組與LTBI組中均顯著升高,其中APTB組各指標升高更為顯著。γ干擾素(interferon-γ,IFN-γ)是對MTB感染具有控制作用的細胞因子,Fad D9重組蛋白可通過調控IFN-γ的分泌發揮其對MTB在體內傳播的細胞免疫作用[9]。機體感染MTB時,細胞吞噬MTB過程中有大量溶酶體酶參與,促使細胞膜上sCD14大量釋放入血[10]。本研究ROC曲線結果顯示,血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp對APTB和LTBI鑒別具有較好的診斷效能,血清Fad D9重組蛋白診斷效能高于sCD14-ST和Pgp,說明血清Fad D9重組蛋白可作為APTB篩查和MTB潛伏感染的可靠監測指標。

本研究結果顯示,APTB患者血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp水平在有空洞和病灶肺葉≥3個的APTB患者中異常升高。大量T細胞表位的Fad D9蛋白可誘導Th1型細胞免疫反應,其血清含量可評估機體免疫損傷程度。sCD14-ST是產生于CD14細菌感染中的N端片段,機體出現免疫系統抑制時,抗原免疫逃逸使病情加重。嚴重的MTB感染時,細胞可通過誘導上調Pgp表達,以減少外源性有害物質傷害。麥精蘭[11]與馬清艷等[12]研究發現,血清標志物sCD14-ST與Pgp在耐多藥肺結核患者血清水平升高與病情進展有關,與本研究類似,提示Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及Pgp對APTB病情嚴重程度評估具有一定的監測意義。

綜上所述,Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及Pgp在APTB患者血清中明顯升高,且與肺部病灶的嚴重程度有關。本研究的不足之處在于未就上述指標對APTB療效評估的價值進行探討,后續仍需加大樣本量深入研究驗證。