飼糧中添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、腸道形態(tài)和組織殘留的影響

李嘉鳴， 劉夢(mèng)婷， 董 朕， 劉 華， 鄒湘霖，楊子輝， 陳 杰， 曾建國(guó) ， 張明軍

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸藥湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410128；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；4.廣州市翔豐養(yǎng)殖有限公司，廣東 廣州 510800）

飼用促生長(zhǎng)抗生素（AGPs）的大量使用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增加， 動(dòng)物腸道和組織以及環(huán)境中的抗生素殘留對(duì)細(xì)菌交叉耐藥、 食品安全和生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生潛在風(fēng)險(xiǎn)（Aarestrup，2012）。由于細(xì)菌耐藥性、食品安全以及公共健康安全隱患，自2006 年起， 許多國(guó)家和地區(qū)相繼禁止或限制了在飼料中使用AGPs， 我國(guó)也于2020 年7 月1 日起實(shí)施全面禁用飼用促生長(zhǎng)抗生素政策（Coope，2022）。 因此，動(dòng)物生產(chǎn)領(lǐng)域迫切需要安全、有效的AGPs 替代品。 博落回提取物（MCE）是從博落回果莢中提取的苯并菲啶類生物堿， 其有效成分為血根堿和白屈菜紅堿，二者總量不少于60%，血根堿含量不少于40%（Yang，2016）。2011 年，博落回提取物及其制劑博落回散被注冊(cè)批準(zhǔn)為國(guó)家二類新獸藥，具有抗菌消炎、開(kāi)胃、促生長(zhǎng)功能，可用于促進(jìn)豬、雞、肉鴨、淡水魚(yú)類，蝦、蟹和龜、鱉生長(zhǎng)。 作為我國(guó)首個(gè)“可在飼料中長(zhǎng)期添加的”中獸藥，博落回散在豬、雞、水產(chǎn)等經(jīng)濟(jì)動(dòng)物中表現(xiàn)出良好促生長(zhǎng)效果（Wang，2022；Manaa，2022；Chen，2018），并具有改善動(dòng)物腸道健康、減少氧化應(yīng)激損傷、增強(qiáng)先天免疫和抗病能力的作用（Dong，2022）。 Huang等（2018）在白羽肉雞飼糧中添加150 mg/kg 博落回散（血根堿含量1.5%）顯著提高了肉雞采食量，顯著降低了肉雞飼養(yǎng)全期的料重比。 Khadem 等（2014）研究發(fā)現(xiàn)，博落回散（血根堿含量1.5%）具有抗炎活性，能夠促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)。 Xue 等（2017）報(bào)道，150 mg/kg 博落回散（血根堿含量約為1.5%）能夠減輕產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒肉雞十二指腸、空腸和回腸的病變。 Lee 等（2015）發(fā)現(xiàn)，在飼喂肉雞的飼糧中添加50 mg/kg 博落回散（血根堿含量1.5%）可以改善雄性肉雞腸道吸收水分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的功能，顯著提高蛋白質(zhì)和氨基酸等有機(jī)物的消化率。 因此，肉雞上的研究表明飼糧中添加博落回散可提高肉雞生長(zhǎng)性能，降低腸道炎癥，改善腸道健康。

