乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA載量與α-SMA、AFP及肝纖維化的關系

廖洪柳, 徐海鋒, 徐維蔓

達州市中西醫結合醫院檢驗科,四川達州 635000

乙型肝炎肝硬化常由慢性乙型肝炎病毒感染、炎癥長期刺激所致[1]。全球每年死于乙型肝炎肝硬化的患者多達100萬人,因此關注乙型肝炎肝硬化的防治工作尤為重要,應選擇合適的臨床檢測指標對該類人群進行病情評估[2-3]。乙肝病毒脫氧核糖核酸(hepatitis B virus DNA,HBV-DNA)具有良好的靈敏度和特異度,常被用于評估乙型肝炎病情進展[4]。α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)同時具有成纖維細胞和肌細胞的特性,近年來研究發現α-SMA可以用于評估肝組織損傷[5-6]。既往已有研究證實,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在慢性乙肝類型疾病病情評估中有較好的臨床價值[7-8],但關于其與HBV-DNA載量水平關系的研究報道相對較少。鑒于此,本次研究旨在探討乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA載量與α-SMA、AFP及肝纖維化的關系,旨在為臨床診治工作提供一定幫助。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2020年5月—2022年5月收治的乙型肝炎肝硬化患者108例,參考李寧俠等[9]方法檢測HBV-DNA載量,并依據其水平將患者分為低水平組(35例,HBV-DNA<1.0×103拷貝/mL)、中水平組(39例,1.0×103拷貝/mL～1.0×107拷貝/mL)和高水平組(34例,HBV-DNA≥1.0×107拷貝/mL)。納入標準:①符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》診斷標準[10];②未接受過抗病毒治療,或入組前半年內未進行抗病毒或免疫治療;③無其他類型肝炎病毒感染。排除標準:①肝癌、胃癌、膽管癌;②免疫系統疾病;③心、腎等重要臟器功能損傷;④妊娠期或哺乳期婦女;⑤臨床資料不完整。本研究為回顧性研究,檢測指標所需樣本采集均取得患者及家屬知情同意,并簽署同意書,且符合赫爾辛基宣言。各組一般資料比較差異無顯著性(P>0.05;表1)。

表1 各組一般資料的比較

1.2 α-SMA的檢測

所有患者均行肝組織活檢術采集肝組織標本,以SP法依次切片、脫蠟、水化、修復、一抗和二抗溫浴、顯色、復染、脫水、透明和封片后,以PBS代替一抗為空白對照,胞質呈現棕黃色即可判定為陽性細胞,由Image 6.0軟件計算α-SMA光密度(optical density,OD)。

1.3 肝纖維化指標檢測

采用化學發光法檢測血清肝纖維化指標,包括透明質酸(hyaluronic acid,HA)、層粘連蛋白(lanminin,LN)、Ⅳ型膠原(type Ⅳ collagen,Ⅳ-C)和Ⅲ型前膠原(procollagen Ⅲ,PC-Ⅲ)。儀器選擇羅氏E601電化學發光免疫分析儀,試劑和試劑盒均為儀器配套產品。

1.4 肝功能指標和AFP的觀察

比較各組谷丙轉氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、谷草轉氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOT)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)水平。采用ELISA法檢測血清AFP水平,試劑與試劑盒購自美國Sigma公司,操作步驟嚴格按說明書進行。

1.5 統計學方法

2 結 果

2.1 各組GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平的比較

隨著HBV-DNA載量水平升高,各組GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組(P<0.05;表2)。

表2 各組GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平的比較

2.2 各組肝纖維化指標的比較

隨著HBV-DNA載量水平升高,各組HA、LN、Ⅳ-C和PC-Ⅲ水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組(P<0.05;表3)。

表3 各組肝纖維化指標的比較 mg/L

2.3 HBV-DNA載量與各指標的相關性

對HBV-DNA載量水平進行變量賦值,HBV-DNA載量低水平、中水平和高水平分別賦值為1、2、3。Pearson相關性分析顯示,HBV-DNA載量水平與α-SMA、AFP、HA、LN、Ⅳ-C、PC-Ⅲ均呈正相關(P<0.05;圖1)。

圖1 Pearson相關性分析HBV-DNA載量水平與各指標的相關性1為HBV-DNA載量低水平;2為HBV-DNA載量中水平;3為HBV-DNA載量高水平。

3 討 論

乙型肝炎肝硬化因早期缺乏典型的臨床表現常被人們所忽視,一經確診多已處于較為嚴重的階段,預后不甚理想[11]。故選擇有效的血清學檢測指標對患者進行病情評估很有必要。

本研究發現,隨著HBV-DNA載量水平升高,各組GPT、GOT、TBIL水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組。持續的HBV感染可以誘導肝臟炎癥反應,引起肝組織纖維化,當病情進展到一定程度時,可發展為肝硬化。GPT存在于肝臟細胞胞質內,GOT主要存在于線粒體,在肝細胞受到損傷時,GPT、GOT會相繼釋放入血,其血清水平升高可以反映肝細胞損傷程度。此外,肝細胞損傷還會影響肝細胞對膽紅素的攝取和轉化,導致血清TBIL水平升高。

本研究結果顯示,隨著HBV-DNA載量水平升高,各組α-SMA、AFP水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組。α-SMA在肝內膠原形成和肝纖維化中發揮重要的調節作用,其作用機制可能與轉化生長因子-β/Smad信號通路有關[12]。臨床可以通過降低血清α-SMA表達,抑制肝星狀細胞活化,進而改善肝纖維化。AFP是由卵黃囊和胎肝細胞產生,目前多被認為是肝癌高特異性蛋白質[13]。HBV-DNA與肝細胞DNA結合后,改變了細胞的遺傳特性,使AFP調控基因發生改變,AFP大量合成[14]。肝細胞的損傷和修復過程均會伴隨肝臟纖維化形成,而修復與再生的肝細胞會產生大量AFP,故而呈現較高水平AFP。本文進一步分析可見,HBV-DNA載量水平與α-SMA、AFP均呈正相關,表明α-SMA、AFP水平檢測可以用于評估其病情進展,指導臨床治療,但具體關系仍需未來進一步深入研究。

本研究發現,隨著HBV-DNA載量水平升高,各組HA、LN、Ⅳ-C和PC-Ⅲ水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組,且相關性分析可見,HBV-DNA載量水平與上述指標均呈正相關。HA是由肝臟間質細胞組成,對于診斷肝硬化患者肝臟纖維化具有較好的靈敏度。LN主要存在于基底膜中,伴隨纖維細胞增加可生成大量LN。Ⅳ-C是基底膜重要組成部分,常被作為肝臟纖維化的臨床診斷標志物。肝臟纖維化病變會使PC-Ⅲ水平明顯升高,PC-Ⅲ常被用于早期肝硬化的診斷與評估工作[15]。乙型肝炎肝硬化患者由于長期HBV感染,使肝臟長期處于損傷的病理狀態,肝臟結締組織增生,不斷促進肝臟纖維化進程,臨床可以通過上述指標檢測評價肝臟的纖維化程度,以此評估HBV復制的活躍性。

綜上所述,乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA載量水平越高,α-SMA、AFP水平越高,肝臟纖維化程度越嚴重,且α-SMA、AFP及肝纖維化水平與HBV-DNA載量水平呈正相關,臨床可以通過上述指標檢測判斷疾病的嚴重程度,為疾病的防治提供參考和借鑒。