血清miR-122表達水平與冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的關系

吳雷 耿國英 姬勁銳

(鄭州人民醫院心內科,河南 鄭州 450000)

冠心病心絞痛是由于冠狀動脈粥樣硬化造成管腔狹窄引起的心肌短暫缺血或缺氧而出現的疼痛癥狀,多發于男性,在中老年人群中的發病率為4%～7%,臨床表現為胸悶、胸痛或咽喉部、胸骨后緊縮感,嚴重損害患者身體健康〔1〕。當前常采用經皮冠狀動脈介入(PCI)手術治療該病,能有效降低死亡率,但PCI術后即使患者規律服用二級預防藥物,仍可能出現非靶血管斑塊進展的情況,可進一步導致不良心血管事件的發生,嚴重影響預后〔2〕。因此,術后早期、有效預測非靶血管病變進展十分重要。有研究表明,微小核糖核酸(miR)在新血管再生過程中起重要作用,對心血管疾病的診斷有重要意義〔3〕。另有報道〔4〕指出,miR-122表達水平在冠心病患者中表達水平顯著升高,對冠心病的診斷具有臨床價值,提示miR-122表達水平可能介導了冠心病早期發病過程。但miR-122表達水平是否能對冠心病心絞痛患者PCI術后非靶血管斑塊進展有所提示,需要進一步研究證實。本研究探討miR-122表達水平與冠心病心絞痛患者PCI術后非靶血管斑塊進展的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2020年3月鄭州人民醫院收治的擬擇期行PCI術治療的168例冠心病心絞痛患者為研究組,另選取同期經冠狀動脈造影(CAG)檢查顯示冠脈血管正常者145例為對照組。其中研究組男94例,女74例;年齡41～75歲,平均(57.70±8.92)歲;病程:3個月至5年,平均(3.56±0.67)年;病變血管:前降支89例,回旋支32例,右冠47例;體質量指數(BMI):21～26 kg/m2,平均(23.14±2.08)kg/m2;伴有高血壓17例,糖尿病9例,高血壓合并糖尿病4例,高脂血癥13例,吸煙16例。對照組男83例,女62例;年齡40～77歲,平均(56.45±8.21)歲;BMI:20～24 kg/m2,平均(22.75±1.96)kg/m2。兩組性別、年齡、BMI對比差異無統計學意義(χ2=0.053,t=1.282、1.699,均P>0.05),具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準。研究組患者在無禁忌證的情況下,在PCI術后常規服用冠心病二級預防藥物(包括氯吡格雷、阿司匹林、β-受體阻滯劑、血管緊張素轉換酶抑制劑、他汀類藥物及硝酸酯類藥物等)。納入標準:研究組患者經CAG檢查顯示冠狀動脈狹窄超過管腔的50%確診為冠心病心絞痛,均伴有胸悶、胸痛等典型或非典型心絞痛癥狀〔5〕,同時CAG檢查確定患者至少1支冠狀動脈或主要分支狹窄>70%(直徑法),且患者行擇期PCI,PCI術后9～12個月行第2次CAG〔6〕;對照組均為經CAG檢查顯示冠脈血管正常者;均簽署知情同意書。排除標準:有冠狀動脈搭橋手術史者;合并其他心臟疾病者;排除心絞痛以外臨床類型的冠心病;首次出院3個月內再次行PCI者;合并惡性腫瘤、免疫系統疾病、肝腎功能不全者;合并其他影響冠狀動脈血管評估和血脂代謝的疾病。

1.2血清miR-122測定 對照組于檢查當天,研究組于入院第2天,抽取清晨空腹靜脈血3 ml,2 h內在4 ℃條件下離心12 000 r/min,15 min,取上清液于-80 ℃冷凍保存。用離心柱法提取miRNA富集部分(miRNA提取試劑由北京天根生化科技有限公司提供),采用的Scientific Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit(美國Thermo公司生產)進行cDNA的合成,反應條件為:25 ℃ 5 min;42 ℃ 60 min;70 ℃ 5 min。反應結束后,加入DNAse-Free ddH2O將擴增好的cDNA稀釋10倍,作為定量PCR的模板。采用ABI 7900實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)儀(美國ABI公司)、SYBR Green Ⅰ熒光定量試劑盒(TaRaKa公司生產)進行RT-qPCR檢測,所有反應采用2個復孔,miR-122上游引物序列: 5′-TATTCGCACTGGATACGACACAAAC-3′,下游:5′-GCCCGTGGAGTGTGACAATGGT-3′;U6上游引物序列: 5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′,下游:5′-CGCTTCAGAATTTGCGTGTCAT-3′。反應條件:95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s,60 ℃ 34 s,共40個循環。以U6作為內參,計算2-△△Ct,即為miR-122相對表達量,其中△Ct=Ct(miR-122)-Ct(U6)。

1.3隨訪及觀察指標 患者出院后隨訪1年,根據研究組患者PCI術后非靶血管斑塊進展情況將其分為進展組與未進展組,PCI術后9～12個月復查CAG,符合以下任意1條即認為非靶血管病變進展〔7〕:初次CAG時存在≥50%的狹窄病變,其直徑再減少≥10%;初次CAG時存在<50%的狹窄病變,其直徑再減少≥30%;初次CAG時的正常血管,出現>30%的新發狹窄病變;隨訪復查CAG時,任何進展至完全閉塞的狹窄病變。收集患者性別、年齡、體質量指數(BMI)、心臟外科與介入治療狹窄冠狀動脈研究(SYNTAX)評分、血脂指標〔包括總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)〕、非靶血管參考直徑、糖尿病、血清miR-122水平等資料。