泰和烏骨雞是我國(guó)的特有珍禽，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，因兼?zhèn)涫乘巸捎谩⒂^賞價(jià)值而備受關(guān)注。目前，博落回散在肉雞上的研究較多， 鮮有其應(yīng)用于泰和烏骨雞的相關(guān)報(bào)道。 本試驗(yàn)以泰和烏骨雞為試驗(yàn)動(dòng)物， 評(píng)估飼料添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞生長(zhǎng)性能、屠宰性能、器官指數(shù)、血清生化指標(biāo)、腸道形態(tài)的影響以及血根堿和白屈菜紅堿在組織的殘留情況， 為博落回散在泰和烏骨雞健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 博落回散（規(guī)格：100 g：0.375 g），血根堿和白屈菜紅堿之和不低于0.225%，其中血根堿≥0.15%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取健康狀況良好、 體重相近[（30.0±0.1）g]的1 日齡泰和烏骨雞200 只，隨機(jī)分為對(duì)照組（飼喂不含抗生素的基礎(chǔ)飼糧）和博落回散組（添加500 mg/kg 博落回散的飼糧），每組10 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞（公母各半）。 基礎(chǔ)飼糧參照雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 33-2004）和其他文獻(xiàn)設(shè)計(jì)（曾杰，2019；許蘭嬌，2014；黎觀紅，2011）配制，滿足泰和烏骨雞營(yíng)養(yǎng)需要， 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在廣東省廣州市翔豐養(yǎng)殖有限公司花都養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行， 整個(gè)飼養(yǎng)試驗(yàn)為期56 d，其中1 ～28 d 為試驗(yàn)前期，29 ～56 d 為試驗(yàn)后期。 采用地面籠養(yǎng)方式飼養(yǎng)，免疫、消毒、光照、通風(fēng)等均按常規(guī)程序進(jìn)行，試驗(yàn)期間自由采食和飲水。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能和屠宰性能 在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，稱取所有試驗(yàn)雞的初始重量。試驗(yàn)結(jié)束后，所有試驗(yàn)雞在禁食12 h 后，稱取試驗(yàn)雞的末重、屠體重、全凈膛重。 記錄試驗(yàn)期間采食量， 計(jì)算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

屠體重：放盡血液后拔去全身羽毛后的重量，用濕拔法要瀝干全部水分后稱重。

全凈膛重：半凈膛重去心、肝、腺胃、肌胃、脂肪及頭、腳的重量。

1.4.2 器官指數(shù) 試驗(yàn)結(jié)束稱重后， 從兩組中分別隨機(jī)選取6 只泰和烏骨雞頸靜脈放血屠宰后剖解，分離出心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟等器官，用濾紙擦去血跡，去除內(nèi)容物和附著脂肪后稱重，計(jì)算器官指數(shù)。

器官指數(shù)=器官重量/活體重。

1.4.3 血清生化 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，分別從兩組中隨機(jī)選取12 只健康試驗(yàn)雞，翅下靜脈采血，靜置2 h后離心獲得血清，于-80 ℃保存，以待血清生化指標(biāo)的測(cè)定。采用全自動(dòng)生化分析儀（邁瑞B(yǎng)S-420，深圳邁瑞生物電子股份有限公司，中國(guó)深圳）對(duì)總蛋白（TP）、葡萄糖（GLU）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、 尿酸 （UA）、 肌酐 （Crea）、 總膽固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDLC）、低密度脂蛋白（LDLC）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和α-羥丁酸脫氫酶（α-HBDB）進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.4 腸道形態(tài) 取十二指腸、 空腸和回腸段中部約1.5 cm 于10%中性福爾馬林溶液中固定，經(jīng)常規(guī)石蠟切片制作，HE 染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察， 使用圖像分析系統(tǒng)測(cè)量腸段絨毛高度（VH）、隱窩深度（CD），計(jì)算絨毛高度/隱窩深度比值（絨隱比，VH/CD）。

1.4.5 血根堿和白屈菜紅堿在組織中的殘留 試驗(yàn)結(jié)束后1 d， 兩組隨機(jī)選取6 只試驗(yàn)雞放血屠宰，采集心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胸肌、腿肌、皮膚組織、腹部和皮下脂肪，擦去血跡后剪碎，-80 ℃保存，待測(cè)。試驗(yàn)雞組織中血根堿和白屈菜紅堿的殘留量參照劉夢(mèng)婷（2022）的方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法 試驗(yàn)數(shù)據(jù)先用Excel 進(jìn)行匯總整理， 再采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行Shapiro-Wilk 正態(tài)性檢驗(yàn)， 然后使用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析， 數(shù)據(jù)均以 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 代表差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 飼糧中添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞生長(zhǎng)性能和屠宰性能的影響 由表2 可知， 相比于對(duì)照組， 博落回散組泰和烏骨雞的末重增加了6.00%（P＜0.05），平均日增重增加了9.72%（P＜0.05），料肉比顯著降低5.29%（P＜0.05）。表現(xiàn)出博落回散對(duì)泰和烏骨雞生長(zhǎng)性能的積極影響。 博落回散組泰和烏骨雞的屠宰率和全凈膛率高于對(duì)照組，但差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 博落回散對(duì)泰和烏骨雞生長(zhǎng)性能和屠宰性能的影響

