柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠尿酸及相關(guān)酶活性的影響

張 平，方 瓊

（安徽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，合肥 230061）

高尿酸血癥是一種常見的代謝性疾病，主要由嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄不足引起。隨著社會進(jìn)步，人們的生活水平不斷提升，其發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。研究〔1〕顯示，我國高尿酸血癥總體患病率為13.3%。長期高尿酸血癥可誘發(fā)多種并發(fā)癥，如痛風(fēng)、2 型糖尿病、心血管疾病等〔2〕，高尿酸血癥已成為嚴(yán)重影響人類健康的常見疾病。

研究〔3〕發(fā)現(xiàn)，飲食在高尿酸血癥中具有不容忽視的影響，高尿酸血癥的防控中也強(qiáng)調(diào)了飲食管理。皂苷是目前人們發(fā)現(xiàn)食品中降尿酸的物質(zhì)之一，海參皂苷、番茄總皂苷等皂苷類物質(zhì)具有顯著降尿酸的作用〔4〕。柴胡皂苷D是中藥柴胡中分離提取的重要單體之一，研究〔5〕表明其具有解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜催眠、保護(hù)肝臟、抗腫瘤等活性。作為皂苷類物質(zhì)，目前尚無其降尿酸作用的研究。本研究建立高尿酸血癥大鼠模型，并采用不同劑量柴胡皂苷D 進(jìn)行處理，探討其在降尿酸方面的作用及其機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物成年SD 雄性大鼠，8~10 周齡，體質(zhì)量（250±10）g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，許可證號：SYXK（京）2022-0052，飼養(yǎng)于安徽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校實(shí)驗(yàn)動物中心。所有與動物有關(guān)的實(shí)驗(yàn)已通過動物倫理審批。

1.2 主要試劑與材料柴胡皂苷D（上海吉至生化科技有限公司，批號：S15760）；腺嘌呤（美國Amresco公司，批號：CAS：65-46-3）；乙胺丁醇（杭州民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司）；尿酸試劑盒、黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）試劑盒、腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA）試劑盒、肌酐試劑盒、尿素氮試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物分組、給藥和高尿酸血癥造模SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組和藥物組，其中藥物組又根據(jù)柴胡皂苷D 劑量的不同分為大劑量組（20 mg∕mL）、中劑量組（10 mg∕mL）和小劑量組（5 mg∕mL），每組10 只。對照組為正常大鼠，不進(jìn)行任何處理，其余各組大鼠每天上午灌胃腺嘌呤0.2 g∕kg+乙胺丁醇0.25 g∕kg〔5〕，建立高尿酸血癥模型。柴胡皂苷D 用0.9%氯化鈉溶液溶解，配制5、10、20 mg∕mL 藥液。柴胡皂苷D 各劑量組均以10 mL∕kg 的劑量灌胃給藥〔6〕，對照組和模型組大鼠均灌胃10 mL∕kg 0.9%氯化鈉溶液，每天上午9點(diǎn)給藥1次，共給藥28 d。

2.2 尿酸、XOD、ADA、肌酐、尿素氮的檢測給藥后14、21、28 d，對各組大鼠空腹采血，5 000 r∕min離心10 min，分離血清，用尿酸試劑盒檢測各組大鼠的血尿酸值。第28 天采集各組大鼠尿液，同樣方法檢測尿尿酸值。按試劑盒說明書檢測第28天采集的血清中XOD、ADA、肌酐、尿素氮的水平。

2.3 數(shù)據(jù)分析采用SPSS 25.0 軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用（±s）表示，2 組資料之間的分析采用t檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 不同劑量柴胡皂苷D 對大鼠血尿酸的影響給藥后21 d，與對照組相比，模型組大鼠血尿酸水平明顯升高，柴胡皂苷D中劑量組與模型組相比，血尿酸水平顯著下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。給藥后28 d，與模型組相比，柴胡皂苷D 大劑量組、中劑量組血尿酸水平顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠血尿酸的影響（mg∕L，±s，n=10）