1.4統計學方法 采用SPSS22.0軟件進行t檢驗、Mann-WhitneyU檢驗、χ2檢驗、多因素Logistic回歸分析,采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清miR-122表達水平對冠心病心絞痛患者PCI術后非靶血管斑塊進展的預測價值。

2 結 果

2.1兩組血清miR-122表達水平比較 研究組血清miR-122表達水平〔2.93(2.60,3.42)〕明顯高于對照組〔1.76(1.05,2.03);U=27.459,P<0.001〕。

2.2研究組PCI術后非靶血管斑塊進展情況及進展組、未進展組血清miR-122表達水平比較 隨訪1年期間,研究組無失訪,其中25例患者PCI術后出現非靶血管斑塊進展,未進展者143例,進展率為14.88%(25/168);進展組血清miR-122表達水平〔4.17(3.66,4.32)〕明顯高于未進展組〔2.86(2.51,3.20);U=5.097,P<0.001〕。

2.3血清miR-122表達水平與冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的關系 經多因素Logistic回歸分析顯示,性別、SYNTAX評分、糖尿病、LDL-C水平、血清miR-122水平均為冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的獨立危險因素(P<0.05),非靶血管參考直徑、HDL-C均為冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的獨立保護因素(P<0.05)。見表1、表2。

2.4血清miR-122表達水平對冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的評估價值 血清miR-122表達水平對冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的最佳截斷點為3.28,靈敏度、特異度、AUC、95%CI分別為92.00%(23/25)、81.12%(116/143)、0.905、0.850～0.944。見圖1。

表1 冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展與未進展可能影響因素對比

表2 冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展多因素Logistic回歸分析

圖1 血清miR-122水平對冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的預測ROC曲線

3 討 論

冠心病心絞痛的發病基礎是冠狀動脈粥樣硬化,動脈管腔內膜下的脂質類沉積物不斷累積會造成血管阻滯、管腔狹窄,使得管腔血流不暢,供氧不足,導致心肌缺氧缺血,從而引發心絞痛,嚴重時可引起心肌梗死,對患者的生命健康造成嚴重威脅〔8,9〕。PCI是冠心病常用的治療方法,但既往研究〔10〕表明,PCI術后發生非靶血管斑塊進展的風險較高,加重患者身心痛苦。本研究結果與楊增芯等〔11〕研究結果接近(PCI術后進展率為14.36%),說明PCI術后非靶血管斑塊病變發生率高,不利于患者預后。因此,探索早期有效預測非靶血管斑塊病變的指標具有重要的臨床意義。

本研究提示,血清miR-122在冠心病心絞痛患者中呈高表達,并在PCI術后非靶血管斑塊病變的過程中發揮作用。miR-122主要在人類肝臟中表達,參與肝細胞增殖、分化、脂質代謝等多種病理過程,可激活轉錄因子固醇調節元件結合蛋白(SREBP)-1、二酰甘油酰基轉移酶2、脂肪酸合成酶、乙酰輔酶A羧化酶1等靶基因,參與體內脂質代謝〔12,13〕。動物實驗表明〔14〕,miR-122在急性心肌梗死大鼠中呈高表達,并可調控心肌細胞的凋亡,提示miR-122與冠心病的嚴重程度具有明顯的相關性。金海燕等〔15〕研究表明,miR-122在冠心病患者中表達水平顯著升高,對冠心病的診斷具有臨床價值。另有研究〔16〕發現,通過抑制miR-122表達,可使神經元PAS結構域蛋白(NPAS)3介導的內皮細胞向間充質細胞轉化受到抑制,從而減少動脈粥樣硬化病變的形成。有研究〔17〕指出,miR-122通過調控炎癥、凋亡、氧化應激及細胞外基質沉淀等多種心血管疾病的過程,在膽固醇合成和心血管系統的惡化中起重要作用,本研究與上述報道相符。本研究結果顯示,miR-122對冠心病心絞痛患者PCI術后非靶血管斑塊進展的預測效能理想。miR-122在動脈粥樣硬化病變的過程中發揮重要作用〔18〕,且可能表達時間早,臨床上通過監測其水平,能盡早發現冠心病絞痛患者在PCI術后非靶血管斑塊進展并及時采取治療措施,從而能改善冠心病心絞痛患者預后,降低進展率。

女性性激素以雌激素為主,對冠狀動脈血管反應活性有保護作用,且可通過抗炎作用促進斑塊穩定;SYNTAX評分反映冠脈病變程度,評分越高,病變程度越高,術后非靶血管斑塊進展的風險越大〔19〕;糖尿病可加重脂代謝紊亂及加速動脈粥樣硬化,冠心病癥狀加重,從而增加非靶血管斑塊進展的風險;LDL-C氧化后可參與動脈粥樣硬化斑塊形成,提升術后靶血管斑塊進展概率,研究指出LDL-C是急性心肌梗死患者初始PCI術后非靶病變進展的預測因素〔20〕,此與本研究結果相符合;非靶血管參考直徑越大,血流剪切力越高,抗動脈粥樣硬化的能力越強;HDL-C降低是冠心病血脂譜的主要特征之一,提示低水平HDL-C與冠心病發展的風險呈負相關〔21〕。臨床上應對上述危險因素加以控制、對保護因素予以支持,從而達到降低非靶血管斑塊進展的風險的目的。

綜上,冠心病心絞痛患者較健康者、冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展者較未進展者血清miR-122表達水平均異常增高,且血清miR-122表達水平升高可增加冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的風險,該項指標對冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展具有較好的預測效能,另性別、SYNTAX評分、糖尿病、非靶血管參考直徑、LDL-C、HDL-C亦是冠心病心絞痛患者PCI后非靶血管斑塊進展的影響因素,可指導臨床工作。