2.2 飼糧中添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞器官指數(shù)的影響 由表3 可知， 博落回散組和對(duì)照組間泰和烏骨雞的心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟和小腸指數(shù)差異不顯著， 表明飼糧中添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞器官指數(shù)無(wú)明顯影響（P＞0.05）。

表3 博落回散對(duì)泰和烏骨雞器官指數(shù)的影響

2.3 飼糧中添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞血清生化指標(biāo)的影響 由表4 可知， 飼糧中添加博落回散后泰和烏骨雞血清BUN 水平顯著降低22.06%（P＜0.05）， 但對(duì)ALT、LDH、α-HBDB、TP、ALB、GLU、TG、TCHO、HDLC、LDLC 和Crea 無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表4 博落回散對(duì)泰和烏骨雞血清生化的影響

2.4 飼糧中添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞腸道形態(tài)的影響 泰和烏骨雞十二指腸、空腸、回腸組織切片見(jiàn)圖1。 與對(duì)照組相比，博落回散組的十二指腸絨毛更加細(xì)長(zhǎng)，絨毛間距更加明顯；對(duì)照組和博落回散組的空腸和回腸組織形態(tài)沒(méi)有明顯差異。由表5 可知， 博落回散組的十二指腸VH 略高于對(duì)照組、CD 略低于對(duì)照組，VH/CD 顯著增大20.41%（P＜0.05）； 各組空腸和回腸的VH、CD、VH/CD 差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 博落回散對(duì)泰和烏骨雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

表5 博落回散對(duì)泰和烏骨雞腸道形態(tài)指數(shù)的影響

2.5 博落回散效用成分血根堿和白屈菜紅堿在泰和烏骨雞組織中的殘留 泰和烏骨雞的心臟、肝臟、腎臟、胸肌、腿肌、皮膚、脂肪（腹部及皮下）組織樣品經(jīng)UPLC-MS/MS 檢測(cè)，對(duì)照組和博落回散組的中血根堿和白屈菜紅堿均未檢測(cè)到或殘留量低于定量限2 μg/L 和0.5 μg/L。

3 討論與分析

3.1 博落回散對(duì)泰和烏骨雞生長(zhǎng)性能和屠宰性能的影響 生長(zhǎng)性能是衡量動(dòng)物生長(zhǎng)狀況最直觀的指標(biāo)，提高烏骨雞生長(zhǎng)性能可以增加行業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。 研究表明，博落回散對(duì)多種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物具有促生長(zhǎng)作用（Wang，2022；Manaa，2022；Liu，2020；Chen，2018）。 Liu 等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.7 mg/kg 血根堿（相當(dāng)于450 mg/kg 博落回散）可以顯著提高黃羽肉雞的平均日增重。 李鵬等（2022）在雪峰烏骨雞上的研究結(jié)果顯示，飼糧中添加166 mg/kg 博落回提取物 （血根堿質(zhì)量含量0.375%）顯著提高了肉雞的日增重和末重。 此外，博落回散作為可長(zhǎng)期添加的中獸藥， 可緩解熱應(yīng)激對(duì)動(dòng)物的不利影響，Wang 等（2022）驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加1000 mg/kg 博落回散（血根堿含量為0.015%）顯著提高了熱應(yīng)激肉雞的日增重和日采食量，改善了熱應(yīng)激肉雞的生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 飼糧中添加博落回散顯著提高了泰和烏骨雞的平均日增重，并顯著降低了料重比。研究顯示，腸道微生物，如糞腸球菌、乳酸桿菌等，可通過(guò)芳香族氨基酸脫羧酶 （AADC） 將芳香族氨基酸（AAC）催化成芳香族胺。 而血根堿是一種AADC抑制劑， 可以抑制腸道內(nèi)AADC 活性（Drsata，1996），這種抑制作用是因?yàn)檠鶋A的分子結(jié)構(gòu)與芳香氨基酸分子結(jié)構(gòu)相似， 可競(jìng)爭(zhēng)性地與AADC結(jié)合，防止AAC 的降解，增加AAC 的利用率，從而改善生長(zhǎng)性能（Bavarsadi，2021）。