表1 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠血尿酸的影響（mg∕L，±s，n=10）

注：與給藥前比較△P＜0.05；與對照組比較*P＜0.05；與模型組比較#P＜0.05。

組別對照組模型組柴胡皂苷D 大劑量組柴胡皂苷D 中劑量組柴胡皂苷D 小劑量組給藥前28.48±5.01 27.68±5.42 26.18±4.94 29.52±5.08 28.39±5.14給藥后14 d 29.39±7.01 28.16±6.40 23.27±5.25 25.35±8.03 29.20±6.72給藥后21 d 29.28±8.12 37.50±5.26△*36.65±5.39△33.69±6.32△#40.00±7.39△給藥后28 d 29.68±7.34 42.29±5.13△*33.19±5.45△#30.48±7.33#39.23±5.32△

3.2 不同劑量柴胡皂苷D 對大鼠尿尿酸的影響給藥后28 d，與模型組比較，柴胡皂苷D 大劑量組大鼠的尿尿酸水平無明顯降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而柴胡皂苷D 中劑量組和小劑量組大鼠的尿尿酸水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠尿尿酸的影響（mg∕L，±s，n=10）

表2 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠尿尿酸的影響（mg∕L，±s，n=10）

注：與給藥前比較△P＜0.05；與對照組比較*P＜0.05；與模型組比較#P＜0.05。

組別對照組模型組柴胡皂苷D 大劑量組柴胡皂苷D 中劑量組柴胡皂苷D 小劑量組給藥前298.87±43.28 295.19±31.22 315.51±33.38 286.31±29.54 281.01±28.15給藥后28 d 378.87±46.36 438.19±54.35△*411.51±34.83△264.31±36.73#289.01±25.02#

3.3 不同劑量柴胡皂苷D 對大鼠血清ADA 及XOD的影響給藥后28 d，模型組的ADA、XOD 水平較對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組相比，藥物組大鼠血清ADA及XOD水平顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠血清ADA及XOD的影響（U∕mL，±s，n=10）

表3 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠血清ADA及XOD的影響（U∕mL，±s，n=10）

注：與給藥前比較△P＜0.05；與對照組比較*P＜0.05；與模型組比較#P＜0.05。

組別對照組模型組柴胡皂苷D 大劑量組柴胡皂苷D 中劑量組柴胡皂苷D 小劑量組ADA給藥前47.48±12.02 50.68±11.24 46.26±10.98#51.52±11.08 44.39±10.14給藥后28 d 45.76±10.32 198.19±36.35△*75.52±26.84△#102.35±19.77△#83.17±25.56△#XOD給藥前34.28±8.12 32.50±5.26 35.65±5.39 30.69±6.32 31.00±7.39給藥后28 d 37.28±10.31 61.25±14.37△*47.55±9.80△#49.33±8.72△#45.20±10.06△#

3.4 不同劑量柴胡皂苷D 對大鼠血清肌酐和尿素氮的影響給藥后28 d，模型組的肌酐、尿素氮水平較對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組相比，藥物組大鼠肌酐及尿素氮水平顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

表4 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠血清肌酐及尿素氮的影響（±s，n=10）

表4 柴胡皂苷D對高尿酸血癥大鼠血清肌酐及尿素氮的影響（±s，n=10）

注：與給藥前比較△P＜0.05；與對照組比較*P＜0.05；與模型組比較#P＜0.05。

組別對照組模型組柴胡皂苷D 大劑量組柴胡皂苷D 中劑量組柴胡皂苷D 小劑量組肌酐∕（μmol∕L）給藥前45.48±8.26 46.69±9.12 44.26±8.97 42.31±9.16 43.17±9.26給藥后28 d 48.28±9.33 85.17±16.31△*64.52±11.83△#48.37±13.71#55.26±12.24△#尿素氮∕（mmol∕L）給藥前7.61±0.88 7.89±0.74 7.23±0.65 7.51±0.77 7.39±0.79給藥后28 d 7.38±0.91 17.21±3.74△*12.23±3.05△#8.89±1.37#10.09±2.13△#