屠宰性能是衡量畜禽屠體品質(zhì)以及經(jīng)濟(jì)價(jià)值的重要指標(biāo)，一般認(rèn)為屠宰率在80%以上，全凈膛率在60%以上，肉雞的產(chǎn)肉性能良好（鄒劍敏，2017）。 侯振東（2015）在乳鴿上的研究發(fā)現(xiàn)，30 ～50 mg/kg 博落回散（血根堿含量為1.5%）對(duì)屠宰率、全凈膛率影響均差異不明顯。關(guān)于博落回對(duì)畜禽屠宰性能的研究鮮少報(bào)道。本試驗(yàn)中，飼糧補(bǔ)充博落回散對(duì)泰和烏骨雞的屠宰率和全凈膛率均無(wú)顯著影響， 說(shuō)明博落回散對(duì)泰和烏骨雞的的屠宰性能影響不大。

3.2 博落回散對(duì)泰和烏骨雞器官指數(shù)和血清生化的影響 器官指數(shù)為動(dòng)物器官重量與屠宰前的活體體重的比值， 健康及生長(zhǎng)良好的內(nèi)臟器官是畜禽生長(zhǎng)的基礎(chǔ)。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞的心臟、肝臟、腎臟、脾臟、肺臟指數(shù)及小腸指數(shù)無(wú)明顯影響。 反映了飼糧長(zhǎng)期添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞的內(nèi)臟不會(huì)造成腫脹或萎縮， 說(shuō)明500 mg/kg 博落回散對(duì)泰和烏骨雞臟器無(wú)不良影響。

血清生化指標(biāo)是反映機(jī)體生理狀態(tài)的重要指標(biāo)， 與機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝密切相關(guān)（Xie，2020）。 本試驗(yàn)中，飼糧添加博落回散降低了泰和烏骨雞血清BUN 含量，但是禽類的泌尿系統(tǒng)以尿酸的形式排出氮（計(jì)成，2006），盡管BUN 結(jié)果差異顯著，但是意義不大。另外，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞血清ALT 和AST指標(biāo)無(wú)明顯影響，血清ALT 和AST 在肝臟細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存較多，若肝臟細(xì)胞受損，細(xì)胞膜通透性增加導(dǎo)致ALT 和AST 釋放進(jìn)入血液循環(huán)，因此常用作肝臟健康評(píng)價(jià)的指標(biāo)（Perrone，1992），表明長(zhǎng)期添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞的肝臟無(wú)負(fù)面影響。

3.3 博落回散對(duì)泰和烏骨雞腸道形態(tài)的影響動(dòng)物生產(chǎn)的本質(zhì)是以動(dòng)物為“生物反應(yīng)器”將劣質(zhì)原料轉(zhuǎn)換成優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)食品的過(guò)程， 其中腸道是主要營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)換器官， 承載著飼糧中養(yǎng)分消化吸收轉(zhuǎn)運(yùn)代謝的重要功能，因此，腸道健康是飼料轉(zhuǎn)換效率和動(dòng)物生產(chǎn)性能的保障。 小腸是機(jī)體分泌消化酶與吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要部位， 是衡量動(dòng)物腸道健康的重要標(biāo)志， 而小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)與腸道的消化吸收功能或機(jī)體的生長(zhǎng)性能密切相關(guān)（Huycke，2018）。 小腸發(fā)育程度與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收呈正相關(guān)， 小腸的VH 和CD 是衡量腸道消化吸收功能的重要指標(biāo)（郭航，2008）。 VH 指數(shù)升高，表示吸收養(yǎng)分的腸道表面積增大；CD 指數(shù)越低， 代表成熟的上皮細(xì)胞越多， 分泌功能越強(qiáng)（戴必勝，2007）。 VH/CD 指數(shù)綜合反映小腸腸道黏膜結(jié)構(gòu)情況， 數(shù)值增大， 消化吸收功能增強(qiáng)（Ewtushik，2000）。 本試驗(yàn)結(jié)果顯示，博落回散組的十二指腸VH/CD 顯著提高。 試驗(yàn)表明，博落回對(duì)腸道健康具有積極影響（Yakhkeshi，2011）。Guo等（2021）研究表明，飼糧中添加200 mg/kg 博落回提取物（血根堿含量40%）提高了雪峰烏骨雞的VH/CD。Liu 等（2020）研究表明，飼糧中添加血根堿 （0.7 mg/kg 飼料） 提高了肉雞的十二指腸VH/CD。 表明博落回可以提高動(dòng)物腸道VH/CD，飼糧中添加博落回散對(duì)泰和烏骨雞的小腸形態(tài)有積極的影響，可以改善十二指腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)，有效促進(jìn)腸道營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，促進(jìn)腸道健康，從而提高其生產(chǎn)性能。 博落回散改善動(dòng)物腸道健康的機(jī)制可能是：（1）血根堿和白屈菜紅堿可以作用于腸道組織黏膜，修復(fù)、改善黏膜屏障功能（Liu，2016）；（2）調(diào)控腸道微生物菌群，抑制大腸桿菌繁殖（Chen，2018）；（3）促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的增殖、分化和更新（楊凡，2023）；（4）提高飼糧養(yǎng)分消化率（Goodarzi Boroojeni，2018），從而增強(qiáng)小腸消化吸收來(lái)提高機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