4 討論

尿酸是嘌呤代謝的終產(chǎn)物，機(jī)體的尿酸水平與嘌呤代謝密切相關(guān)。高尿酸血癥是復(fù)雜的多基因遺傳病，已有研究〔7〕證明，多種與嘌呤代謝有關(guān)的酶的活性對尿酸生成有著顯著影響，嘌呤代謝過程中某些酶發(fā)生基因突變，致酶活性改變，使體內(nèi)的尿酸代謝紊亂，從而引發(fā)高尿酸血癥。其中，ADA參與核苷酸分解代謝，并發(fā)揮重要作用，可以使得腺嘌呤核苷在其催化下轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤核苷，并進(jìn)一步生成次黃嘌呤〔8〕。XOD 則參與嘌呤核苷酸分解代謝的終末階段，負(fù)責(zé)將次黃嘌呤催化氧化為黃嘌呤，并進(jìn)一步生成尿酸〔9〕。ADA 和XOD 都是嘌呤核苷代謝過程中的關(guān)鍵酶。

本研究采用腺嘌呤加乙胺丁醇灌胃的方式獲得高尿酸血癥大鼠模型，在給藥后第21 天及第28天測得大鼠血尿酸水平顯著升高，表明造模成功，為研究柴胡皂苷D 治療高尿酸血癥提供了重要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究結(jié)果表明，柴胡皂苷D 大劑量與中劑量組能顯著降低血尿酸值，中劑量組在給藥后28 d，大鼠血尿酸水平幾乎恢復(fù)至給藥前，兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給藥后28 d，藥物組大鼠的尿尿酸水平均低于模型組，這些均提示柴胡皂苷D 具有重要的降尿酸活性。

進(jìn)一步檢測了大鼠ADA 以及XOD 水平，結(jié)果顯示不同劑量的柴胡皂苷D 均可降低ADA 以及XOD 水平，說明柴胡皂苷D 主要通過抑制尿酸合成關(guān)鍵酶的活性，使機(jī)體尿酸水平降低，這與多數(shù)皂苷類藥物有關(guān)的研究相似〔10-11〕。檢測了大鼠給藥前與給藥后28 d 腎功能相關(guān)指標(biāo)（肌酐、尿素氮），發(fā)現(xiàn)尿酸水平的升高使得大鼠的腎功能明顯受損，而柴胡皂苷D 的干預(yù)可以使肌酐、尿素氮水平下降，說明柴胡皂苷D 具有保護(hù)腎功能的作用，尤其是在柴胡皂苷D 中劑量組中，可以發(fā)現(xiàn)肌酐、尿素氮水平恢復(fù)至給藥前的水平，給藥前與給藥后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在血尿酸的指標(biāo)中也同樣如此。這提示，適宜劑量的柴胡皂苷D 對控制機(jī)體尿酸水平以及保護(hù)腎功能方面值得進(jìn)一步探索。

綜上所述，柴胡皂苷D 可以通過降低ADA 以及XOD 水平，抑制尿酸生成，起到降尿酸的作用，同時(shí)適宜劑量的柴胡皂苷D 具有顯著的腎臟保護(hù)功能。但本研究僅僅是針對高尿酸血癥的初步研究，高尿酸血癥的發(fā)生以及對機(jī)體的影響還涉及諸多方面，如氧化應(yīng)激、炎癥小體等〔12-13〕，值得進(jìn)一步探索與研究。目前關(guān)于皂苷類藥物對于降尿酸活性的研究仍較有限，本研究可以為未來尋找新型降尿酸潛力的藥物提供研究方向。