3.4 博落回散活性成分血根堿和白屈菜紅堿在泰和烏骨雞各組織中的殘留 基于藥物使用規(guī)范和食品安全保障的考量， 長(zhǎng)期添加的中獸藥產(chǎn)品應(yīng)該提供動(dòng)物源食品組織的殘留數(shù)據(jù)， 為食品源動(dòng)物的安全性制定指導(dǎo)原則提供科學(xué)支撐。 本試驗(yàn)中， 飼糧添加500 mg/kg 博落回散飼喂泰和烏骨雞56 d 后，心臟、腿肌、皮膚等食用組織未檢測(cè)到血根堿和白屈菜紅堿殘留， 說(shuō)明博落回散具有很好的食品安全性，適用于經(jīng)濟(jì)動(dòng)物長(zhǎng)期添加。岳龍（2015）等測(cè)定不同添加劑量（40 mg/kg 和80 mg/kg）血根堿（含量為1.5%）在三黃雞和攸縣麻鴨中殘留量，腎臟、肌肉及肝臟均低于5 ng/g。 楊娟（2015）對(duì)1 周齡肉雞飼喂添加了30 mg/kg 博落回散（血根堿和白屈菜紅堿含量為2.25%，其中血根堿1.5%）飼料100 d，停藥5 d 后，心臟、脾臟、腎臟檢測(cè)到血根堿，其中腎臟中殘留量最大值為（1.34±0.16）ng/g，7 d 后無(wú)殘留量。 血根堿和白屈菜紅堿主要保留在胃腸道中， 從胃腸道吸收的一部分在肝臟中代謝并在糞便和尿液中消除。 本試驗(yàn)評(píng)估博落回散在泰和烏骨雞組織中的殘留，試驗(yàn)結(jié)果與之前在其他動(dòng)物（Lu，2017；Ray，2014）殘留結(jié)果一致，即飼糧長(zhǎng)期添加500 mg/kg博落回散在泰和烏骨雞各器官和組織中無(wú)血根堿和白屈菜紅堿的殘留。因此，飼糧中長(zhǎng)期添加博落回散飼喂泰和烏骨雞在肌肉和內(nèi)臟等組織無(wú)殘留，不會(huì)構(gòu)成食品安全問(wèn)題。

4 結(jié)論

在基礎(chǔ)飼糧中添加500 mg/kg 博落回散對(duì)泰和烏骨雞的屠宰率和器官指數(shù)沒(méi)有顯著影響，但可以提高泰和烏骨雞的平均日增重和十二指腸的絨隱比以及降低料重比和血清尿素氮的濃度。 此外，博落回散在雞肉和內(nèi)臟等組織中無(wú)殘留，不具有食品安全風(fēng)險(xiǎn)。